补肾调肝方对多囊卵巢模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a及激素水平的影响

陈 英,梁 辉，王 娜

河北省保定市妇幼保健院生殖医学科 (保定071000)

补肾调肝方对多囊卵巢模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a及激素水平的影响

陈 英,梁 辉，王 娜

河北省保定市妇幼保健院生殖医学科 (保定071000)

目的：探讨补肾调肝方对多囊卵巢模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a及激素水平的影响。方法：选取雌性大鼠(SD)45只，随机分为PCO模型组36只和正常对照组9只。参照Poretsky法，将造模成功的36只模型随机分为4个组，各9只。分别给予补肾调肝汤68.66 g/kg(中药大剂量组)、17.17 g/kg(中药小剂量组)，二甲双胍250 mg/kg(二甲双呱组)和蒸馏水1ml/100 g(对照组)体重灌胃，1次/d，连续用14 d。放射免疫法检测T、E2、LH、FSH、INS水平；用ELISA法检测TGF-β1、IGF-1、TNF-a水平。结果：中药大剂量组与其他组比较，T水平明显降低，E2水平、E2/T比值明显升高，血清TGF-β1、IGF-1水平升高，TNF-a水平降低，比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：补肾调肝方能降低PCO模型大鼠血清T水平，升高E2水平，也能够调节垂体LH、FSH的分泌，同时能够使PCO模型大鼠的血清TNF-a水平降低，TGF-β1、IGF-1水平升高，在一定程度上对恢复PCO模型大鼠的生殖功能有促进作用。

多囊卵巢综合征(Polycystic ovarian syndrome,PCOS)属于一种高度异质性疾病，主要临床特征为慢性无排卵和高雄激素血症。具文献证实[1-2]，PCOS发病和卵巢内部的调节因子密切相关，特别是转化生长因子-β1(TGF-β1)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)。本实验采用PCO模型，以观察补肾调肝汤对大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a及激素水平的影响。

材料与方法

1 材 料 雌性SD大鼠54只，购自上海加科生物有限公司。适应环境1周，自由饮水摄食。补肾调肝汤由白芍、菟丝子、柴胡、龙胆草、仙灵脾等12味中药组成，由本院中医医师提供，将其煎制浓缩成浸膏(生药5.89 g/ml)；二甲双胍由上海施贵宝有限公司提供，国药准字H20023370。血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、胰岛素(INS)、TGF-β1、IGF-1、TNF-a免疫试剂盒由北京华英生物有限公司生产。

2 方 法

2.1 制备模型和分组:雌性SD大鼠45只，体重252 g～275 g，随机分为PCO模型组36只和正常对照组9只。参照Poretsky法[3]，PCO模型组大鼠给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)1. 5 U皮下注射，2次/d，连用22 d，胰岛素(INS)从第1 d～11 d内从0.5 U/d剂量开始应用，逐渐加大剂量至6.0 U/d，维持此剂量至第22 d，造模期间饮水用5%的葡萄糖溶液代替，造模最后1 d禁食食物过夜。所有大鼠每周称1次体重，并每天行阴道涂片检测，在第23 d时，进行眼眶后静脉取血，检测血清INS、T水平。PCO模型组大鼠血清INS、T水平升高，且阴道涂片结果失去完整的动情周期，表示造模成功。将造模成功的36只模型随机分为对照模型组、二甲双胍组、中药大、小剂量组各9只。

2.2 用药方法:中药大、小剂量组分别给予补肾调肝汤(68.66 g/kg、17.17 g/kg)灌胃，二甲双胍组给予250 mg/kg灌胃，正常对照组和对照模型组给予蒸馏水1 ml/100g体重灌胃，各组均1次/d，连续用14 d。

3 检测指标 在给大鼠用药期间，阴道涂片每天检测，最后一次给药后禁止饮食，过夜，第2 d称重，采腹股沟静脉血，血清分离后，用放射免疫法检测T、E2、LH、FSH、INS；用ELISA法检测TGF-β1、IGF-1、TNF-a水平。

结 果

1 补肾调肝汤对PCO模型T、E2水平的影响 对照模型组与正常对照组比较，T水平明显升高，E2水平、E2/T比值明显降低(P<0.05)；中药大剂量组与对照模型组比较，T水平明显降低、E2水平、E2/T比值明显升高(P<0.05)；小剂量组和对照模型组比较，T、E2水平也有改善，但差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1 补肾调肝汤对PCO模型大鼠T、E2的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与对照模型组比较，#P<0.05

2 补肾调肝汤对PCO模型大鼠FSH、LH、INS的影响 对照模型组与正常对照组比较，PCO模型大鼠FSH、LH、INS水平明显升高(P<0.05)；中药大剂量与对照模型组比较，PCO模型大鼠FSH、LH、INS水平明显降低(P<0.05),见表2。

表2 补肾调肝汤对PCO模型大鼠FSH、LH、INS的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与对照模型组比较，#P<0.05，△P<0.01

3 补肾调肝汤对PCO模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a水平的影响 对照模型组与正常对照组比较，PCO模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1水平降低，TNF-a水平升高(P<0.05)；中药大剂量组与对照模型组比较，PCO模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1水平升高，TNF-a水平降低(P<0.05)，见表3。

表3 补肾调肝汤对PCO模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a水平的影响(pg/ml)

注：与正常对照组比较，*P<0.05，△P<0.01；与对照模型组比较，#P<0.05

讨 论

补肾调肝汤对PCO模型大鼠激素的影响 一般情况下，成熟女性生殖功能及月经周期均受下丘脑-垂体-卵巢轴调节和控制。下丘脑能够分泌促性腺激素释放激素，刺激垂体，释放LH、FSH，卵巢由于LH、FSH的作用，合成并分泌雌激素和雄激素[4]。PCOS患者由于下丘脑-垂体-卵巢轴调节失常，导致血FSH水平降低(或正常)，LH水平升高，LH/FSH≥2；雄激素增多，使卵巢发生包膜纤维化、卵泡闭锁等；非周期性腺外转化成的E1导致体内雌激素水平E1高于E2，最终使下丘脑-垂体反馈功能失常。中医理论认为[5]，月经后期、闭经、不孕症等疾病与多囊卵巢综合征相似，并将其病因归为：外感寒邪、情志失调、淤血、痰湿。其中痰湿和淤血是致病因素，又是病理产物，病机主要包括虚实两类，实证为寒凝血瘀，气滞血瘀，痰湿壅塞。虚症为肾阴亏虚；气血虚少，脾胃虚弱；肾阳虚衰，寒虚内生；肾虚血燥。本实验大鼠所用处方中以补肾为主，如女贞子、仙灵脾、菟丝子等，起到补肾阳、补肾阴、补肾精等功效；其次为调肝药，如柴胡、龙胆草、白芍、当归等起到了疏肝理气、疏肝解郁、养血柔肝及清肝泻火等功效。诸药共奏补肾调肝之功效。从西医理论研究证实[6]，其可以改善PCOS患者雌激素、雄激素水平，从而改善下丘脑-垂体-卵巢轴调节失常。本实验结果也显示，补肾调肝汤大剂量能明显使大鼠激素水平和对照模型组比较，有明显改善。和上面的研究相符。

补肾调肝汤对PCO模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a水平的影响 体外研究发现[7]，TGF-β以剂量依赖的形式促进大鼠卵泡膜中间质细胞的分化与增殖；在卵泡膜细胞内占据优势，能够使细胞色素P450c17酶活性受到抑制，减少雄激素合成。本研究结果显示，PCOS大鼠和正常大鼠比较，TGF-β1水平明显降低，而补肾调肝汤(中药大剂量组)能明显升高TGF-β1水平，且受剂量的影响。IGF-1主要由肝脏分泌的多肽，包括70个氨基酸残基，在卵巢、脂肪等组织也可以合成。有研究显示[8]，高IGF-1可以使细胞色素P450c17酶活性增强，刺激卵泡膜合成过量的雄激素，使高雄激素血症加重。还可以促进卵巢颗粒细胞的分化和增殖。在韩霞[9]的研究中也有相似结果。

[1] 郑 君.瓜石汤对初老雌性大鼠卵巢储备功能影响的实验研究[D].成都：成都中医药大学，2011,5:15-34.

[2] 申可佳. 护卵汤对GnRHa超排卵大鼠卵泡发育的影响研究[D].长沙：湖南中医药大学，2012,5：4-38.

[3] 张艳红. 补肾、调肝方对小鼠月经模型子宫内膜修复机制影响的比较研究[D].石家庄：河北医科大学，2016,4:24-44.

[4] 王 浩.益肾调周法干预卵巢早衰模型法术机制的实验研究[D].石家庄：河北医科大学，2012,5:15-36.

[5] 薛 方.调经助孕方对DOR模型大鼠卵泡发育障碍影响的实验研究[D].武汉：湖北中医药大学，2014,5:35-41.

[6] 王进进，王宏伟，谈 勇.补肾活血法治疗肾虚血瘀型不孕的研究进展[J].中国中医基础学杂志，2016,22(10)：1420-1422.

[7] 周娴颖，周 莉，孙组越.用于治疗多囊卵巢综合征的中药药理学作用机制研究[J].中国中药杂志，2016，41(20)：3715-3717.

[8] 韩燕青.中药治疗多囊卵巢综合征文献数据库的建立及中药疗效的数据分析[D].北京：北京中医药大学，2011,5:4-25.

[9] 韩 霞.补肾安胎中药对着床障碍小鼠子宫VEGF-MMP-9mRNA表达的影响[J].陕西中医，2013,34(1)：497-499.

(收稿：2017-04-06)

The effect of Bushen Tiaogan decoction on serum TGF-β1 IGF-1,TNF-a and hormone levels in rats with polycystic ovary syndrome

Chen Ying,Liang Hui,Wang Na

Department of Reproductive Medicine,Baoding Maternal and Child Health Hospital (Baoding 071000)

Objective: To investigate the effects of Bushen Tiaogan decoction on serum TGF-β1 ,IGF-1,TNF-a and hormone levels in rats with polycystic ovary syndrome (PCOS). Methods: Female rats (SD),45 were randomly divided into 36 PCO model group and control group 9.Reference poretsky method,the successful model 36 models were randomly divided into 4 groups,each 9 were given the decoction of Bushen Tiaogan and the liver 68.66 g/kg (high-dose group),17.17 g/kg (small groups of Chinese medicine),250 mg/kg metformin (metformin Gung),1 ml/100g and distilled water (control group) weight loss prednisone 1/d,14 d in a row.RIA T,E2,LH,FSH,INS level;By ELISA method for detecting levels of TGF-beta 1,IGF-1,TNF-a.Results: The high-dose group compared to other groups,T levels were significantly lower E2,E2/T ratio increased significantly increased serum levels of TGF-beta-1,IGF-1,TNF-a levels,there was a significant difference (P<0.05). Conclusion: Bushen Tiaogan decoction can reduce the level of serum T in PCO model rats,and can increase the level of E2，can also regulate the secretion of pituitary LH,FSH,at the same time,the serum TNF-a level of PCO model rats is decreased,TGF- 1,IGF-1 levels are elevated,to some extent,it can promote the reproductive function of PCO ratsn.

Polycystic ovary syndrome/traditional Chinese medicine therapy @Bushen Tiaogan decoction Rats Animal experimentation

多囊卵巢综合征/中医药疗法 @补肾调肝汤 大鼠 动物实验

R711.75

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.08.077