春石斛兰的组培快繁

郭英铎+张秀珊+曾宝珰+洪生标+郑运欢+黄茜莉+陈少玲

引言

以自育杂交后代春石斛兰的侧芽为材料，通过试验，筛选春石斛兰最适培养基配方，研究其组培快繁技术，建立一套春石斛兰组培快繁的技术体系，为春石斛兰种苗生产奠定技术基础，实现工厂化生产的目标。结果表明：1/3 MS + 6-BA 5.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，蔗糖20.0 g/L 、琼脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，对于丛生芽的增殖效果较好。

石斛属（Dendrobium）为兰科（Orchidaceae）中的第二大属，依开花时间不同，石斛兰可分为秋石斛和春石斛，春石斛园艺品种主要由原产于我国西南和华南地区的金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl）与亚热带原生种培育而成。春石斛兰又名美花石斛，因春天开花而得名，多年生附生兰科植物，与常见的秋石斛相比，具有株形紧凑、花多、色艳、有香味，是近年来比较受欢迎的盆栽花卉之一。春石斛最先由英国从中国引入欧洲栽培，并进行品种改良。第二次世界大战后，日本大力发展春石斛，与其他品种的石斛杂交，培育出许多园艺品种。汕头市农业科学研究所在多年引种、栽培和杂交育种探索的基础上，不断筛选和培育出适宜本地区推广的优良品种，并初步建立一套包括种苗扩繁、种苗培育、花期调控及盆花生产的技术方法。在规模化生产中，春石斛主要采用茎段扦插、高位芽切取、组织分生培养3种方法进行繁殖，而组培分生培养与其它两种方法相比，具有生长整齐，长势旺盛，易于标准化生产等特点，利于最新育种成果的推广应用。本试验主要研究总结春石斛兰杂交后代的组培快繁技术，为盆花春石斛兰标准化生产提供技术保障，更好地加快我所选育良种的推广应用。

1 材料和方法

1.1 供试材料

试验在汕头市农业科学研究所的花卉育种与推广研究室的组培中心进行，供试材料是从杂交的春石斛兰果荚播种后代筛选株型和花色适合当地市场推广的优良品系的茎段侧芽或新芽茎尖为外植体。每年3～5月份为春石斛兰新芽抽生旺季，此时切取新生侧芽或茎尖，用自来水冲洗干净，置于超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗3次，再用0.I%Hg Cl2溶液消毒8分钟，无菌水冲洗3次，继续用0.I%Hg Cl2溶液消毒5分钟，无菌水彻底冲洗5次，除去包叶接入1/3 MS + 6-BA 10.0 mg/L，蔗糖20.0 g/L 、琼脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L的诱导培养基，将形成的不定芽，切割成1.5cm，带2片叶的外植体作为试验材料。

1.2 试验方法

1.2.1 试验设计

将无菌外植体接入培养基进行为期60d的培养，60d后对不定芽的个数进行统计，筛选出最适培养基配方，培养条件为温度（26±2）℃，光照强度1300～1500lx，光照时间为10h/d。

1.2.2 不同BA浓度对组培苗的影响

以1/3 MS为基本培养基，加入蔗糖20.0 g/L 、琼脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，然后分别加入6-BA 0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 3.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 5.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 7.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L和6-BA 9.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L形成5个不同激素浓度的培养基进行培养，pH调整为 5.8，以BA浓度为0 mg/L的培养基为对照。每个处理接种10瓶，每瓶接种一个无菌外植体。

1.2.3 壮苗和生根试验

借鉴蝴蝶兰组培扩繁技术，选取健壮的组培苗，从基部分开，接入用于蝴蝶兰过度和生根的培养基花宝+蛋白胨+活性炭+香蕉泥+马铃薯泥+IBA 0.3mg/L+NAA 0.3mg/L对试验材料进行培养，60d后统计生根数和生根率。

2 结果与分析

2.1 不同BA浓度对组培苗的影响结果

由表1可知，细胞分裂素6-BA和生长素类似物NAA的组合对春石斛兰不定芽的继代增殖有一定的效果，在NAA 0.1 mg/L浓度不变的情况下，随着6-BA的浓度增加，增殖倍数先上升而后下降，在6-BA浓度为5.0 mg/L的时候增殖倍数最大，高于其它处理。

2.2 壮苗和生根结果

由表2统计可知春石斛兰组培苗的生根率为80±5%，生根数2.1±0.5条。

3 结论与讨论

汕头市农业科学研究所花卉育种与推广研究室是以蝴蝶兰的组织快繁和栽培为主要研究方向的部门，所以本试验是建立在蝴蝶兰培养基的基础上进行，其中的二次消毒也是在大量蝴蝶兰花梗消毒效果总结下来的方法，能有效降低污染率和提高成活率。

试验结果表明1/3 MS、蔗糖20.0 g/L 、琼脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，pH5.8在不同激素浓度配比的情况下是适合春石斛兰的继代增殖的。在本试验中，用5个不同浓度的6-BA与NAA 0.1 mg/L形成激素组合进行培养，结果发现春石斛兰的不定芽增殖倍数随着6-BA浓度的升高呈先升后降的趋势，不定芽的增值率高于其它浓度的处理，这个变化趋势跟蝴蝶兰进行组织培养相似，随着6-BA浓度的升高出现增殖倍数先升后降的结果，不同的是，春石斛兰增殖的激素浓度相对较低，在6-BA浓度为5.0 mg/L时增殖倍数最高，然后出现下降趋势，而蝴蝶兰增殖所需激素浓度相对较高，在本试验中，6-BA浓度为7.0 mg/L或者更高时，春石斛兰的增殖倍数已出现下降趋势，而蝴蝶兰增殖倍数仍比低浓度的要高，呈上升趋势。因此，通过本试验，我们筛选6-BA浓度为5.0 mg/L对应的配方为春石斛兰最佳配方。

春石斛兰在经过几次继代培养达到一定数量后就要进行壮苗和生根处理，因为增殖后的组培苗生长不均匀，苗况不齐，一些苗况较差的组培苗移栽后很容易死亡，所以要进行壮苗和生根。添加香蕉泥对石斛兰的壮苗和生根有明显促进作用，而加入活性炭能有效防止组培苗褐化，根系更粗壮，叶色浓绿，并促进组培苗鲜重的增加。春石斛兰组培苗使用蝴蝶兰的过度和生根培养基也能取得较好的效果，所以本试验没有进一步研究。根据本所在春石斛兰栽培方面的研究，得出组培苗出瓶移栽最好是每年10月到清明节之前，这时对经过壮苗和生根的组培苗进行出瓶移栽的存活率是比较高的。

作者简介：郭英铎（1984-），男，汉族，汕頭，助理农艺师，大学本科，园艺。

*通讯作者：张秀珊（1972-），女，汉族，梅州，高级农艺师，大学本科，园艺。

作者单位：广东省汕头市农业科学研究所endprint