超高压提取罗汉果中罗汉果甜苷V的工艺优化

罗汉果为葫芦科植物罗汉果Siraitia grosvenorii C. Jeffrey ex A. M. Lu et Z. Y. Zhang的干燥果实，性凉、味甘，清热润肺，滑肠通便，用于肺火燥咳，咽痛失音，肠燥便秘。罗汉果苷V作为罗汉果中的主要成分，是评价其质量的指标性成分[2]。本实验以罗汉果甜苷V的提取率为评价依据。

超高压技术应用于中药有效成分提取时，是利用100MPa以上的流体静压力作用于溶剂和中药的混合液，保压一段时间（几分钟）后卸压，然后进行分离纯化。超高压提取是在一个密闭的环境中进行的，没有溶剂的挥发，因此该技术更加符合绿色环保的要求。

本文采用超高压技术，通过单因素实验结合正交试验优化了罗汉果甜苷V的提取工艺，以期为开发罗汉果皂苷类活性成分提供理论依据。

材料与方法

材料与试剂。罗汉果；罗汉果甜苷标准品；甲醇、乙醇（分析纯）；乙腈为（色谱纯）；水为蒸馏水。

主要仪器与设备。SB25-12D型超声波提取仪；HPP.L3型超高压生物提取设备；岛津高效液相色谱仪LC-15C。

实验方法。

（1）样品的预处理

将罗汉果干燥后粉碎，过40目筛得到样品。

（2）提取罗汉果甜苷V的方法

精确称量用同一批次的样品0.5g，分别按照1：15的料液比加入纯净水，用不同的方法提取罗汉果甜苷。所有实验重复三次，取平均值。提取方法：

①超高压提取（UPE）：提取条件的确定见第二部分[4]；

②超声提取（UAE）：30KHz下，分别提取10min和30min；

③加热回流提取（HRE）：100℃下分别水浴提取10min、30min和60min。

（3）色谱条件

提取液用0.45m微滤膜过滤，再用乙醇定容到50ml。检测条件为：Hypersil ODS C18色谱柱（4.0 mm×150 mm， 5m）；柱温30℃；检测波长203nm；进样量10μL；流动相A为乙腈，B为水；流速1mL·min-1；梯度洗脱程序为：0-15min，23%乙腈；15-16min，23%-100%乙腈；16-25min，100%-100%乙腈。

（4）标准曲线的绘制

精确配制0.59mg/mL的罗汉果甜苷标准品溶液，分别进样10μL、16μL、28μL、35μL、40μL、60μL，测得标准溶液的HPLC图谱。绘制标准曲线，得回归方程：Y=496.3+38.92X，R2=0.9999。

结果与讨论

单因素实验。

（1）提取溶剂对罗汉果甜苷V提取率的影响

罗汉果甜苷的提取溶剂采用纯甲醇、纯乙醇、80%甲醇、80%乙醇和纯净水，选取料液比1：15（g/ml），200MPa下浸提2min，结果如图1所示。

从图1可知，纯净水提取率最高，且无毒、无不良气味。所以选择纯净水作为提取溶剂。

（2）浸泡时间对罗汉果甜苷V提取率的影响

提取溶剂为纯净水，选取料液比1：15（g/ml），分别浸泡0、2h、4h、7h和15h，200MPa下提取2min，结果如图2所示。

由图2可得，纯净水可以在较短的时间内溶解目标化合物，不需要浸泡。

（3）提取压力的影响

在其它条件相同的情况下，分别在压力100、200、300、400、500Mpa下浸提2min，结果如图3所示。

压力多方面影响了罗汉果甜苷V得率。由图3可以看出，200Mpa之前提取率随着压力的升高而提高，超过200MPa后提取率反而有所下降。因此，选取200Mpa作为提取压力。

（4）保压时间对罗汉果甜苷V提取率的影响

在其它条件相同的情况下，200Mpa下分别浸提1、2、3、4、5min，提取结果见图4。

由图4可见，保压时间3min最适宜。

（5）不同料液比对罗汉果甜苷V提取率的影响

在其它条件相同的情况下，选取料液比分别为1：5、1：10、1：20、1：30、1：40（g/mL），浸提3min，结果如图5。

由图5可得，选取料液比1：10左右比较适宜。

正交试验优化。

对以上单因素实验取得的结果，用正交试验进一步优化。见表1、表2。

由表2可知，影响罗汉果甜苷V提取率最大的因素是料液比，其次是压力。由极差分析结果得到的最佳提取工艺为：料液比1：10，压力300MPa，保压时间3min，提取率为52.269mg/g。

对比其他提取工艺。对比了UPE、UAE和HRE的提取技术，结果如表3所示。

由表可知，超高压的提取时间仅为3min，且提取率远高于超声和加热回流的提取率。所以，超高压提取罗汉果中的罗汉果甜苷Ⅴ是一种低耗高效的提取工艺。

本文对罗汉果甜苷进行了超高压提取。与传统方法相比，超高压提取能耗低、提取率高，且后續操作简便易行。常温提取能保持罗汉果甜苷的药理活性。而且超高压提取技术环境友好，是对罗汉果甜苷进行提取可优先考虑的方法。

作者简介：

王迪（1989-），女，山东聊城人，硕士研究生，聊城大学东昌学院，助教，研究方向：食品质量与安全。