成都地区犬大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性试验

孙艳 安扎拉/四川省凉山州畜牧兽医科学研究所陈朝喜/西南民族大学生命科学与技术学院

成都地区犬大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性试验

孙艳 安扎拉/四川省凉山州畜牧兽医科学研究所陈朝喜/西南民族大学生命科学与技术学院

大肠杆菌是人类和动物常见的肠道微生物，在维持肠道正常生理机能上起重要作用，也是引起多种疾病的病原体，包括胃肠、泌尿道的感染和败血症，给人和动物的生命带来威胁。在物质生活极丰富的现今社会，随着生活结构的转变，越来越多的人将情感寄托在宠物身上，他们已经把宠物作为家庭的一员，而宠物中尤以犬最多。犬大肠杆菌病的治疗方法很多，关键是要早发现、早治疗，治疗常用抗生素和磺胺类以及其它消炎止泻的药物。近年来，抗菌药物的广泛使用和运用不当或者是滥用的情况，引起大肠杆菌的耐药菌株越来越多，因为大肠杆菌对药物的选择压力很敏感，易产生耐药性，使得临床工作者对这类疾病的防治越来越难。本试验通过对成都市宠物医院和宠物市场采集的犬粪便样品做分离、培养、纯化、生化鉴定大肠杆菌，并进行药敏试验研究，为临床选择抗菌药物治疗犬大肠杆菌病和耐药性监测提供有力依据。

一、材料和方法

1.材料

（1）样本

2010年采自成都市2家宠物医院和2个宠物市场的犬粪便，犬的种类分别为贵宾，博美，松狮，北京犬，牧羊，萨摩耶，哈士奇，藏獒，杂种犬等，年龄在30日龄到十岁不等。

（2）药物

头孢曲松购自中诺药业有限公司，庆大霉素购自郑州铃锐有限公司，妥布霉素购自太极集团西南药业，左旋氧氟沙星购自德阳华庚药业有限公司，小诺霉素购自江西制药有限公司，氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶购自南京金盾药业有限公司，林可霉素购自江苏吴中药业有限公司。

2.方法

（1）大肠杆菌的分离和鉴定

方法，将纯化后的革兰氏阴性短杆菌的单菌落，接种于LB肉汤，37℃培养16～18 h，取菌液5～10μl，接种于肠杆菌科细菌生化编码微量鉴定管中，氨基酸和氨基酸对照滴加石蜡1～2滴，37℃培养24 h后，对菌株的生化结果进行判断并编码，按编码值检索肠杆菌科细菌生化编码表进行细菌鉴定。

（2）药敏片的制作

将定性滤纸用普通打孔器打成直径为6 mm的圆形纸片，取800片分别放入8个干燥的小瓶中（每瓶100片），以单层牛皮纸包扎好，115℃高压灭菌20 min后，置于37℃培养箱中数天使其完全干燥；在操作台中，按照100片纸片吸收0．4μL水的比例加入配好的药液400μL；不时翻动纸片，使滤纸片将药液均匀吸净，一般浸泡30 min即可，同时记录药物名称，于37℃培养箱中过夜。

（3）药物敏感性试验

采用纸片扩散法进行药物敏感性检测，按照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）推荐的操作程序进行，参照CLSI的标准判断耐药、敏感或中介，同时用大肠杆菌ATCC 25 922 作为质控菌株。质控菌株大肠杆菌由西南民族大学药理实验室提供

表1 145株犬大肠杆菌对抗菌药物的敏感性

二、结果

1.大肠杆菌的分离和鉴定

从200个样本中共分离鉴定大肠杆菌145株，每只动物仅分离1株大肠杆菌。

2.药敏试验结果

145株大肠杆菌对8种抗菌药物的耐药情况见表1。如表1所示，大肠杆菌对8种抗菌药物的耐药率都高，其中对林可霉素耐药率最高，达到84．7%，对左旋氧氟沙星的耐药率为80．0%，对其余6种药物耐药率也超过50%，对头孢曲松、庆大霉素、妥布霉素、小诺霉素、氟苯尼考和磺胺间甲氧嘧啶的耐药率分 别 为 57．9%、67．6%、72．4%、、63．4%、79．3%、和56．6%。

145株分离的犬大肠杆菌全部对至少3种药物耐药，除7株大肠杆菌对3种抗菌药耐药外，其余138株对4种以上抗菌药有耐药性，有26株大肠杆菌同时耐8种药物。4种药物耐药菌株为33株（22．76%），5种药物耐药菌株为7株（4．83%），6种药物耐药菌株为46株（31．72%），7种药物耐药菌株为26株（17．93%）。

三、小结

国内已有关于宠物源细菌耐药性的报道，不同地区的宠物源细菌耐药情况不同，但耐药细菌呈现多重耐药，并且对抗菌药的耐药呈上升趋势。本研究药敏试验结果表明，分离的犬大肠杆菌对多种抗菌药物产生耐药性，其中大肠杆菌对头孢曲松、庆大霉素、左旋氧氟沙星和氟苯尼考的耐药率高于相关文献报道，也远远高于欧美国家对宠物源细菌耐药性调查结果。

目前，动物源细菌耐药性问题已引起全世界的广泛关注，中国、美国、加拿大、丹麦、日本、韩国、欧盟等国家建立了细菌耐药性监测系统，但我国只对食源动物细菌耐药性监测。犬作为伴侣动物，与人接触亲密，他们共同生活的环境是细菌传播的条件，犬作为细菌储存库，是细菌传播的中介。已报道的美国有一病例，宠物主人被有抗菌药物治疗史的犬咬后，发现感染了来自犬的多重耐药大肠杆菌，也有研究证实从一3岁儿童分离的大肠杆菌与从他家腹泻犬分离的大肠杆菌完全一致，还有就是人源氟喹诺酮类药物耐药猪霍乱沙门氏菌来源于猪，表明食源动物和人，宠物与人之间发生了耐药菌株的克隆传播，说明耐药菌株可将耐药基因转移至人体引发疾病，对人体健康构成潜在危害。因此相关部门应重视宠物耐药性问题，加强宠物临床抗菌药物应用的监督，制订药物使用规范，以指导临床合理用药。

参考文献（略）