诱导型一氧化氮合酶（iNOS）对重症急性胰腺炎时胰岛内分泌功能的影响

李昌+母珍珍+王磊+韩冰+王仰亮+蓝诺

[摘要] 目的 研究重症急性胰腺炎大鼠胰腺内分泌功能的变化，探讨iNOS在胰腺内分泌功能损伤中的作用。方法 2015年7月—2016年7月在济宁医学院动物实验中心取健康雄性Wistar大鼠，体重250～300 g，24只随机分成2组，对照组12只，SAP组12只，应用5%牛磺胆酸钠逆行注入大鼠胰胆管制作重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis， SAP）大鼠模型，检测血清淀粉酶、血糖浓度；分离胰岛，行葡萄糖刺激胰岛素分泌试验；应用NOS试剂盒检测胰岛iNOS的活性。结果 SAP组血糖、血清淀粉酶、葡萄糖葡萄糖刺激胰岛素分泌实验和胰岛的iNOS活性分别为：（11.50±1.36）mmol/L、（1 575.36±435.33）mIU/L、（3.90±0.78）mIU/L、（10.36±2.14）mIU/L和（30.27±3.57）U/mL；对照组分别为：（5.32±1.25）mmol/L、（104.18±35.58）mIU/L、（7.82±1.03）mmol/L、（25.60±3.72）mmol/L和（7.79±0.58）U/mL；两组分别相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 重症急性胰腺炎时对胰岛功能影响较大SAP胰岛功能损伤与iNOS活性增强有关系，对胰岛素分泌产生负面影响。

[关键词] 急性胰腺炎；动物模型；诱导性一氧化氮合酶；内分泌功能；胰岛素

[中图分类号] R657 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）06（b）-0042-03

[Abstract] Objective To research the changes of rat endocrine function of severe acute pancreatitis and study the effect of iNOS in the pancreatic endocrine function injuries. Methods 24 healthy male rats in the animal experimental center of Jining Medical College whose weight was 250～300 g from July 2015 to July 2016 were randomly divided into two groups with 12 rats in each， and the serum amylase and blood glucose concentration were tested and the insulin was isolated and the rats were given the glucose-stimulated insulin secretion test， and the insulin iNOS activity was tested by the NOS kit. Results The differences in the blood glucose， serum amylase， glucose and glucose stimulated insulin secretion test and iNOS activity of insulin between the SAP group and the control group were statistically significant[（11.50±1.36）mmol/L，（1 575.36±435.33）mIU/L， （3.90±0.78）mIU/L， （10.36±2.14）mIU/L， （30.27±3.57） U/mL vs （5.32±1.25）mmol/L，（104.18±35.58）mIU/L，（7.82±1.03）mmol/L，（25.60±3.72）mmol/L（7.79±0.58）U/mL]（P<0.05）. Conclusion The effect of severe acute pancreatitis on the insulin function is bigger， and the SAP insulin function injury is related to the enhancement of iNOS activity and has a negative effect on the insulin secretion.

[Key words] Acute pancreatitis； Animal mode； Inducible nitric oxide synthase； Endocrine function； Insulin

急性胰腺炎（ acute pancreatitis，AP）是普外科多发的疾病，随着生活水平提高，发病率在增加，同时常伴有糖代谢异常，提示急性胰腺炎对胰腺胰岛功能有一定的影响[1-2]。SAP时更易发生胰腺内分泌功能损伤，近来研究表明胰腺内外分泌系统之间有很强的功能联系[3]。SAP胰岛功能改变的机制尚不十分清楚。尤其是重症胰腺炎时，会加剧胰腺组织释放的炎症介质和细胞因子影响胰腺炎病程[4-6]，促使iNOS激活，表达，这，iNOS的mRNA，翻译成iNOS，iNOS形成二聚体催化NO合成。正常情况下NOS是胰岛β细胞分泌胰岛素的重要递质，因此iNOS激活表达是SAP胰岛功能改变可能有一定联系。该实验2015年7月—2016年7月在济宁医学院动物实验中心取健康雄性Wistar大鼠24只进行随机分组建模研究，探討iNOS活性增强是否参与SAP胰岛功能损伤，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

取健康雄性雄性Wistar大鼠，24只，8周龄，体重250～300 g，由济宁医学院实验动物中心提供，适应性喂养1周后，实验分组及建模：随机分成2组，对照组12只，SAP组12只。大鼠SAP模型建立方法：大鼠禁食水12 h。参考Aho等的方法建模型。对照组：开腹翻动大鼠胰腺3次。两组样本资料的数量、年龄、体重等差异无统计学意义（P>0.05）。主要试剂：牛磺胆酸钠；T4009胶原酶；Histopaque-1077。

1.2 标本采集

①成模1 h后，开腹自下腔静脉采血。检测血清淀粉酶、血糖。②胰岛细胞分离纯化原位灌注胶原酶V联合Histopaque 1077纯化的方法分离纯化大鼠胰岛。③葡萄糖刺激胰岛素分泌试验：测定胰岛素水平。④胰岛组织iNOS活性测定：使用NOS检测试剂盒测定胰岛组织中iNOS活性。

1.3 统计方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较独立样本的t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

SAP组血糖高达到（11.50±1.36）mmol/L，与对照组（5.32±1.25）mmol/L相比，差异有统计学意义（P<0.05）。SAP大鼠血清淀粉酶高达（1 575.36±435.33）IU/L，与正常对照组（104.18±35.58）mIU/L相比，差异有统计学意义（P<0.05）。SAP组大鼠在3.3、16.7 mmol/L葡萄糖刺激下，胰岛素分泌量分别为（3.90±0.78）mIU/L和（10.36±2.14）mIU/L，均明显低于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05），SAP大鼠升胰岛iNOS活性高达（30.27±3.57）U/mL，与正常对照组（7.79±0.58） U/mL相比，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3 讨论

急性胰腺炎是外科常见的急腹症。急性胰腺炎病人常伴有高血糖及尿糖，使人们认识到急性胰腺炎对内分泌功能有一定影响的器官研究表明，胰腺内外分泌部是一个结构与功能整合的器官。在胰腺的正常生理和胰腺疾病的发生、发展上，两者是相互作用、相互影响。越来越多的证据表明SAP时大量炎症因子释放，造成胰腺细胞的损伤，同时也对胰岛功能造成损伤，出现内分泌功能的改变，造成血糖升高和胰岛素分泌的下降，iNOS活性增加使胰岛β细胞产生抑制作用[7]。

该研究显示亦证明上述观点，SAP组血糖高达到（11.50±1.36）mmol/L，与对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。急性重症胰腺炎时早期就出现血糖异常，可能原因是致炎症因子使胰胰岛细胞功能受损所致[8]；同时葡萄糖刺激胰岛素分泌，SAP组大鼠在3.3、16.7 mmol/L葡萄糖刺激下，胰岛素分泌量分别为（3.90±0.78）mIU/L和（10.36±2.14）mIU/L，均明显低于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。表示SAP大鼠在早期胰岛功能的出现了损伤，这因此糖耐量的异常。原因可能有两方面：①较早已出现存在胰岛功能的损伤；②出现的胰岛数目的绝对减少。

急性重症胰腺胰腺炎时胰岛功能受到抑制扮演重要角色。大量的炎症介质和细胞因子使iNOS的mRNA激活，是iNOS大量翻译表达，iNOS则形成二聚体催化NO合成。NO过量产生而对[9]。该研究结果显示：SAP大鼠升胰岛iNOS活性高达（30.27±3.57） U/mL，与正常对照组相比，差異有统计学意义（P<0.05），胰岛iNOSmRNA表达明显增强，可能催化NO大量合成，而iNOS生成过量的NO可以导致β细胞的损害，这可能是胰岛功能下降的重要原因。该研究发现SAP胰岛功能损伤iNOS活性增强有关系，抑制胰岛素功能。

综上所述，SAP早期胰岛内分泌功能已经发生变化，iNOS参与了SAP胰岛功能损伤，对胰岛分泌产生负面影响。

[参考文献]

[1] Wang G，Qu FZ，Li L，et a1.Necroptosis：a potential，promising target and switch in acute pancreatitis[J].Apoptosis，2016， 21（2）：121-129.

[2] 刘华龙，彭耀荣，刘纯霞，等.急性胰腺炎内分泌功能的临床研究[J].胃肠病和肝病学杂志，2014，23（7）：834-836.

[3] 黄艳辉. 生长抑素对急性胰腺炎患者临床疗效及胰腺内外分泌系统的影响分析[J].河北医药，2016，38（4）：535-537.

[4] 张大兴，李金友，陈辰，等.天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3在重症急性胰腺炎胰岛β细胞损伤中的作用[J].中华实验外科杂志，2014，31（1）：41-43.

[5] 段泽，辉林中，王芹.重症急性胰腺炎大鼠回肠肌间神经节血管活性肠肽和一氧化氮合酶阳性神经元变化[J].实用医学杂，2015，36（16）：2619-2622.

[6] 田蜜，蕾琪.山萘酚对脂肪酸诱导的胰岛微血管内皮功能损伤的保护效应及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1的作用机制[J].第二军医大学学报，2016（3）：35-37.

[7] Flickinger BD，Olson MS. Localization of the platelet-activating factor receptor to rat pancreatic microvascular endothelial cells[J].Am J Pathol， 2014（154）：1353-1358.

[8] 张爱民，常艳敏，王光霞.急性胰腺炎兔模型血清生化指标、胰腺B超及组织病理观察[J].山东医药，2014，54（12）：29-30.

[9] 李丽英，唐晓初，魏莱.GLP-1 对大鼠胰岛氧化应激损伤的保护作用及机制研究[J].四川医学，2015，36（1）：25-27.

（收稿日期：2017-03-11）