没食子栓剂成型工艺研究

木巴拉克?伊明江 程雪梅 娜祖克?阿不都 阿卜杜热合曼?努如拉

[摘要]以没食子水提浸膏为主药，研究其栓剂成型工艺，并对其直肠黏膜刺激性进行评价。用煎煮法制得没食子浸膏，以半合成脂肪酸甘油酯和玫瑰花油为基质，热熔法制备没食子栓剂。测定栓剂重量差异和体外融变时限，UVVis考察药效成分。用新西兰大白兔为受试对象，连续14 d使用没食子直肠栓剂，取结肠组织，病理学评分。最终确定制剂的处方组成为：以半合成脂肪酸酯和玫瑰花油（2∶1）为基质，载药量54%，制得的制剂外形光滑圆锥形，呈褐色；质量差异（143±003） g，平均融变时限（17±2） min；每枚栓剂平均含多酚3324 mg·g-1、鞣质2450 mg·g-1、多糖33 mg·g-1，连续给药对直肠黏膜无刺激。该制剂，处方设计合理、制备工艺简便、剂型适宜、给药方式符合临床使用目的；制剂对给药部位黏膜无刺激性。

[关键词]成型工艺； 没食子； 栓剂； 黏膜刺激性

Process of gallnut suppository preparation

IMINJAN Mubarak1，2， CHENG Xuemei3， ABUDU Nazuk2， NURULLA Abdurahman2， JI Zhihong1*， UPUR Halmurat4*

（1Xinjiang Qikang Habo Uyghur Medicine Company Limited by Shares， Urumqi 830026， China；

2College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China；

3Laboratory for Standardization of Chinese Medicines， School of Pharmacy， Shanghai University of

Traditional Chinese Medicine， Shanghai 201203， China；

4Xinjiang Uygur Autonomous Region Food and Drug Administration， Urumqi 830001， China）

[Abstract]The main objective was to research the process of gallnut suppository preparation with its water extract as the main drug， and evaluate its irritation to rectal mucosa gallnut extract was obtained by decocting method， and its suppository preparation was obtained by fusion method with semisynthetic aliphatic esters and rose flower oil as the matrix Weight difference and in vitro melting time limit of the suppository were assayed and UVVis was used to determine the contents of polyphenols， tannin and saccharide The irritation to colon mucosa was evaluated after successive administration of 14 days to New Zealand white rabbits Finally， the prescription compositions were determined： semisynthetic aliphatic esters and rose flower oil with the ratio of 2：1 as the proper matrix， with the drug loading of 54% The prepared suppository was brown， conical and smooth The weight difference was （143±003） g， with an average melting time limit of （17±2） min The Contents of Polyphenols， tannic and polysaccharide were 3324， 2450， 33 mg·g-1 respectively in each suppository The results also showed that the continuous administration had no irritation to rectal mucosa It can be concluded that the suppository was an acceptable administrate form， whose preparation process was easily controlled， and with no irritation to rectum mucosa.

[Key words]preparation process； gallnut； suppository； mucosal irritation

潰疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是炎症性肠道疾病之一，主要发病部位是直肠及乙状结肠。目前，西药以非特异性抗炎药5氨基水杨酸为活性成分的各种制剂为主，中药以辨证施治个体化用药，生物药以靶向抗肿瘤坏死因子α单抗（antiTNFα）等为临床实践中药物治疗一线药应用。从发病率角度UC已成为常见病，但发病机制尚不清楚[1]，使其成为难治性、复杂性疾病。没食子（quercus infectoria）是没食子蜂科昆虫没食子蜂的幼虫寄生于壳斗科植物没食子树幼枝上所产生的虫瘿，又称春虫秋果，具有抗炎作用[2]。维吾尔医学临床实践中，常用于治疗牙龈糜烂、口腔溃疡、疮疡息肉、肠道溃疡、肛门炎等[3]。其中的多酚类成分防止脂质过氧化效果优于抗环血酸[4]。目前没食子治疗UC的使用形式有：水煎液直接咽下、灌肠或将生药粉碎成粉栓剂形式局部应用。endprint

哈木拉提·吾甫尔教授以现代技术，研究了没食子水提物治疗牙龈疾病及UC机制，佐证了没食子用于黏膜炎症性疾病的科学、合理性[511]。同时，研发出仅用没食子制成维吾尔医名方“西帕依固龈液”，《中华人民共和国卫生部药品标准——维吾尔药分册》1999年版收载该品种，用于治疗口腔疾病[12]。

西帕依溃结安灌肠剂是在此基础，经扩大适应证，改变给药途径，以及改进提取工艺[13]研发的用于治疗UC灌肠剂。现阶段以医院制剂形式用于临床。灌肠剂对给药操作有一定要求，且灌肠后，因病人不适，易排除体外，体内滞留时间短，临床应用多有不便。栓剂作为半固体制剂，在常温下为固体，生产、储存、运输中稳定性高于液体制剂。栓剂塞入腔道后，在体温下能软化、熔融或溶解于分泌液，逐渐释放药物而产生局部或全身作用。临床实践也证明，栓剂和灌肠剂对UC治疗效果相对口服给药均具有明显优势。但从给药便宜性、患者依从性、局部治疗效率等角度，栓剂比灌肠剂更有优势[14]。因此，本实验在前期建立工作平台基础上，以没食子水提浸膏为主药，研制没食子直肠栓，以期丰富没食子给药剂型，丰富医生结合病人实际，灵活选择剂型范围，为拓展个性化治疗范围提供依据。

1材料

11仪器

电子天平（BS110S，北京赛多利斯天平有限公司）；旋转蒸发仪（上海安亭旋转蒸发仪N1100SOSB2100）；超声波清洗仪（KQ250DE型，昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（HWS24，上海一恒科技有限公司）；紫外可见分光光度仪（LC20AB，日本岛津；UV9100D，北京莱博泰科仪器有限公司）；500 g摇摆式中药粉碎机（AK1000，温岭市奥力中药机械有限公司）；溶变时限检查仪（天津药典标准仪器厂）；BT1000粉体综合特性测定仪（丹东百特仪器有限公司）

12试药

没食子粗粉（新疆奇康哈博维药股份有限公司）、没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，090702）、葡萄糖对照品（上海源叶生物科技有限公司，101833）、干酪素（BIO BASIC INC公司，LJ0226B1810J）、聚酰胺薄层板（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）、其他试剂均为分析纯、自制蒸馏水。新西兰大白兔[新疆医科大学实验动物研究中心提供，合格证号（2013）16003]。

2方法与结果

21栓剂成型工艺研究

211水提浸膏的制备取没食子粗粉70 g，加入8倍量水，浸泡1 h，煎煮05 h，共3次，每次煎液用棉花过滤，合并，减压浓缩后70 ℃水浴蒸干，恒重，研磨，过80目筛，备用。

212浸膏休止角的測定采用固定漏斗注入法计算和仪器法直接读取休止角2种方法测定。固定漏斗法计算时底盘直径为600 cm。结果见表1。

213浸膏粉临界相对湿度（critical relative humidity，CRH）测定称取浸膏置不同相对湿度（relatively humidity，RH）干燥器，放置25 ℃恒温箱保存。每天称重，计算吸湿百分率，与RH作图，绘制吸湿曲线。曲线拐点两边作切线，焦点对应横坐标读数CRH为57%，结果见图1，2。

214主药剂量确定没食子浸膏粉在每枚栓中含量根据临床单次灌肠有效生药剂量，平均浸膏得率，临床直肠栓质量，确定。

2152种基质比例确定测定基质平均密度，见表2。制备2种基质质量比2∶1，1∶1，1∶2的含药栓剂，见表3。通过2种方法评价并确定含药栓基质最佳比例。第一，栓剂室温观察外形、硬度，基质比例2∶1最佳，见表4。第二，栓剂室温放置1 h，再按《中国药典》附录ⅫB中“融变时限检查法”，指标见表5，观察并记录开始至完成栓剂变形设定分值所需时间范围。分值为1，即开始软化、融变变形时间点；达到分值4，即完成软化、融变变形时间点。时间段越长，说明栓剂软化、融变、释药越慢，局部治疗作用持续时间相对越持久。分值从1变化到4时间段，基质比例1∶2为4～12 min、所需时间短；1∶1为5～14 min、所需时间适中；2∶1为6～16 min，所需时间长。因此，综合2种评价结果，确定含药栓基质质量比2∶1最佳。

216计算置换价制备纯基质栓：称取半甘酯，融化保温，以质量比2：1加玫瑰花油混合，边搅拌边注模。低温凝固，用刀削平溢出部分，启模，记为“G”。称取3枚质量，分别为112，111，112 g。制备含药栓：称取半甘酯，融化保温，以质量比2∶1加玫瑰花油混合再加主药，边搅拌边注模。低温凝固，削除溢出部分，启模，记为“M”。称取3枚质量，分别为142，143，141 g。计算置换价（displacement value，DV）：以公式DV=W/[G-（M-W）]计算，每枚栓剂含药质量记为“W”，可根据主药与基质称取比例及含药栓质量计算具体值。按上述公式计算没食子栓剂DV为16。

217处方最大含药量确定平行称取3份20 g半甘酯融化保温，分别加10 g玫瑰花油混合，各加入主药15，35，50 g，边搅拌边注模。低温凝固，用刀削平溢出部分，启模即得含处方量33%，54%，62%主药栓剂。通过外观、成型、硬度选择最大含药量54%。

218融变时限将自制没食子栓剂3枚，分别放入融变仪中，进行融变时限测定。3枚没食子栓均在（17±2） min内融变完成，符合脂肪性基质要求。

22供试品溶液的制备

221浸膏供试品溶液称取没食子浸膏08 g，置25 mL棕色量瓶，加水超声15 min溶解，室温定容。从中精密移取10 mL置250 mL棕色量瓶，加水定容至刻度，即得。

222栓剂供试品溶液取没食子栓3粒，分别精密称定质量，分别为1421 2，1420 3，1430 2 g，分别置锥形瓶中加水40 mL，超声10 min使之完全分散溶解，静置12 h，取下层水溶液定容至50 mL。精密移取10 mL置250 mL棕色量瓶，定容。endprint

23多酚及鞣质含量测定

231没食子酸对照品溶液的制备精密称定对照品适量，置10 mL棕色量瓶，加水溶解并稀释至刻度，得对照品储备液。精密吸取10 mL置于100 mL量瓶，制成每mL含64 μg的对照品溶液，备用。

232标准曲线绘制及线性范围考察精密吸取对照品溶液02，04，06，08，10，12，14，20 mL分别置于25 mL棕色量瓶，依次加入FolinCiocalteu试剂1 mL，水5 mL，75%碳酸钠溶液8 mL，稀释至刻度，摇匀，暗处放置1 h。相应的试剂为空白对照，在760 nm测定。在0512～5120 mg·L-1内线性良好，回归方程y=0081 4x+0140 5（r=0999 9）。

233精密度精密吸取对照品溶液15 mL，按232项操作，重复测定6次，计算吸光度RSD为065%。

234重复性取6枚栓剂，按222项下方法制备供试品溶液。精密吸取各供试品溶液20 mL，按232项操作，测定，计算每枚栓剂中多酚含量分别为36266，36323，36234，36085，36010，35997 mg·g-1，RSD为089%，098%，15%，11%，17%，18%。

235加样回收率取含有量已知同一批栓剂3枚，分别精密加入对照品，按222项下流程制备供试品溶液。精密吸取20 mL，按232项操作，测定，见表6。

237供试品鞣质含量测定浸膏及栓剂供试品溶液各吸取25 mL，分别置已盛有干酪素06 g的100 mL具塞锥形瓶，30 ℃水域保温振摇1 h。取出、摇匀、过滤。弃去初滤液，精密量取续滤液40 mL，按232项操作，测定。计算多酚与不被吸附多酚差值为鞣质含量，见表7，8。

24多糖含量测定

241葡萄糖对照品溶液制备精密称取对照品适量，置于10 mL量瓶，加水溶解并稀释至刻度，得对照品储备液。吸取07 mL置于10 mL量瓶，制成每mL含490 μg对照品溶液，备用。

242显色剂的制备精密称取蒽酮0050 2 g，置于25 mL量瓶，加浓硫酸溶解并稀释至刻度。

243标准曲线的绘制及线性范围考察精密吸取对照品溶液08，10，12，14，16，18，20 mL分别置于25 mL具塞量筒，加入硫酸蒽酮显色剂5 mL，摇匀震荡2 min，水浴90 ℃加热5 min，冷水浴冷却至室温，相应试剂为空白对照，15 min内在626 nm测定[15]。得回归方程y=0096 7x+0027 6（r=0994 7），说明在392～980 μg线性关系良好。

244精密度精密吸取对照品溶液10 mL，按243项操作，重复测定6次，计算，吸光度RSD为11%。

245重复性精密吸取234项下制备6份250 mL供试品溶液各40 mL，按243项操作，测定，计算每枚栓剂中葡萄糖质量分数分别为330，322，333，287，282，343 mg·g-1，RSD 为30%，12%，12%，28%，17%，19%。

246加样回收率取含有量已知同一批栓剂3枚，分别精密加入对照品，按222项下流程制备栓剂供试品溶液。精密吸去40 mL，按243项操作，测定，见表9。

247含量测定浸膏供试品溶液40 mL；栓剂供试品溶液160 mL，经低温浓缩至4 mL，分别按243项下“置25 mL棕色量瓶”依次操作，测定，见表8，9。

25局部黏膜刺激性

251实验动物健康新西兰大白兔12只，雌雄各半，体质量要求（20±05） kg。

252动物饲料和环境管理温度（23±2） ℃，相对湿度控制目标为40%～60%，自由摄食经灭菌的啮齿类动物颗粒饲料，自由饮水，人工照明，每12 h明暗交替。

253分组及給药周期12只，雌雄分笼，正常饲养下观察动物进食、活动及粪便等情况7 d。随机分3组（雌雄各半）。对照组2只，含药栓剂组6只，空白栓剂组4只。第8天开始，每天干预1次，连续14 d。

254观察指标给药开始至结束，每天观察动物精神和活动状态、排泄粪便状态、测量体重指标。末次给药24 h后，处死，取出肛门至结肠10 cm长度，肉眼观察肛门周围分泌物，结肠黏膜是否充血、水肿，产生红斑等。取给药部位组织，10%福尔马林固定，石蜡包理制片，切厚度为3～5 μm/片，HE染色，通过光学显微镜观察。组织病理学标本按《中药新药研究与申报》标准要求，见表10。

255组间比较结果含药栓组、空白栓组、对照组间：结肠黏膜完整，未见充血、水肿、淤血、异常分泌物，黏膜刺激等级均为0，组间无差异；体质量在相同时间段组间无差异，但组内个别时间段与第1天间有差异（P<005），见表11。

3讨论

31栓剂剂型研究意义

目前治疗UC多采用口服或灌肠或两种途径同时给药。口服给药必须经过肝脏再至血液循环，部分药物在肝脏发生变化；而一般口服肠溶片，在小肠崩解释放并吸收，药物难以全部到达结肠病变部位，且可能在非病变部位引起不良反应。局部用5ASA灌肠剂和栓剂对UC均有效。5ASA灌肠剂对左侧UC、栓剂对各类UC有效[16]。临床上灌肠给药虽然有够较好疗效，但灌肠剂给药方式对患者本人的用药操作行为带来不便。灌肠后，肠容量限制及粪便存在，受灌肠剂体积影响，引起病人不适感，易排出体外，药物损失较大，个体差异大，患者顺应性差。因此，针对UC的治疗需求和存在的问题，进行栓剂给药系统的研究，改进给药方式的不足，显得尤为必要和紧迫。栓剂形式给药适合于UC好发于直肠、乙状结肠部位特点，直肠给药有利于药物有效部位迅速作用病灶部位同时，亦可避免口服时胃酸和消化酶对药物的破坏，同时也减少了保留灌肠因给药操作不规范、灌肠腹部疼痛不适、灌肠药液停留时间段的影响，使生物利用度有所提高[16]。维吾尔药传统制药工艺中以粉末直接入药的比例较大，这些制剂在临床上具有良好的疗效，但因受科学技术条件的限制，人们尚不能充分认识维吾尔传统制药工艺（粉末直接入药）特定的科学内涵，产品质量标准尚不能控制药品质量[17]。应用现代技术，研究维吾尔药药效部位提取方法，作用机制，成型工艺，质量标准，实现制剂安全、有效、稳定、均一性。因此，本研究同时在工艺研究中以主功效成用传统药中提取有效部位，研制适合临床需求栓剂，为研究药物作用机制提供稳定、均一的制剂来源。endprint

32基质选择依据

2015年版《中国药典》附录对栓剂基质要求之一是能使药物易于释放。本实验研制栓剂用于局部缓解、控制、治愈UC，降低复发。栓剂基质与药物溶解性相反时有利于药物的释放。受给药部位中体液量有限影响，一般局部作用栓剂选择水溶性基质。本研究考虑：主药中药效部位鞣质与栓剂常用水性基质蛋白质类明胶发生反应，UC治疗需药物在用药部位从基质快速释放，病灶部位黏膜浓度达到药效浓度，而选择溶解特性相反的脂质性基质。半甘酯的选择依据：栓剂脂质性基质中半合成脂肪酸甘油脂类熔点低，熔距短，抗热性好，贮存较稳定；80%～90%栓剂基质生产中应用，基本取代了天然油脂；我国主要投产半合成椰油脂、半合成脂肪酸酯和半合成脂肪酸甘油酯、硬脂酸丙二醇酯、单酸甘油酯等，其中半合成脂肪酸酯及半合成脂肪酸甘油酯应用最广[18]；2015年版《中国药典》一部收载11种中药栓剂均为油脂性基质，其中10种是此类基质。玫瑰花油的选择依据：玫瑰花油为维吾尔医学中常用制剂，由玫瑰花组成，临床实践中广泛用于过敏性皮炎、瘙痒、外阴瘙痒；新疆维吾尔自治区维吾尔医医院玫瑰花制剂功能主治描写其能消炎止痛、润肤止痒；肛门途径给药制剂塞入前，医生建议以此为润滑剂。本研究中基质半甘酯本身熔点35～37 ℃、玫瑰花油和药物的加入使其硬度符合要求前提下，使栓剂塞入直肠后规定时间内，将药物从基质释放至作用部位。

33含药量的确定

中药过滤多以棉花、纱布为滤材，存在浸膏中混杂生药细粉概率，可能是浸膏得率存在较大差异主药原因。没食子水提工艺浸膏得率文献中报道在5417%～8100%不等，但药效部位含量未见有明顯变化。西帕依溃结安灌肠剂成人临床单次给药体积50 mL，相当于生药20 g剂量。浸膏得率50%计算应等于10 g浸膏。目前，栓剂生产中用全自动化设备。确定处方最大含药量有助于保证成型工艺前提下，调整每枚含药量。计算没食子水提浸膏对本研究用基质置换价，有利于根据药量不同确定所需基质用量。因此，确定置换价及最大含药量用不同模具生产栓剂，不会因受模具体积限制，无法控制药量，制剂质量难以控制等现象出现。

34给药部位黏膜刺激性实验

中药、天然药物局部刺激性和溶血性是指中药、天然药物制剂（包括活性成分和赋形剂）经皮肤、黏膜、腔道、肌肉、血管等非口服途径给药，经渗透吸收或注射后对给药部位以及全身产生的毒性作用，包括血管、肌肉、黏膜等刺激性及血管外或血管内溶血或红细胞凝聚等反应[19]。它是临床前安全性评价的组成部分。中药、天然药物制剂，包括活性成分或部位、体内代谢物、赋形剂、有关杂质及制剂的理化性质（如 pH、渗透压等）均是可能导致给药部位毒性产生或溶血性产生的因素，因此，指导临床合理用药，提示临床应用时可能出现的局部毒性反应和程度、安全范围、临床研究监测指标、应进行中药、天然药物制剂局部应用的局部刺激性试验。因本研究制成栓剂，通过肛门给药发挥局部疗效，给药期间局部停留时间较长。在试验过程中，为了防止动物将栓剂主动排除，采取给药后观察15 min，因本制剂融变时限（17±2） min，在观察期间未见主动排除栓剂事项发生。

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[责任编辑孔晶晶]endprint