不同药用部位及产地穿心莲药材中4个二萜内酯类成分的研究

肖传学，孙玉侠，耿晓梅，高展

(天士力医药集团股份有限公司，天津 300402)

·基础研究·

不同药用部位及产地穿心莲药材中4个二萜内酯类成分的研究

肖传学*，孙玉侠，耿晓梅，高展

(天士力医药集团股份有限公司，天津300402)

目的：考察不同产地与药用部位对穿心莲药材质量的影响。方法：采用高效液相色谱法比较不同药用部位(粗杆、细杆及叶)、不同产地及市售药材中穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯苷元及4个成分总和的含量。结果：穿心莲叶中所含有的穿心莲内酯及二萜内酯类成分总含量最高，其次是细杆，粗杆含量最低。对不同产区间穿心莲药材内酯类成分含量的比较中，以广西平马地区产穿心莲药材穿心莲内酯及二萜内酯类成分总含量最高。而在市售穿心莲药材的质量比较中发现差异较大，但呈现出与本文前述实验相同的规律，即穿心莲叶含量多者，质量较佳。结论：不同产地与药用部位对穿心莲药材具有显著的影响。

穿心莲药材；穿心莲内酯；新穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；新穿心莲内酯苷元

穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.) Nees 主产于福建、广东、广西等地区，每年清明前播种，中秋开花前开始采收，全草或叶入药，具有清热解毒、消炎、消肿止痛之功效[1]。穿心莲抗炎活性成分为二萜内酯类化合物，主要以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯为主[2]，穿心莲药材及其制剂也多以上述两种成分含量作为质量控制指标。但同样具有清热解毒、消肿止痛作用[3]的新穿心莲内酯及其苷元，作为药材质控指标却鲜有报道。本文拟以穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、新穿心莲内酯苷元及4个二萜内酯类成分总量[4-5]作为研究对象，考察穿心莲药材不同药用部位、不同产地及市售药材间各种二萜内酯类成分的差异，以此更加全面反映穿心莲药材的质量状况，为不同厂商选择或开展穿心莲药材药源管理等提供参考。

1 仪器与试药

Waters e2695-2996高效液相色谱仪。对照品：穿心莲内酯(USP，批号：F0I344)；新穿心莲内酯(天津一方科技有限公司，批号：20140110)；脱水穿心莲内酯(中国食品药品检定研究院，批号：110854-201308)；新穿心莲内酯苷元(天津一方科技有限公司，批号：20140506)；穿心莲对照提取物(USP，批号：F0I342)；试剂：甲醇(OMNI，批号：150617014)；乙腈(OMNI，批号：101124014)；磷酸(天津风船化学试剂科技有限公司，批号：20150801)；磷酸二氢钾(天津风船化学试剂科技有限公司，批号：20131008)；超纯水(公司自制)。

穿心莲粗杆、细杆及叶采自广西南宁、贵港及福建漳州，穿心莲全草药材采自广西南宁、贵港、横县、莲塘、平马，福建漳州、四川宜宾，市售穿心莲药材购自成都通德药业有限公司(产地分别为广东、广西、河南、河北及福建)，上述药材均经天士力医药集团股份有限公司质检中心按照《中华人民共和国药典》检验合格。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：WatersX-BridgeShieldRP18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相A：0.05%磷酸-磷酸二氢钾水溶液；流动相B：乙腈；流速：1.5mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：223nm；进样量：20μL；梯度洗脱(0～18min，5%～45%乙腈；18～25min，45%～80%乙腈；25～28min，80%～80%乙腈；28～35min，80%～45%乙腈；35～40min，45%～5%乙腈；40～45min，5%～5%乙腈)。

2.2供试品溶液的制备

取2.0g穿心莲细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50mL加热回流15min，放冷至室温，取上清液。重复上述操作4次，直至提取液为无色。合并所有提取液，减压浓缩至50mL，取上述溶液25mL置50mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，混匀。用0.45μm滤膜滤过，即得。

2.3对照品溶液的制备

混合对照品溶液：取穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯苷元4个对照品，精密称定，分别置于10mL量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，摇匀，得各对照品溶液；分别精密量取各对照品溶液5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成含穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯与新穿心莲内酯苷元分别为50.7、52.5、51.4、50.8μg·mL-1的混合对照品溶液。

穿心莲提取物对照品溶液：取穿心莲对照提取物适量(约含二萜内酯25mg)，置于50mL容量瓶中，加甲醇25mL，缓慢加热15～20min，加乙腈定容至刻度，混匀。用0.45μm滤膜滤过，即得。

2.4分析方法验证

2.4.1系统适用性试验 穿心莲对照提取物色谱图中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯色谱峰的分离度为33；穿心莲内酯对照品色谱峰的理论塔板数为166449，拖尾因子为0.97，重复进样6次，峰面积的RSD为1.7%。符合分析方法系统适用性的要求[6]。

2.4.2专属性试验 取一批穿心莲药材按2.1.3项下制备供试品溶液并测定，各待测成分穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯苷元色谱峰的纯度角均小于纯度阈值，符合HPLC定量分析要求。

2.4.3在溶液中的稳定性 取穿心莲供试品、混合对照品及穿心莲提取物对照品等的溶液分别于不同时间点(制备后0、2、4、8、12、16、20、24h)进行检测，记录各时间点穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯苷元峰面积，并与0时数据相比，各时间点峰面积RAD≤2.0%，所有时间点峰面积RSD≤3.0%。结果表明，供试品溶液及对照品溶液在24h内稳定。

2.4.4线性与范围 分别精密吸取混合对照品溶液50、40、30、20、10、5、1μL进样分析，以对照品质量浓度对峰面积进行线性回归处理，得穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的回归方程、相关系数和线性范围，见表1。

表1 穿心莲中4个成分的回归方程、相关系数和线性范围

2.4.5 重复性试验 取同一批穿心莲通过调整称样量制备70%、100%、130% 3个质量分数的供试品溶液，每种浓度平行制备3份，分别计算4个二萜内酯类成分含量及4个成分总含量。3个浓度的各自3份平行样品间4个二萜内酯类成分含量及4个成分总含量的RSD均小于0.89%；9份供试品溶液RSD均小于2.3%，表明重复性良好。

2.4.6 中间精密度试验 分别由两名不同人员于不同日期取同一批穿心莲通过调整称样量，分别制备70%、100%、130% 3个质量分数的供试品溶液，每个浓度各1份，并分别于不同仪器上按照2.1项下方法色谱条件进行测定，测得3个水平穿心莲样品中4个二萜内酯类成分含量及4个成分总含量RSD均小于2.0%，表明中间精密度良好。

2.4.7 准确度 取穿心莲供试品称样量的1/2，精密称定9份，分别加入对照品(溶液)适量，制备3个不同质量分数(70%、100%、130%)的供试品溶液，按照2.1.1项下分析方法，进行含量测定。计算穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯苷元的回收率。结果平均回收率分别为100.9%、99.6%、100.3%、99.5%，RSD分别为0.89%、0.95%、0.61%、1.12%，表明准确度良好。

2.5样品测定

2.5.1不同药用部位间穿心莲二萜内酯类成分含量分析 采用上述分析方法，分析来自3个不同产区的3批穿心莲不同药用部位(粗杆、细杆、叶)所含有的穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯及新穿心莲内酯苷元的含量，结果见表2。

结果表明，同一产区中穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯及4个成分总量在叶中分布最多，其次为细杆，粗杆含量最少，但新穿心莲内酯苷元却在粗杆中分布最多。3个产地间，穿心莲二萜内酯类的分布规律均相同；同一药用部位中，不同产区间药材含量最高的二萜内酯类成分均为穿心莲内酯，其他3个成分则在不同产区同一药用部位排列顺序并不相同，无明显规律。

表2 穿心莲粗杆、细杆、叶中二萜内酯类成分含量 %

2.5.2 不同产地穿心莲叶中成分含量分析 对本实验室收集的来自3个省份7个不同产地穿心莲叶中所含的二萜内酯类成分进行比对分析，结果见表3。

结果表明，平马地区穿心莲叶中穿心莲内酯质量分数高达3.6%，而其他6个不同产区穿心莲内酯质量分数均约为2.0%。但其所含有的脱水穿心莲内酯及新穿心莲内酯苷元与其他6个地区相比，约为其他地区的1/4；不同产区间穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的总和以平马地区最高，而新穿心莲内酯与新穿心莲内酯苷元的总和以南宁地区最高。

表3 不同产地穿心莲叶中所含二萜内酯类成分含量 %

2.5.3 不同市售穿心莲药材成分含量分析 对来自不同产地的市售穿心莲药材(共6批)进行二萜内酯类成分含量分析，结果见表4。6批市售穿心莲药材除产地为广东和安国的药材为全草外，其余药材均主要为穿心莲粗杆。

综合市售药材及各二萜内酯类成分含量分析，可知全草药材中穿心莲内酯的含量较高，粗杆药材中新穿心莲内酯苷元的含量较高，该规律与2.2.1项下所研究的不同药用部位间二萜内酯类成分分析规律相同；比较广东及安国南北两个不同产区穿心莲全草的二萜内酯类成分含量，安国产穿心莲药材二萜内酯类成分总量高出广东产药材约20%，而以粗杆为主的4批市售药材中，二萜内酯类成分总量也以河南产药材最高。这两组数据也显示穿心莲药材由南向北引种后，在二萜内酯类成分含量方面有所提升。

表4 市售穿心莲药材成分含量分析 %

3 讨论

本文采用的分析方法可同时对穿心莲药材中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯及新穿心莲内酯苷元等4个二萜内酯类成分含量进行测定，该分析方法可作为《中华人民共和国药典》2015年版穿心莲药材质量控制的一种有效的补充。

比较不同药用部位所含二萜内酯类成分的含量，穿心莲叶中二萜内酯类成分的总量几乎为粗杆的10倍，细杆的5倍。另外，在市售不同厂家生产的穿心莲药材二萜内酯类成分含量比较中，同样发现由于叶茎比例不同，饮片含量存在较大的差异，因此，根据《中华人民共和国药典》2015年版穿心莲药材项下规定，制剂原料及饮片选择穿心莲药材或饮片时，须根据各自产品的要求，结合工艺，严格控制穿心莲叶与茎的比例。本研究也为制订穿心莲药材或饮片的内控标准提供了依据。

对3个不同产地的穿心莲叶进行分析，由于各地区的自然环境、采收期及贮藏条件等均有一定的差别，导致穿心莲的质量也存在一定差异。本实验也为穿心莲提取物或穿心莲内酯的原料产地的选择提供了一定的数据支持。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：268.

[2] 颜玉贞，谢培山.穿心莲质量控制的再评价[J].中药新药与临床药理，1998，9(4)：204-206.

[3] 李曙光,叶再元.穿心莲内酯的药理活性作用[J].中华中医药学刊, 2008, 26(5):984-986.

[4] 李军，段然，黄雯，等.穿心莲指纹图谱和不同产地质量研究[J].中国现代中药，2009，11(6)：21-24.

[5] 王智民,钱忠直,张启伟，等.一测多评法建立的技术指南[J].中国中药杂志,2011,6(6):657-658.

[6] The United States Pharmacopieial Convention. USP39-NF34[S].USA:The United States Pharmacopieial Convention，2015: 6793.

(2016-08-10)

ComparisonofDiterpenoidLactoneContentExtractedfromVariousPartsofAndrographisHerbafromDifferentOrigins

XIAO Chuanxue*，SUN Yuxia，GENG Xiaomei，GAO Zhan

(TaslyPharmaceuticalCo.，Ltd.，Tianjin300402，China)

Objective：To study the quality of Andrographis Herba from various locations and markets.Methods：HPLC method was employed to compare the content of andrographolide，neoandrographolide，dehydroandrographolide，andrograpanin and total content of the 4 components extracted from various parts ofAndrographispaniculata，including thick stem，thin stem and leaves.The contents of these diterpenoid lactone extracted fromA.paniculatacollected from various places and markets were also compared.Results：The results showed that the content of andrographolide and total content of diterpenoid extracted from leaves were higher than those extracted from stems.The content of diterpenoid extracted from thick stems was the lowest.Regarding various locations，theA.paniculatafrom Pingma，Guangxi province had a higher content than those from other locations.ForA.paniculatafrom various markets，the content of andrographolide and total content of diterpenoid fluctuated significantly.However，the distribution of effective components inA.paniculatafrom various markets was consistent，with the highest content in leaves and the lowest content in thick stems.Conclusion：Different places and medicinal parts have significant effects on the Andrographis Herba.

Andrographis Herba，andrographolide，neoandrographolide，dehydroandrographolide，andrograpanin

] 肖传学，工程师，研究方向：中药材及中药制剂质量控制、已上市中药质量标准提高研究；E-mail：xcx@tasly.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.5.016

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