PCR及细菌培养法应用于孕妇产前B族链球菌感染检测中的价值

靳红

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.20.056

[摘要] 目的 对比研究PCR法及细菌培养法在应用于孕妇产前B族链球菌感染检测中的意义与价值。方法 该研究病例观察时间段为2016年1—6月，方便收集该院产科收治疑似B族链球菌感染产妇共100例作为观察对象，对患者临床资料进行回顾性分析。所有患者分别应用PCR法以及细菌培养法进行检测。以最终诊断结果为金标准，对比PCR法与细菌培养法在孕妇产前B族链球菌感染检测中的准确度以及特异性差异。结果 应用PCR法对B族链球菌感染检测的准确度为97.37%（74/76），特异性为95.83%（23/24），应用细菌培养法对B族链球菌感染检测的准确度为81.58%（62/76），特异性为70.83%（17/24）。两组对比，PCR法用于孕妇产前B族链球菌感染检测准确度、特异性均显著高于细菌培养法，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在孕妇产前B族链球菌感染检测中，应用PCR法的检测效果明显优于细菌培养法，具有准确度高、特异性高的优势，值得推广应用。

[关键词] B族链球菌感染；孕妇；PCR；细菌培养

[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）07（b）-0056-03

Application Value of PCR and Germiculture in the Infection Test of Prenatal Group B Streptococcus

JIN Hong

Second Department of Clinical Laboratory， Laiwu Central Hospital of Xinwen Mining Group of Laiwu， Laiwu， Shandong Province， 271103 China

[Abstract] Objective To compare and research the significance and value of PCR and germiculture in the infection test of prenatal group b streptococcus. Methods 100 cases of delivery women suspected with group b streptococcus admitted and treated in our hospital from January 2016 to June were convenient selected and the clinical data were reviewed and all patients were tested by the PCR and germiculture， and the differences in the accuracy and specificity between the two methods were compared by taking the final diagnostic results as the golden standards. Results The accuracy and specificity of the PCR were obviously higher those of germiculture，[97.37%（74/76）， 95.83%（23/24） vs 81.58%（62/76）， 70.83%（17/24）]， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion The test effect of PCR method in the prenatal group b streptococcus of delivery women is obviously better than that of germiculture with high accuracy and specificity， and it is worth promotion and application.

[Key words] Group b streptococcus infection； Delivery women； PCR； Germiculture

既往报道中指出，B族链球菌是侮辱链球菌，是临床常见革兰氏阳性链球菌，在直肠以及阴道组织中广泛存在[1]。B族链球菌感染是导致产妇出现不良妊娠结局，如胎膜早破、早产、流产等的最主要因素之一。并且，B族链球菌具有一定的母婴垂直传播风险，新生儿垂直感染B族链球菌感染会增加其围产期死亡风险[2]。因此，临床必须尽早针对孕妇产前B族链球菌感染带菌情况进行诊断，以及时用抗菌药物进行预防性之一。为对比研究PCR法及细菌培养法在应用于孕妇产前B族链球菌感染检测中的意义与价值，该研究中将该院2016年1—6月期间产科收治疑似B族链球菌感染产妇共100例作为观察对象，分别应用PCR法以及细菌培养法进行检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该研究病例观察时间段为2016年1月—2016年6月，方便收集该院产科收治疑似B族链球菌感染产妇共100例作为观察对象，对患者临床资料进行回顾性分析。100例产妇中，85例为初产妇，15例为经产妇，产妇年龄平均为（29.1±1.3）岁，孕周平均（36.7±0.3）周。

1.2 方法

1.2.1 PCR法 将患者阴道直肠拭子标本等级后于4.0℃冰箱中保存，检测分析前将1.0 mL剂量清洗缓冲液加入拭子管内，高速震荡处理2.0 min后得到标本悬浮液，并在13 000转/min的条件下进行离心处理，处理时间为5.0 min，经离心处理后弃上层清液，沉淀部分加入100.0 μL剂量清洗缓冲液重悬，加入提取固形物，高速震荡处理5.0 min，以达到破碎细胞的效果。在此基础之上于95.0℃条件进行干浴处理2.0 min，后立即转为冰浴处理5.0 min，再次按照13 000转/min的條件下进行离心处理，处理时间为1.0 min，上层清液用于扩增。根据B族链球菌核酸检测试剂盒以及PCR仪相关操作标准展开检测，以荧光信号出现S型扩增，CT值低于33为B族链球菌感染阳性诊断标准。endprint

1.2.2 细菌培养法 将患者阴道直肠拭子细菌接种于浓度5.0%养血培养基中，培养箱温度控制为37.0℃，培养时间为24.0 h，根据菌落形态、溶血特征以及显微镜下所见确定链球菌，在此基础之上通过组合型特异性血清免疫实验的方式最终明确诊断为B族链球菌感染。

1.3 观察指标

以最终诊断结果为金标准，对比PCR法与细菌培养法在孕妇产前B族链球菌感染检测中的准确度以及特异性差异。

1.4 统计方法

数据以SPSS 19.0统计学软件分析，以（x±s）表示计量资料，经t检验；以率（%）表示计数资料，经χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

以最终诊断结果为金标准，100例疑似B族链球菌感染孕妇中，共76例孕妇明确诊断为B族链球菌感染阳性，另24例孕妇B族链球菌感染检测为阴性。应用PCR法对B族链球菌感染检测的准确度为97.37%（74/76），特异性为95.83%（23/24），应用细菌培养法对B族链球菌感染检测的准确度为81.58%（62/76），特异性为70.83%（17/24）。两组对比，PCR法用于孕妇产前B族链球菌感染检测准确度显著高于细菌培养法（χ2=13.256，P<0.05），特异性显著高于细菌培养法（χ2=11.005，P<0.05），差异有统计学意义。见表1、表2。

3 讨论

目前临床实践中针对疑似B族链球菌感染带菌者孕妇的检测窗口时间已有共識[3]，即在的孕周35～37周时于阴道肛门同时取样并进行分析。以往临床以细菌培养法为B族链球菌感染的首选诊断方案[4]，但近来也有报道中指出PCR法在诊断B族链球菌感染方面的价值同样确切[5]。该研究中观察数据显示：应用PCR法对B族链球菌感染检测的准确度为97.37%（74/76），特异性为95.83%（23/24），应用细菌培养法对B族链球菌感染检测的准确度为81.58%（62/76），特异性为70.83%（17/24）。两组对比，PCR法用于孕妇产前B族链球菌感染检测准确度、特异性均显著高于细菌培养法，差异有统计学意义（P<0.05）。提示在孕妇产前B族链球菌感染的诊断中，应用PCR法的效果优于细菌培养法。该研究结果与陈明发等[6]研究结果“荧光定量PCR检测法阳性率显著高于细菌培养法（19.51% vs.9.72%），差异有统计学意义”基本一致，证实结论有高度可靠性。

作为一种快速且高效的临床病原微生物检测方法，PCR可通过对不同种属特异性核算序列设计引物以及不同荧光染料标记探针的应用，在高通量检测仪器的辅助下完成具有快速性、敏感性且高通量性的闭盖检测，具有检测结果准确可靠，敏感性高的优势[7]。除此以外，在应用PCR法进行B族链球菌感染检测的过程中，检出时间可控制在6.0 h左右，明显低于细菌培养法下的耗时，因此更具临床实践意义[8]。

综上所述，在孕妇产前B族链球菌感染检测中，应用PCR法的检测效果明显优于细菌培养法，具有准确度高、特异性高的优势，值得推广应用。

[参考文献]

[1] 时春艳，曲首辉，杨磊，等.妊娠晚期孕妇B族链球菌带菌状况的检测及带菌对妊娠结局的影响[J].中华妇产科杂志，2010，45（1）：12-16.

[2] 何苑苑，赵江红，余艳萍，等.妊娠晚期B族链球菌阳性孕妇血清IL-6、降钙素原水平变化及意义[J].山东医药，2015（48）：82-83.

[3] 杨静，徐丁，尹立琴，等.基于聚合酶链式反应列阵技术对甘肃省儿童医院新生儿B族链球菌感染的调查研究[J].中华儿科杂志，2013，51（9）：688-691.

[4] 边佳明，丁媛媛，杨凡，等.拭样增菌对实时荧光PCR法检测孕妇B族链球菌感染的影响[J].现代检验医学杂志，2012，27（6）：102-104.

[5] 许媛媛，陈红波，孟祥莲，等.围生期B族链球菌感染对足月孕妇妊娠结局的影响[J].蚌埠医学院学报，2016，41（12）：1651-1654.

[6] 陈明发，黄佳.荧光定量PCR在妊娠35～37周B族链球菌感染检测中的应用及妊娠结果分析[J].标记免疫分析与临床，2017，24（3）：275-278.

[7] 张怡，张蕾，谢晓丹，等.围产期B族链球菌感染对妊娠结局的影响[J].生物技术通讯，2016，27（5）：696-698.

[8] 秦利，张利侠，袁军，等.孕妇生殖道B族链球菌感染与胎膜早破的关系及其对母儿预后的影响[J].国际检验医学杂志，2013，34（8）：928-929.

（收稿日期：2017-04-19）endprint