湖羊小反刍兽疫活疫苗临床免疫跟踪试验

胡仁莉 顾津僮 俞小红 陈玲 （江苏省苏州市动物疫病预防控制中心 215128）

湖羊小反刍兽疫活疫苗临床免疫跟踪试验

胡仁莉 顾津僮 俞小红 陈玲 （江苏省苏州市动物疫病预防控制中心 215128）

通过对羔羊母源抗体及接种免疫后不同时期羊群免疫抗体的跟踪监测，并选用法国ID-VET和青岛立见两种品牌比较能代表进口和国产小反刍兽疫抗体检测的试剂盒进行比对检测，同时对监测数据进行整理分析，最终掌握小反刍兽疫抗体的消长规律及影响因素，进一步了解该疫苗在苏州市湖羊羊群中的免疫效果。结果显示：湖羊的母源抗体水平在出生1月龄左右降低到50%左右，此时应进行疫苗免疫，该疫苗免疫后7d左右，免疫抗体迅速转阳，高阳性率仅能维持1个月左右，之后一直维持在较低水平。两种试剂盒比较结果都为阳性的18份，阳性符合率为40%，都为阴性的99份，阴性符合率为86%，阴阳性符合率为73%。

湖羊；小反刍兽疫；疫苗；抗体；效果试验

小反刍兽疫 （Peste Des Petits Ruminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒 （PPRV）引起的小反刍兽一种急性高度接触性传染病，山羊、绵羊等是主要易感动物，我国将该病列为一类动物传染病[1]。近年来，小反刍兽疫在全国的流行形势比较严峻，目前对于该病的防制措施仍是以疫苗免疫为主。湖羊是世界著名多胎绵羊品种之一，原产于太湖流域，苏州市是湖羊产地之一。苏州市政府亦将湖羊纳入苏州地方优质品种保护名录，为更好地做好湖羊保护，本试验旨在了解该疫苗对湖羊群体的抗体动态变化情况，分析抗体消长规律，为该疫苗对湖羊的防制提供理论依据。

1 材料和方法

（1）苏州市湖羊保种场随机选取出生日期一致的30头羔羊 （试验中死亡5只），以及日龄相近的40头为免疫小羊。

（2）羔羊分别于0、7、14和26日龄采血进行母源抗体跟踪监测；40头小羊分2组进行试验，一组为小反刍兽疫、口蹄疫及三联四防同时免疫组，一组为口蹄疫和三联四防先免，免后半个月再进行小反刍兽疫免疫。

（3）试验疫苗：本试验所用小反刍兽疫疫苗为政府招标采购苗，新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的小反刍兽疫活疫苗，批号为2015015-1。

（4）检测试剂：小反刍兽疫抗体检测试剂盒分别购自法国ID-VET和青岛所立见诊断技术中心。

（5）检测方法和结果判定：依据试剂盒说明书。

2 结果与分析

2.1 羔羊小反刍兽疫母源抗体消长

羔羊小反刍兽疫母源抗体消长结果见图1、表1。

表1 羔羊小反刍兽疫母源抗体消长结果

图1

图2

从本图表的法国ID-VET试剂盒检测结果可以看出，新生羔羊在出生当天，母源抗体阳性率已达73%，7日龄时母源抗体水平最高，抗体阳性率达74%，14日龄时母源抗体水平稍有下降，到26日龄时，母源抗体阳性率迅速下降到52%，已到达群体抗体保护临界水平，此时应进行疫苗免疫。小反刍兽疫活疫苗的推荐免疫程序为羔羊满1月龄免疫，该试验结果与疫苗推荐免疫时间基本吻合。对比青岛立见试剂盒检测结果，虽然阳性率总体比ID-VET低4～20%，但二者检测出的母源抗体消长变化曲线基本一致，而且在羔羊26日龄时，母源抗体阳性率也迅速下降到48%，同样提示此时应该进行疫苗免疫。

2.2 免疫后小羊抗体消长

免疫后小羊抗体消长结果见图2、表2和表3。

表2 同时免疫组小羊小反刍兽疫抗体消长结果

表3 先后免疫组小羊小反刍兽疫抗体消长结果

从本图表的法国ID-VET试剂盒检测结果可以看出，免疫后7d，该组羊群小反刍兽疫免疫抗体转阳率达80%；免后14d左右抗体转阳率也为80%；因该组免后21d正值春节放假，所以漏采一次；免后1个月抗体阳性率迅速下降，之后抗体阳性率一直维持在较低水平。对比青岛立见试剂盒检测结果，同样阳性率总体比ID-VET低，但二者检测出的小羊免疫抗体消长变化曲线基本一致。

从本图表的法国ID-VET试剂盒检测结果可以看出，免疫后6d，该组羊群小反刍兽疫免疫抗体转阳率达75%；免后10d抗体转阳率最高，为90%；免后20d，抗体转阳率有所下降，为80%；该组免后1个月因正值春节放假，所以漏采一次；免后2个月抗体阳性率迅速下降到20%，之后抗体阳性率一直维持在较低水平。对比青岛立见试剂盒检测结果，同样阳性率总体比ID-VET低，但二者检测出的小羊免疫抗体消长变化曲线基本一致。

表4 法国ID-VET和青岛立见检测符合率分析结果

图3

2.3 不同试剂盒结果符合率比较

分别应用法国ID-VET和青岛立见两种目前使用较广泛，具有代表性的进口和国产品牌试剂盒对160份羊血清样品进行检测，检测结果见表4。

表4可见两种试剂盒对所检测血清样品结果都为阳性的18份，阳性符合率为40%，都为阴性的99份，阴性符合率为86%，阴阳性符合率为73%。不完全符合的有43份，其中ID-VET检测为阳性、立见检测为阴性的26份；ID-VET检测为可疑，立见检测为阴性的16份；ID-VET检测为可疑，立见检测为阳性的1份。两种试剂盒对抗体阴性样品的检出率均较高，在阳性样品的检出情况差异较大，ID-VET试剂盒阳性样品检出率明显高于立见试剂盒，而本次试验中抗体阴性样品占有很大比例，所以在一定程度上也影响了阴阳性符合率结果。

我们在对40份羔羊样本进行跟踪检测发现，同一样品的结果不全是按照抗体消长规律，其中有部分样品出现了转阴转阳交替出现的现象，ID试剂盒检出7份，立见试剂盒检出5份。查阅相关资料发现与何利昆、段亚良等人研究的“其余21%的羊在免疫后7～28d体内抗体水平变化情况并不规律，在不同时间内分别出现阳转阴或阴转阳情况。样品回溯确认这21%的样品全部来源于绵羊个体”[2]基本吻合。

3 讨论

（1）因该试验为2016年1月11日正式开始，恰逢2月初春节放假一周，所以羔羊母源抗体跟踪采样和小羊免疫后跟踪采样并没有完全按照我们方案制定的每隔7天采一次样，每组均少采了一次，但这并不影响总体的抗体消长走势。

（2）湖羊属绵羊是苏州的地方保护品种，在苏州地区开展本试验还是比较有意义的。从本试验中可以得出，新出生湖羊羔羊免疫日龄为1月龄，这与疫苗说明书推荐免疫日期一致，但说明书中推荐小反刍兽疫活疫苗免疫1针的有效期为3年，从本试验的免疫抗体维持时间来看，小羊免后1～2个月后，免疫抗体迅速下降，之后一直维持在较低水平，单纯从本试验的免疫抗体结果来看，并不能说明免疫1针能维持3年的免疫抗体。同时本试验中出现抗体水平动态变化不规律，部分样品出现了转阴转阳交替出现体的现象，说明该疫苗的免疫效果可能也跟羊的品种有关。中国兽医药品监察所的尹春生博士在《小反刍兽疫活疫苗临床试验研究》中写道 “竞争ELISA法和中和试验法都是OIE推荐的抗体检测方法，但根据我们实验室多次试验结果，OIE参考实验室提供的竞争ELISA试剂盒的敏感性低于中和试验法，其中原因有待于进一步研究”[3]。也就是说我们现在用间接ELISA检测出的阳性率可能低于中和试验，中和试验结果更能准确反映血清抗体水平和个体抗病毒能力。

（3）关于两种检测试剂盒比较。由于待检样本是未知的，因此只能说两种检测结果不同，而试验结果只能反映两种试剂盒的一致性程度，数据仅供相关人员选用进口或国产检测试剂盒时参考。若要深入分析二者孰优孰劣，敏感性特异性如何，则需设置一定数量的小反刍兽疫阴阳性血清开展比较试验，通过统计学分析以获得更多的数据。

[1]王军.小反刍兽疫的科学防控[J].现代畜牧兽医,2014(6)：51-55.

[2]何利昆,段亚良,谷志大,等.辽宁省小反刍兽疫疫苗临床免疫效果跟踪试验及抗体水平动态观察[J].现代畜牧兽医,2014(8)：14-18.

[3]印春生,支海兵,王乐元,等.小反刍兽疫活疫苗临床试验研究[J].中国兽药杂志,2010,44(7)：1-5.