全蝎保健酒的增强免疫力功能研究

范治云，曲见松，李志坤，赵艳霞，祝清芬

（山东省食品药品检验研究院，山东济南250101）

全蝎保健酒的增强免疫力功能研究

范治云，曲见松，李志坤，赵艳霞，祝清芬

（山东省食品药品检验研究院，山东济南250101）

研究全蝎保健酒对小鼠免疫功能的影响。将SPF级ICR雄性小鼠200只随机分为4个实验组，每个实验组动物分为空白对照组、溶媒对照组、低、中、高剂量组（0.85、1.7、5.1 g/kg·bw）5组。空白对照组给予纯化水，溶媒对照组给予15%的酒基，连续灌胃30 d，每日1次。检测全蝎保健酒对刀豆蛋白A（Concanavalin A）诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、迟发型变态反应、血清溶血素水平、抗体生成细胞数、小鼠碳廓清能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力及NK细胞活性等免疫指标的影响。与溶媒对照组比较，全蝎保健酒高剂量组能显著增强小鼠的脾淋巴细胞增殖能力（P＜0.05），能明显促进小鼠迟发型变态反应（P＜0.05），能显著提高小鼠抗体生成细胞数水平（P＜0.05）；高、中剂量组可显著增强NK细胞活性（P＜0.05）；但全蝎酒各剂量组对小鼠胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、血清溶血素水平、碳廓清能力及巨噬细胞吞噬鸡红细胞作用无明显影响（P＞0.05）。全蝎保健酒具有增强小鼠免疫力的功能。

全蝎保健酒；免疫功能；小鼠

Abstract：To study the impact of Quanxie health-care wine on immunity function in mice.A total of 200 SPF ICR male mice were randomly divided into 5 batches，each of which consisted of negative control group，vehicle control group and high，medium and low dosage （0.85，1.7，5.1 g/kg·bw）of Quanxie health-care wine group.The negative control group was given purified water，the vehicle control group was given 15%wine base，and each mouse was orally administered once a day，for 30 days.The immune indexes including ConA-induced lymphocyte transformation ability，delayed type hypersensitivity，serum hemolysin level，antibody producing cell count，carbon clearance ability，macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity and NK cell activity were detected.Compared with the vehicle control group，high dosage of Quanxie health-care wine group could significantly strengthen the ConA-induced lymphocyte transformation ability of mice （P＜0.05），enhance the delayed type hypersensitivity of mice（P＜0.05）and increase the level of antibody producing cell（P＜ 0.05）；the medium and low dosage of Quanxie health-care wine group could significantly strengthen NK cell activity.However，Quanxie health-care wine had no significant effects on ratio of spleen weight to body weight，ratio of thymus weight to body weight，serum hemolysin level，carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity（P＞0.05）.Quanxie health-care wine can enhance immunity function in mice.

Key words：Quanxie health-care wine；immunity function；mice

全蝎保健酒由全蝎、人参、制何首乌等药材提取液加酒基调制而成。蝎子强身治病民间有数千年的历史，《本草纲目》记载蝎子入药可治如下疾病：“诸风癔疹，及中风半身不遂，口眼歪斜，语涩，手足抽掣。小儿惊惶风搐，大人疴疟，耳聋疝气，诸风疮，女人带下阴脱”等。近几年对全蝎用于炎症[1]、肿瘤的研究也有大量报道[2-3]。中国药典记载：人参大补元气，复脉固脱，补脾益肺；制何首乌补肝肾，益精血。本文依照《保健食品检验与评价技术规范》中有关增强免疫力功能的检测方法，研究全蝎酒的增强免疫力的作用，为其作为保健品应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 受试物

全蝎保健酒，批号：201408300101，规格：125 mL/瓶，性状：金黄色液体，由某酒业有限公司提供。保存条件：密闭，常温干燥处，保质期：24个月。

1.2 实验动物

SPF 级 ICR 小鼠，200只，雄性，体重 18 g～22 g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SCXK（鲁）20140007。饲养环境：屏障级动物实验室，许可证号：SYXK（鲁）2013 0012。温度：20℃～25℃，日温差≤3℃，湿度：40%～70%，换气次数：≥10次/h。照明时间：12 h明暗交替。

1.3 仪器与试剂

BSA4202S电子天平：德国Sartorius公司；二氧化碳培养箱：德国memmert公司；紫外可见分光光度计：日本岛津公司；酶标仪：美国MD公司；3k30离心机：德国希格玛公司；显微镜：奥林巴斯公司；恒温水浴锅：上海树立仪器仪表有限公司。

RPMI1640细胞培养液、胎牛血清、HBSS液、Triton试剂、0.2 moL/L tris-HCl缓冲液等：自索莱宝公司；刀豆蛋白 A（Concanavalin A，缩写 ConA）、MTT：Sigma-Aldrich公司；YAC-1细胞：山东省医学科学院；绵羊红细胞（SRBC）、补体（豚鼠血清）、鸡红细胞临用制备。

1.4 方法

1.4.1 实验分组及受试物给予方式

小鼠按体重随机分为4个免疫大组，每免疫大组小鼠50只，分为溶媒对照组、受试物低、中、高剂量组及空白对照组5个小组，每小组10只。免疫一组用于迟发型变态反应（DTH）实验、血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定；免疫二组用于小鼠碳粒廓清实验及脏器体重比值的测定；免疫三组用于小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定；免疫四组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。设全蝎酒低、中、高剂量分别为0.85、1.7、5.1 g/kg·bw（按合生药材计），相当于人体推荐量的5、10、30倍剂量。临用前用提供单位提供的曲酒将受试物配制成含15%的酒精的相应受试物溶液。各组小鼠灌胃体积为20 mL/kg，溶媒对照组给予同等体积的15%的酒精，空白对照组给予同等体积的纯化水，每天灌胃1次，连续30 d。

1.4.2 淋巴器官脏器/体重比值测定

每周称量所有动物体重，结束时处死小鼠。取出免疫二组小鼠的胸腺和脾脏，称重并计算脏/体比值。脏/体/%=脏器重量/动物体重×100。

1.4.3 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验及NK细胞活性测定

末次给予受试样品后，处死小鼠，无菌操作下取脾，研磨制成单个脾细胞悬液后分成两份（1号和2号），过200目筛网后HBSS液洗2次，用RPMI 1640培养液调整细胞浓度至3×106个/mL（1号悬液）和2×107个/mL（2号悬液）。1号悬液用MTT法检测经ConA诱导的小鼠淋巴细胞的增殖能力；以2号悬液为效应细胞，取对数生长期的YAC-1细胞，调整细胞终浓度至4×105个/mL作为靶细胞，依照LDH测定法进行检测，酶标仪492 nm处测定光密度值，计算NK细胞活性。

1.4.4 迟发型变态反应（DTH）、血清溶血素测定及抗体生成细胞检测

小鼠腹腔注射0.2 mL 2%（体积比）SRBC致敏后4 d，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20%（体积比）SRBC，每只小鼠注射 20 μL，注射后于24 h测量左后足跖部厚度，同一部位测量3次，取平均值。以攻击前后足跖厚度的差值表示迟发型变态反应的程度。将小鼠摘除眼球取血，半数溶血值HC50测定法进行血清溶血素的测定。随后处死小鼠，制备脾细胞悬液，调整细胞浓度为5×106个/mL。按Jerne改良玻片法进行抗体生成细胞检测，计数溶血空斑数，以空斑数/全脾细胞表示。

1.4.5 小鼠碳廓清实验

末次给予受试物后，称体重，从小鼠尾静脉10 mL/kg注入稀释4倍的印度墨汁，注入后2、10 min，分别从内眦静脉丛取血20 μL，并立即加到2 mL 0.1%Na2CO3溶液中。以0.1%Na2CO3溶液作空白对照，紫外分光光度计检测600 nm波长处的吸光度值。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，称重，计算吞噬指数。

1.4.6 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

每只小鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1 mL，注射后30 min，颈椎脱臼处死小鼠，按半体内法检测，计算吞噬率和吞噬指数。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件对数据进行方差分析和Dunnett’s t检验。

2 结果与分析

2.1 全蝎酒对对小鼠淋巴器官脏器/体重比值的影响全蝎酒各剂量组小鼠胸腺/体重比值和脾脏/体重

比值与阴性对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 全蝎保健酒对小鼠脏器/体重比值的影响（s）Table 1 The effects of Quanxie health-care wine on ratio of spleen weight and thymus weight to body weight of mice

表1 全蝎保健酒对小鼠脏器/体重比值的影响（s）Table 1 The effects of Quanxie health-care wine on ratio of spleen weight and thymus weight to body weight of mice

胸腺/体重比值/（mg/g）溶媒对照组 0 10 2.96±0.53 1.65±0.48低剂量组 0.85 10 3.00±0.66 1.56±0.45中剂量组 1.7 10 2.93±0.55 1.94±0.50高剂量组 5.1 10 2.74±0.38 1.84±0.46空白对照组 0 10 2.95±0.38 1.46±0.55组别 剂量/（g/kg·bw）动物只数脾脏/体重比值/（mg/g）

2.2 全蝎保健酒对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠迟发型变态反应的影响

全蝎保健酒高剂量组可增强小鼠的脾淋巴细胞增殖能力，增强小鼠迟发型变态反应能力，与溶媒对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠迟发型变态反应实验结果（s）Table 2 The effects of Quanxie health-care wine on the ConA-induced lymphocyte transformation ability and the delayed type hypersensitivity of mice

表2 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠迟发型变态反应实验结果（s）Table 2 The effects of Quanxie health-care wine on the ConA-induced lymphocyte transformation ability and the delayed type hypersensitivity of mice

注：*P＜0.05（与溶媒对照组比较，Dunnett’s t检验）。

足跖肿胀度/mm溶媒对照组 0 10 0.29±0.90 0.28±0.08低剂量组 0.85 10 0.30±0.06 0.28±0.07中剂量组 1.7 10 0.34±0.11 0.32±0.09高剂量组 5.1 10 0.40±0.11* 0.37±0.08*空白对照组 0 10 0.29±0.08 0.28±0.07组别 剂量/（g/kg·bw）动物只数加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值

2.3 全蝎保健酒对小鼠抗体生成细胞数、血清溶血素的影响

全蝎保健酒高剂量组能显著提高小鼠抗体生成细胞数水平，与溶媒对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。全蝎保健酒各剂量组对小鼠血清溶血素水平无显著影响，与溶媒对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 小鼠抗体生成细胞数、血清溶血素检测结果（s）Table 3 The effects of Quanxie health-care wine on the level of antibody producing cell and the serum hemolysin of mice

表3 小鼠抗体生成细胞数、血清溶血素检测结果（s）Table 3 The effects of Quanxie health-care wine on the level of antibody producing cell and the serum hemolysin of mice

注：*P＜0.05（与溶媒对照组比较，Dunnett’s t检验）。

半数溶血值（HC50）溶媒对照组 0 10 22.08±4.97 187.14±14.32低剂量组 0.85 10 23.78±6.78 191.78±15.23中剂量组 1.7 10 26.86±6.76 196.63±11.19高剂量组 5.1 10 28.96±5.39* 199.76±13.29空白对照组 0 10 22.46±5.50 193.28±10.43组别 剂量/（g/kg·bw）动物只数溶血空斑数（×103/全脾）

2.4 全蝎保健酒对小鼠碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

全蝎保健酒各剂量组对小鼠碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力均无影响，与溶媒对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表4。

表4 小鼠碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测定结果（s）Table 4 The effects of Quanxie health-care wine on the carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity of mice

表4 小鼠碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测定结果（s）Table 4 The effects of Quanxie health-care wine on the carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity of mice

腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验吞噬百分率 吞噬指数溶媒对照组 0 10 4.17±0.83 0.42±0.10 0.22±0.11低剂量组 0.85 10 4.97±0.73 0.45±0.08 0.26±0.09中剂量组 1.7 10 4.38±0.98 0.47±0.15 0.27±0.14高剂量组 5.1 10 4.85±0.79 0.47±0.11 0.29±0.10空白对照组 0 10 4.24±0.93 0.41±0.09 0.21±0.09组别 剂量/（g/kg·bw）动物只数碳廓清实验吞噬指数（a）

2.5 全蝎保健酒对小鼠NK细胞活性的影响

全蝎保健酒中、高剂量组能增强小鼠NK细胞活性，与溶媒对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表5。

表5 小鼠NK细胞活性测定结果（s）Table 5 The effects of Quanxie health-care wine on the NK cell activity of mice

表5 小鼠NK细胞活性测定结果（s）Table 5 The effects of Quanxie health-care wine on the NK cell activity of mice

注：*P＜0.05（与溶媒对照组比较，Dunnett’s t检验）。

组别 动物只数 NK细胞活性百分率 NK细胞活性溶媒对照组 10 27.73±7.87 0.55±0.09低剂量组 10 33.86±11.13 0.62±0.12中剂量组 10 41.28±9.87* 0.70±0.10*高剂量组 10 41.03±11.70* 0.69±0.12*空白对照组 10 25.26±8.54 0.52±0.10

3 讨论与结论

本研究从细胞免疫、体液免疫、吞噬功能、NK细胞功能4个方面考察全蝎保健酒对小鼠免疫功能的影响，并观察其对动物免疫器官的作用，结果显示：ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验中，全蝎保健酒高剂量组可增强小鼠的脾淋巴细胞增殖能力，与溶媒对照组比较有显著性差异；迟发型变态反应实验中，全蝎保健酒高剂量组能增强小鼠迟发型变态反应能力。提示全蝎保健酒能增强小鼠的细胞免疫功能。NK细胞活性测定实验中，全蝎保健酒高、中剂量组NK细胞活性与溶媒对照组比较差异有显著性意义，提示全蝎保健酒具有增强NK细胞活性作用。根据《保健食品检验与评价技术规范》2003年版判定标准，认为全蝎保健酒具有增强免疫力功能的作用。

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[2]李永浩,卢冬彦,叶小卫,等.全蝎、蜈蚣水煎剂抗小鼠Lewis肺癌及其对免疫器官的影响[J].中药新药与临床药理,2015,26(3):311-312

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[4]中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[M].北京:中华人民共和国卫生部,2003:22-34

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版一部[M].北京:中国医药科技出版社,2015:8-9,176-177

Experimental Study on Quanxie Health-care Wine in Enhancing Immunity Function

FAN Zhi-yun，QU Jian-song，LI Zhi-kun，ZHAO Yan-xia，ZHU Qing-fen
（Shandong Institute of Food and Drug Control，Jinan 250101，Shandong，China）

2017-02-03

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.19.039

范治云（1970—），男（汉），副主任药师，硕士，研究方向：食品药品保健品药理毒理评价。