溴甲酚绿比色法检测γ—氨基丁酸含量

樊星+陈红+高雪峰+赵鹏+董贵成

摘 要：γ-氨基丁酸（GABA）会对溴甲酚绿、乙醛酸和琥珀酸的混合液有专一性的显色反应。显色剂溴甲酚绿、乙醛酸和琥珀酸的最适浓度分别为0.5 mg/mL、6mg/mL和4mg/mL，比例为1∶1∶1。测定GABA最适条件4mL样品溶液，加入2mL显色剂，混匀，在618nm测定吸光度。

中图分类号：TB 文献标识码：A doi：10.19311/j.cnki.16723198.2017.27.093

γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyric Acid，GABA）是一种非蛋白质的天然氨基酸。由谷氨酸（Glu）经谷氨酸脱梭酶（GAD）催化而来，是哺乳动物中枢神经系统中的重要的抑制性神经递质。GABA有镇静安神、增强记忆、抗晒老、调节食欲、改善脂质代谢等生理功能，在食品和医药等领域有重要作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

GABA：源叶生物；溴甲酚绿：天津市风船化学试剂科技有限公司；乙醛酸：萨思化学技术有限公司；琥珀酸：天津市福晨化学试剂厂；L-谷氨酸钠：国药集团化学试剂有限公司。

紫外可见分光光度计TU-1800：北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2 方法

1.2.1 显色剂的配制

配置0.5 mg/mL溴甲酚绿、6mg/mL乙醛酸、4mg/mL琥珀酸，并以比例1∶1∶1混匀。

1.2.2 最适波长的检测

吸取4mg/mLGABA标准溶液4mL，加入2mL显色剂，混匀。在紫外可见分光光度计检测最适波长。

1.2.3 显色条件的影响

（1）溴甲酚绿浓度的影响。

分别配置 0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mg/mL的溴甲酚绿溶液，与6mg/mL乙醛酸溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合为显色剂。4mg/LGABA标准溶液4mL，加入2mL显色剂，混匀，618nm处测定吸光度。

（2）乙醛酸浓度的影响。

分别配置2、4、6、8、10mg/mL的乙醛酸溶液，与05mg/mL溴甲酚绿溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合为显色剂。4mg/LGABA标准溶液4mL，加入2mL显色剂，混匀，618nm处测定吸光度。

（3）琥珀酸浓度的影响。

分别配置2、4、6、8、10mg/mL的琥珀酸溶液，与05mg/mL溴甲酚绿溶液，4mg/mL乙醛酸溶液以1：1：1的比例混合为显色剂。4g/LGABA标准溶液4mL，加入2mL显色剂，混匀，618nm处测定吸光度。

1.2.4 绘制GABA标准曲线

配置0.5、1、2、3、4g/L的GABA标准溶液，显色剂为0.5 mg/mL溴甲酚绿、6mg/mL乙醛酸和4mg/mL琥珀酸以1∶1∶1的比例混合。吸取各浓度GABA标准溶液4mL，与2mL显色剂混合均匀，在618nm处测吸光度。

1.2.5 精密度实验

2.5mg/mLGABA标准溶液，以1.2.4的方法进行操作，测定吸光值。

1.2.6 回收率实验

5mL 1g/L和4g/L的GABA标准溶液分别加入5mL 2.5g/L的GABA标准溶液，以1.2.4的方法操作，重复测定3次吸光度。

2 结果与讨论

2.1 波长的选择

经紫外可见光分度计测定，溶液在618nm处有最大吸收峰。

2.2 溴甲酚绿浓度的影响

如图1所示，随着显色剂中溴甲酚绿浓度增加，吸光度呈线性增加。溴甲酚绿与乙醛酸、琥珀酸共同作用，才会对GABA有专一性显色反应。若溴甲酚绿浓度过高，会对其作用有影响。而且，吸光度数值越大，误差越大。最后，溴甲酚绿浓度选用0.5mg/mL。

2.3 乙醛酸浓度的影响

如图2所示，随着显色剂中乙醛酸浓度增加，反应液吸光度呈下降趋势。降低乙醛酸浓度，会提高反应液的吸光度，但过低的乙醛酸浓度，会对其与溴甲酚绿、琥珀酸的共同显色反应有影响。最后，乙醛酸浓度选用0.6mg/mL。

2.4 琥珀酸浓度的影响

如图3所示，琥珀酸浓度在4mg/mL时，反应液吸光度有峰值，并且吸光度处在合理范围内，误差不会太大。所以，琥珀酸浓度选用0.4mg/mL。

2.5 标准曲线的建立

经过分析，GABA标准曲线的回归方程为y = 02493x - 0.0208，相关系数R2 = 0.996，相关系数大于099，此方程可用。

2.6 精密度實验

吸取2.5g/L的GABA标准溶液，在618nm处重复测定6次吸光度，6次吸光度分别为0.560，0.551，0.556，0.563，0.556，0.550。相对标准偏差（RSD）为0.90%，RSD小于5%，本方法有良好的重现性。

2.7 回收率实验

如表1所示，平均回收率为97.09%，平均RSD为 4.08%，说明本方法准确率较好。

3 结论

GABA会对溴甲酚绿、乙醛酸和琥珀酸的混合液有专一性的显色反应在618nm处有最大吸收峰。显色剂溴甲酚绿、乙醛酸和琥珀酸的最适浓度分别为0.5 mg/mL、6mg/mL和4mg/mL，比例为1∶1∶1。测定GABA最适条件4mL样品溶液，加入2mL显色剂。标准曲线的回归方程为y = 0.2493x - 0.0208，相关系数R2 = 0.996。精密度试验RSD为0.90%，平均回收率为97.09%。

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