蒙药荜茇提取物胡椒碱对孕鼠的影响

海 英 阿古拉 双 福 乌兰其其格 山丹

(1.北京中医药大学，北京 100029；2.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110；3.内蒙古国际蒙医院 ，呼和浩特 010110)

蒙药荜茇提取物胡椒碱对孕鼠的影响

海 英1,2阿古拉2*双 福3乌兰其其格2山丹3

(1.北京中医药大学，北京 100029；2.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110；3.内蒙古国际蒙医院 ，呼和浩特 010110)

目的：了解蒙药荜茇降血脂有效成分胡椒碱对Wistar孕鼠的影响。方法妊娠的雌性Wistar大鼠随机分成阴、阳性组及高、中、低剂量组每组12只, 称重和编号。孕鼠于妊娠第7～16d 分别灌胃胡椒碱(高剂量287.04m g/kg、中剂量71.76mg/kg、低剂量17.94mg/kg), 阳性对照组于孕期11d一次腹腔注射环磷酰胺, 于妊娠第20d处死。分析胚胎发育指标, 检查有无外观畸形和骨骼畸形。结果与对照组比较, 胡椒碱高、中剂量组对孕鼠体重增长及胎鼠生长指标有显著性差异(P<0.05 )；高剂量组对胎鼠外观畸形和骨骼畸形未见显著增加。结论本实验剂量与条件下荜茇胡椒碱高、中剂量组使孕鼠体重增长、胎鼠生长指标缓慢或下降；低剂量组对胎鼠外观、骨骼和内脏均无显著影响。

蒙药;荜茇;胡椒碱;孕鼠

荜茇(Piper longum L.)是胡椒科多年野生草本植物荜茇的干燥未成熟果，味辛,性温、有腻、锐、轻、燥等功效，具有调理胃温,祛“巴达干·赫依”,调节体素,滋补强壮,平喘祛痰,止痛等功能。主治胃火衰败,不思饮食,不消化病等寒性疾病[1]。为进一步了解其安全性,对荜茇提取物胡椒碱对孕鼠敏感期是否有毒性进行了研究。

1 材料

Wistar大鼠,♀200 ～230g 150只, ♂250 ～270g, 75 只。由内蒙古大学动物中心提供。洁净度国家二级, 批号: 京动字8806M35 ，荜茇胡椒碱( Piperine , 简称PP不规范， 用Pip.)。从荜茇中自行提取、分离。经内蒙古药品检验所测定纯度≥98%。用蒸馏水配置成不同浓度( 高剂量71.76 mg/mL、中剂量17.99 mg/mL、低剂量4.48 mg/mL放到“方法”里)的混悬液(简称PPA),避光保存。注射用环磷酰胺(Cyclophosphamide for Injection,简称CP，用Cyc.为什么不用口服制剂？),批号:国药准字H31021703, 规格:200 mg/支，茜素红( 批号:711217,北京化工厂)、氢氧化钾(批号:960711,呼和浩特化学试剂厂)、丙三醇(甘油C3H8O3) ( 批号:20041115 , 天津市凯通化学试剂有限公司)、冰醋酸(批号:20040620,天津化学试剂有限公司)、1%水合氯醛,2、4、6三硝基酚(批号:20030901,广州化学试剂厂)、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等,均为分析纯。

2 方法[2-7]

取性成熟而未交配过的大鼠,按雌雄2:1交配,发现阴道栓作为妊娠的“0”d,检出的“孕鼠”随机分为5组, 每组12只,称重和编号。其中3组作为PPA高、中、低剂量组。根据PPA半数致死量( LD50=1148.15mg/kg)设计,分别相当于LD50的1/4、1/16和1/64,即高剂量组287.04 mg/kg·d-1、中剂量组71.76 mg/kg·d-1、低剂量组17.94 mg/kg·d-1, 于妊娠第7～16d每天灌胃；对照组(蒸馏水)在孕期第7～16 d，每天以5 mL/kg馏水灌胃；阳性对照组(环磷酰胺 配置方法)以10 mg/kg孕期第11d一次性腹腔注射环磷酰胺。受孕后7～16d称重,并记录妊娠第0、3、6、9、12、15 、18、20d的体重。孕鼠于妊娠第20 d处死, 剖腹暴露子宫,检查受孕情况, 记录着床数、吸收胎、死胎和活胎鼠。活胎鼠记录胎仔体重、体长、尾长并检查胎鼠外观有无异常。将每窝1/3活胎不剥皮在中性甲醛液中固定2～3周后检查内脏,再取出肝、肾、子宫和睾丸做病理切片,观察有无病变。将每窝2/3的活胎剥皮去除内脏后放入无水乙醇中固定48h～72h, 即转入1% KOH溶液中3～5d后将此溶液弃去, 加入茜素红应用液进行染色,直到胎鼠骨骼全部染成桃红色为止,染色后将胎鼠置于透明液A、B中各1～2d, 经上述处理的胎鼠, 放于平皿中用放大镜进行观察。

2 结果

2.1 PPA对孕鼠体重的影响：与对照组比较，胡椒碱3个剂量组和阳性对照组0～6d体重增长无显著性差异(P>0.05)。6～20d体重增长情况经方差分析比较，PPA高、中剂量组与对照组比较有极显著差异(P<0.01),PPA低剂量组、阳性对照组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。

实验表明，胡椒碱高、中剂量组对孕鼠体重增长有影响,见表1 、2 。

表1 PPA 对孕鼠体重增长的影响

注：与模型组比较，*P<0.001 ，与第2wk比较，#P<0.001，与第2、4wk比较，△P<0.001.

表2 各组孕鼠体重增长的情况

注: 与对照组比较，※P<0.05

2.2 PPA 对胎鼠发育的影响：对胎鼠体重、体长、尾长、胎盘重量等指标PPA 高、中剂量组及阳性对照组与对照组比较差异有显著性(P<0.05)，低剂量组则无统计学意义(P>0.05)，实验表明，荜茇胡椒碱高、中剂量组与阳性对照组对胎鼠体重、体长、尾长、胎盘重量增长有显著影响(P<0.05)， 见表3 。

表3 PPA对胚胎发育基本情况比较

注:与对照组比较，※P< 0.05

3 讨论

蒙药荜茇降血脂有效成分胡椒碱在本实验条件下, 中、高剂量对胚胎发育有明显影响，对孕鼠体重增长、胎鼠早期生长均有影响；低剂量则无观察到明显影响。因此, 含有胡椒碱成分的荜茇药材, 用于孕妇时应慎用或注意剂量和疗程, 胡椒碱或胡椒碱衍生物制剂, 建议认真完成致畸实验研究。(增加一些文献内容并加以讨论)

[1]罗布桑等,蒙药学[M].呼和浩特：民族出版社，1989:189.

[2]吴德生,董奇男,衡正昌,等.在致畸研究中小鼠胎鼠发育迟缓的评价指标[J].四川医学院学报,1984, 15(1):59-63 .

[3]陈奇.药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1987:120 .

[4]周文江,乔伟伟,杨丽萍,等.血尔宝补铁蛋白咀嚼片对大鼠胚胎致畸作用的研究[J].上海交通大学学报( 农业科学版),2003.6.21(2):116-120 .

[5] 李健,张玲,等.甲基汞对大鼠胚胎毒性的研究[J].昆明医学院学报,1999.(3):9.

[6]贾庆军,周燕虹, 等.传统致畸试验中鼠骨骼标本制备方法改进[J]. 白求恩军医学学报,2005-3,3(1):54-55.

[7]杨丽萍, 杨幼明,等.黄芩对大鼠胚胎致畸作用的观察[J].中国比较医学杂志,2003-6,13(3):155-158.

海英，博士生，副教授，从事蒙医药传统理论基础与应用研究，Tel:15947716564，E-mail:153658748@qq.com

*通讯作者:阿古拉，教授，博士生导师，从事蒙医疗术学现代研究，Tel:13804745237， E-mail:agula372000 @126.com

R291.2

A

1006-6810(2017)05-0068-02

2017年月日收稿