猪繁殖障碍性疾病的病原鉴定

（江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300）

1 前言

对于生猪养殖来说，猪繁殖障碍性疾病可以说是极为常见的疾病之一，而这其中猪蓝耳病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒所引发的繁殖障碍是最为常见的。但是无论是哪一种病毒所引发的，疾病的症状有类似之处，那就是母猪易出现流产、死胎、木乃伊胎，如果公猪的话，容易初心繁殖性障碍，如果是仔猪的话，以呼吸道症状为明显，死亡率也很高，关键是仔猪还很容易出现一些继发性感染和混合性的感染，进而给治疗带来极大的困难。在这样的现实背景下，及时对病原做出诊断，并且进行分离，依托血清学的调查，对上述几种病毒的免疫情况和感染情况进行初步确定，通过PCR的方法再对已经确诊的病原进行阳性病料的快速筛查，从而能够为快速分离鉴定病原提供有力的保障。

2 关于猪繁殖障碍性疾病病原鉴定的研究与分析

2.1 试验的材料

在病料方面，主要是从某猪场流产的母猪采集到8份血清，3头流产的胎儿。在这个猪场，经产的母猪以及后备的母猪都已经进行过猪乙型脑炎、细小病毒、圆环病毒以及猪瘟、繁殖与呼吸综合征疫苗的接种，但是并没有进行过猪伪狂犬病疫苗的接种。

在试剂方面，用到的主要就是猪瘟抗体、猪繁殖与呼吸综合征、主乙型脑炎、猪伪狂犬病以及猪细小病毒、猪圆环病毒抗体检测试剂盒，都是从某生物科技有限公司购买的。

2.2 试验的方法

试验的方法主要有ELISA检测和阳性病料的PCR筛选等。

首先，关于ELISA检测，对血清前血液样品进行离心分离处理，并且在37℃的条件下静置，时间大约是15min，然后再把它放置到冰箱中，温度控制在4℃，时间大约是20min，之后再将其在室温的条件下进行处理，离心处理建议按照4000转/min的速度进行，处理时间大约是5min，然后再把上清液进行收集，收集到EP管中，做好标记之后，根据试剂盒的实际要求，将稀释后的血清分别进行上面所提到六种病毒的ELISA抗体的检测。

其次，关于阳性病料的PCR筛选，第一步就是要对病料DNA的核酸进行提取，具体的做法就是取流产仔猪的脑、肾脏和脾脏等组织适量，对其进行研磨处理，研磨要充分，一直到研磨成均匀的浆状方可停止，然后将两毫升的分离缓冲液加入，待混合均匀之后，将组织悬液取出，剂量大约是400μl，去除之后放到实现准备好的容器中，采用科学的方法，对DNA进行提取，放置到冰箱中留以备用，温度条件控制在零下20℃。接下来需要做好引物的设计和PCR的扩增处理。

3 关于结果与分析

3.1 ELISA抗体血清学检测

从实验的数据中，我们可以看出，PRRSV、CSFV、PCV2、JEV和PPV以及PRV的阳性率分别是75%、87.5%和100%，这也就是说这个生猪养殖场的抗体合格率都已经超过了70%，已经达到了相关规定对此的要求。虽然这个养殖场并没有进行猪伪狂犬病疫苗的接种免疫工作，但是阳性率却是100%。这样的话，就是说这个养殖场疑似感染了猪伪狂犬病毒野毒，为了进一步确诊，就需要进行PRV和PCR的核酸分子检测。

3.2 PCR的扩增

对于送检的流产胎儿病料进行DNA的提取，经过PCR的扩增，所获取的两份病料和预期目的片段的大小是相符的特异性条带。

4 结语

依托六种病毒的ELISA抗体血清学的检测结果，立足于该生猪养殖场的免疫背景，在PRRSV、CSFV、PCV2以及JEV和PPV的阳性抗体合格率都达到了70%以上，而PRV的抗体阳性率则是100%，这个猪场虽然没有进行该种疫苗的接种免疫，这就说明疑似感染了野毒，从而为病原阳性病料的快速筛选奠定了有力的基础。通过对上面所提到六种能够导致母猪流产疾病进行的ELISA血清抗体检测的结果来看，分别对送检的三份病料进行PRV和PCR核酸检测，结果有两份病料是感染了PRV野毒的。

另外，伪狂犬病发病之后，发热、痒以及脑脊髓炎都是主要的症状表现，再加上这是一种急性传染病，危害严重。事实上，对于伪狂犬病来说，生猪是最为主要的寄主和传染源，因此很容易导致母猪的繁殖障碍和仔猪的批量死亡。

事实上，PCR和ELISA在生猪养殖场繁殖障碍性疾病中的配合使用，不仅仅可以实现对上述疾病的血清学抗体检测，同时依托于检测的结果，再依托对病料的PCR核酸特异性检测，就可以对阳性病料进行确定，这样的话，就有效避免了病料确定时候的盲目性，分离与鉴定工作也更加迅速。

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