鸡病毒性关节炎最新研究进展

张 宁 ，胡晓悦 ，韩 昱 ，卢军霞 ，赵志强 ，赵博伟

（1.河北省畜牧兽医研究所 071000；2.河北北方学院 075000；3.石家庄工程职业学院 050061；4.河北省畜牧站 050031）

鸡病毒性关节炎 (Viral arthritis)是由禽呼肠孤病毒(Avian reovirus)引起的，临床上以跗、趾关节肿大，腱鞘发炎，腓肠肌断裂，跛行为主要特征。1954年Faheyt Crawley首次从有慢性呼吸道疾病的鸡呼吸道内分离到禽呼肠孤病毒。美国、英格兰、澳大利亚、意大利、日本、荷兰、匈牙利等国均有报道，1985年我国王锡堃［1］等首次报道了鸡病毒性关节炎。目前我国河北、山东、黑龙江、上海、四川、云南、湖北等多个省市地区都有该病的报道。因该病不仅会导致跋行、生长停滞，还可引起免疫抑制，增加霉形体、鸡贫血因子、巴氏杆菌、大肠埃希氏杆菌、球虫等感染的机会，严重危害养殖业的发展，故应引起我们的高度重视。

1 病原学

呼肠孤病毒是RNA病毒，呈二十面体对称的双层衣壳结构，无囊膜。病毒粒子直径约为75nm，在氯化铯的浮密度为1.36～1.37g/mL。 ARV 对热有抵抗力，能耐受 60℃ 8～10h，56℃ 能够存活 22～24h 、37℃ 15～16周、4℃可以存活 3年以上、-63℃可以保存10年以上。半纯化病毒于60℃5h条件下，其毒价降低，但并不完全使病毒失活。氯化镁能够增强病毒对热的稳定性。ARV对乙醚不敏感，70%乙醇、0.5%有机碘和5%过氧化氢溶液可灭活病毒。

禽呼肠孤病毒各毒株之间存在大量的交叉反应，因此有些群不能作为独立的血清型，病毒通常以抗原亚型存在。Wood［2］等对发现了11个血清型，各血清型毒株之间存在有很大程度的交叉中和关系。

2017年钟丽［3］研究表明：不同地区、不同时间分离的流行毒株致病性不同。ARV病毒体内复制能力与其致病性存在正相关性；ARV体内复制能力并不是决定其致病性的唯一因素。某些基因片段单基因位点的突变可能会导致其致病性的不同，但具体位点仍需要进一步研究。

初次分离ARV一般用卵黄囊接种，在接种后3～5d鸡胚死亡。ARV还可以在绿猴肾细胞（Vero）、猪肾细胞（PK）和猫肾细胞（CRFK）、兔肾(PK)、乳地鼠肾细胞（BHK-21/13）、佐治亚牛肾（GBK）、来自被诱导的纤维肉瘤的日本鸽细胞系(QT35)和鸡淋巴母细胞内生长。

2 流行病学

鸡和火鸡是ARV的自然宿主。2017年我国尚丽元［4］报道了莫莫格保护区3例丹顶鹤发生病毒性关节炎的病例。ARV可通过与感染动物接触水平传播，也可通过鸡胚垂直传播。潜伏期的长短取决于病毒的致病型、宿主年龄和感染途径。直接接触和气管内接种病毒，发病潜伏期分别为13d和9d。自然感染发病多见于4～7周龄鸡，发病率可高达100%，但死亡率通常低于6%。

该病传播迅速，一年四季均可发生，一般呈散发或地方性流行。有些感染鸡群没有典型的临床症状，但可引起不同程度继发感染，或使其他病毒、细菌、寄生虫感染症状和病变加重，导致淘汰率和死亡率增加。

3 临床症状及病理变化

ARV急性感染的主要特征是被感染鸡跛行、关节肿胀、腱鞘炎、传染性滑膜炎、生长停滞。急性感染的鸡滑膜内发生充血或存在出血点，腱鞘和关节囊发生充血。慢性感染的鸡关节腔内存在较少的渗出物，腱鞘慢性纤维化，趾向后弯曲，跗关节软骨溃烂，伴发肉芽组织的生成。心肌纤维之间的异嗜细胞浸润，肝脏、肾脏、脾脏肿大，有些可见坏死灶。

4 诊断检测

通过感染鸡跛行、跗趾关节肿大等症状及肝脾肿大、滑膜细胞的萎缩及增生、心脏组织内异嗜细胞浸润等病理变化可作出初步诊断。但由于有些鸡感染ARV后不表现典型的临床症状和病理变化，而且该病与维生素E和硒缺乏症、痛风等病的临床症状相似，所以确诊需要进一步实验室检测。

实验室检测鸡病毒性关节炎主要有以下几种方法：

4.1 病原学检测方法

病毒分离虽然耗时较长，但检测结果准确。可用病鸡的组织悬液、全血、血浆或其他易感的组织培养物，接种6～7日龄 SPF鸡胚卵黄囊，接种后 3～5d鸡胚胎出现死亡 ，胚胎明显出血或紫红，肝呈绿色，脾脏肿大。若通过尿囊接种10日龄SPF鸡胚，接种后，鸡胚的死亡规律基本和卵黄囊接种结果基本一致。取接种致死的鸡胚绒毛尿囊膜或病变细胞做切片，电镜下可观察到胞浆内包涵体和病毒呈晶格状排列。

4.2 血清学检测方法

从可疑分离物接种或自然感染鸡血清中检测到抗体或ARV抗原，采用ELISA、琼脂扩散实验、间接免疫荧光实验等可从感染鸡血清中检测到特异性抗体。

2007年陈元坤［5］以差速离心纯化的鸡关节炎病毒(ARV)作为包被抗原,建立了检测 ARV抗体的间接 ELISA方法，确定了抗原最佳包被浓度为252 ug/mL，1%BSA封闭1.5h，血清最佳工作浓度为1∶160，37℃反应1.5h，酶标兔抗鸡的稀释度为1∶5000，37℃作用1h，底物37℃作用15min。所建立的方法与鸡新城疫、传染性支气管炎、支原体的阳性血清无交叉反应。

2013年谢志勤［6］等用克隆的杂交瘤细胞株制备 ARV的单克隆抗体，并用此抗体作为包被抗体，成功建立了双抗夹心ELISA检测方法，检测敏感性达到 5×10-5ug/uL的病毒。

2014年尹春红［7］应用纯化的σB和σC蛋白作为包被抗原建立了ELISA检测方法，能够准确地检测到抗体的产生及消长规律，可以用于ARV的临床诊断和免疫监测。

4.3 分子生物学检测方法

目前,国内外一些学者利用聚合酶链式反应（PCR）对ARV的检测取得了很大进展。试验证明，PCR试验检测法具有灵敏度高、特异性强的特点，可诊断血清、感染组织中的ARV。

2013 年马超英［8］根椐 GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)、禽白血病病毒(ALV)基因序列，设计2对引物，建立了两种病毒的双重RT-PCR。对同一样品中的ARV、ALV核酸模板进行双重RT-PCR扩增，结果可同时扩增ARV 485bp、ALV 673bp的特异性片段，而对其他5种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明，该双重RT-PCR技术能检出10pg的ALV和10pg的ARV模板。用31份临床病料对本研究双重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证，结果显示，两者的总符合率为100%。

2014年曹琛福［9］等建立实时荧光RT-PCR方法检测鸡病毒性关节炎病原，针对特异性的禽呼肠孤病毒S1基因设计了1对引物及探针，建立了鸡病毒性关节炎实时荧光RT-PCR检测方法。结果显示：该方法灵敏度高、特异性强、检测时间短，可应用于鸡病毒性关节炎的普查监测和检验检疫。

2017年钟丽［3］等建立的Real-time RT-PCR检测方法，在1×1011×1010copies/μL范围内具有良好的线性关系，灵敏度达到10 copies/μL，是常规PCR方法的100倍。

2018年郑丽［10］等建立了ARV纳米PCR检测方法。结果显示，该方法特异性好，仅从ARV核酸样品可检测到约332bp的特异性目的条带，而对新城疫病毒、传染性支气管炎病毒等其他11种病原的检测结果均为阴性。敏感性试验结果显示，该纳米PCR方法能检测到的最低核酸质量浓度为56pg/L，其灵敏度是普通PCR的10倍。ARV核酸被重复检测3次，结果均一致。应用建立的纳米PCR和病毒分离鉴定方法对临床送检的30份样品进行检测，两种方法的符合率为100%。

5 防治

目前国内外尚没有用于治疗该病的方法，要以“预防为主，防治结合”为原则，做好各种免疫抑制病的预防接种工作，降低机体对禽呼肠孤病毒的易感性。

加强饲养管理，定期更换垫料，对鸡舍内外及饲养工具定期进行消毒，消毒液可采用3%的火碱溶液进行舍内外消毒，或用0.5%有机碘液或百毒杀溶液1∶200稀释带鸡喷雾消毒，饲养工具用10%的百毒杀等消毒药物进行清洗消毒。

本病应以预防为主，疫苗免疫对预防鸡病毒性关节炎效果明显。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所成功研制鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡病毒性关节炎、鸡传染性法氏囊炎病四联油乳剂灭活疫苗，适用于各种不同的蛋鸡和肉鸡，接种10d后产生免疫力，免疫期可达5个月。

2009年王存伟［11］成功构建了介导禽呼肠孤病毒σC基因疫苗的重组减毒沙门氏菌株，制备出禽呼肠孤病毒σC基因疫苗，应用于雏鸡，以 1.0×l09 CFU剂量 1次免疫6日龄雏鸡，并于2周后进行二免，结果显示，免疫2周后 ，可诱导机体产生ARVσC蛋白的特异血清Ig G抗体，差异显著(P＜0.01)，二免后 3周进行攻毒试验，保护率可达 66.7%，重组减毒沙门氏菌株对雏鸡具有良好的免疫原性和安全性。

2012年徐延伟［12］等根据已公布的禽呼肠孤病毒 S1133毒株σC基因克隆至p PIC9K酵母表达载体当中，成功构建了重组酵母菌株p PIC9K-σC/GS115。 将毕赤酵母表达的重组σC蛋白用法国佐剂乳化后，免疫3周龄 SPF鸡，并进行攻毒实验，结果显示，该重组σC蛋白可以阻止 ARV在体内的复制，且能够对感染病毒进行清除。

2012年谢志勤［13］等构建了含禽呼肠孤病毒S1133毒株的σ3基因重组质粒 pc DNA3.1-σ3，免疫 7日龄SPF雏鸡，同时设灭活 S1133、表达σ3蛋白及生理盐水对照，二次加强免疫2周后，用S1133毒株进行攻毒，结果表明，pc DNA3.1-σ3处理 、灭活S1133处理 、表达σ3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为 7.4%、3.7%、11.1%、29.6% ，pc DNA-σ3处理与生理盐水处理的差异显著(P＜0.05)，但与灭活 S1133处理、表达σ3蛋白处理的差异不显著(P＞0.05)。

另外，在诊治时，尽管鸡的病毒性关节炎病临床症状明显，但容易与其他疾病混淆，在诊断时，应综合流行病学、临床症状、剖检变化及实验室诊断的结果作出确诊，及时进行处置，减少养殖户的经济损失。