环介导恒温扩增技术快速检测禽流感病毒

商晓桂，韩志玲，闫聪，杨波，范秀丽，郝鹏，张贵刚，陈九连，刘国英

（金宇保灵生物药品有限公司，呼和浩特 010030）

0 引言

进入21世纪，我国医疗水平得到快速的发展，特别是在一些传染速度较快的流感病毒中，我国医疗技术发展更是得到相关部门的高度重视。禽流感病毒是一种非常常见的病毒，并且对于身体健康的影响非常严重，许多人对于禽流感病毒的检测非常重视。通过环介导恒温扩增技术快速检测禽流感病毒做出相关的分析，提高我国禽流感病毒的控制和检测准确度。

1 禽流感病毒简介

禽流感病毒是一种非常常见的病毒，它是由A型流感病毒引起的一种禽类感染病毒，这种病毒不仅会在家禽内部进行传染，也可以感染人类。我国家畜家禽防疫条例将这种禽流感设立为动物疾病，对于禽流感的控制有非常重要的公共卫生意义，这种疾病也被列为肉类食品安全的风险因素，在世界范围内受到广泛关注。高致病性禽流感病毒的致病力非常强，并且如果感染禽流感，死亡率极高，人一旦感染禽流感，死亡率达到60%以上，家禽感染禽流感死亡率达到100%。

1997年，我国在香港首次发现禽流感病例，并且禽流感病毒可以直接感染人。2003年底禽流感病毒已在16个国家造成人类死亡，它不仅给家禽养殖业造成很大的经济损失，也严重影响人类的身体健康，禽流感病毒利用咽部以上的呼吸道以及消化道的感染途径，通过动物特别是病死的家禽对人类进行传染。低致病性禽流感病毒，虽然没有高致病性禽流感病毒死亡率高，但是它的分布范围比高致病性的禽流感病毒范围广泛，并且这种禽流感病毒对人的危害十分持久，目前低致病性的禽流感病毒难以控制，这种禽流感病毒大多在每年11月至次年3、4月进行传播，并且传播速度十分迅速，如果大型养鸡场受到禽流感病毒的感染，则很难彻底清除掉。

禽流感病毒也在很大程度上影响我国食品的安全，因为禽流感病毒可以通过食品对人类进行传染，而食品安全中一个非常重要的影响因素是在家禽进行生产和饲养中，很有可能通过家禽体内的病毒传播给人类，进而引起人类患禽流感，甚至导致人类死亡。自2012年，越南已有14个省爆发禽流感病，有6.5万只鸡、鸭出现死亡，同时有4人感染禽流感病毒，其中3人病情十分严重。2012年，我国感染禽流感病毒人数已超过50万人，其中有1 300多人死亡，禽流感对人体健康的危害理应受到重视。

2 环介导恒温扩增技术对禽流感病毒的检测

2.1 检测优势

对于中国地区的发展，禽流感有非常广泛的流行性以及重要的公共卫生意义，因此，需要一个较为有效的方法对禽流感病毒进行检测，而环介导恒温扩增技术在进行检测时方便、快捷。传统的检测方法进行禽流感病毒的检测需要针对不同的病毒进行分别测试，如血凝性试验、血凝抑制试验等。荧光RT-PCR在进行禽流感的检测中，相对于传统的检测方法更加快捷、迅速，但是需要较为专业的仪器作为辅助，这使检测成本极大地提高，并且许多实验室由于没有较为专业的仪器，难以进行专业的检测，属于一种难以推广的方法[1]。

环介导恒温扩增技术仍然是一种十分理想的检测方法，这项技术在进行检测时，主要依据新型的恒温核酸扩增技术，通过靶基因的6个区域设计出4种不同的特征引物，利用这些引物中的DNA聚合酶，在等温的条件下进行工作，使琼脂糖凝胶出现阶梯状的条带，另外，因为特殊的荧光材料可以与反应体系进行结合，使阳性的结果产生出人眼可以分辨出的荧光绿色，这种方法也能满足工作的需要，使工作更加方便、快捷。

此外，通过实时的浑浊度检测，可以判定出扩张的结果，如果浑浊度大于等于0.1，结果表现阳性。这种方法相对于其他方法灵敏度更高，并且具有特异性强、快速和便捷的特点。在进行工作时不需要开盖就可以一步完成，在很大程度上避免了气溶胶对其产生污染。采用较为先进的绿色荧光方法也可以使工作人员在辨别时，不需要通过其他特殊的仪器装备，辨别出是否存在禽流感病毒，在现场检测时也可以实现快速检测，在禽流感病毒的发展中，环介导恒温扩增技术发挥不可忽视的作用，为我国医学科技奠定坚实的基础[2]。

2.2 工作展望

禽流感对我国人民以及家畜的发展有很多不利的影响，因此，在未来的发展中，需要对环介导恒温扩增技术进行不断的革新。在具体试验时，可以发现环介导恒温扩增技术在进行检测时假阳性率十分高，因此需要进一步对其作用机理进行研究，降低假阳性的出现，使环介导恒温扩增技术在进行检测时更加准确，不出现其他的误差影响禽流感病毒的检测，进而使整个检测结果更加准确，而且不需要其他机器进行辅助，检测的过程更加快捷[3]。

环介导恒温扩增技术在进行检测时，它的结果有2种，一种是扩增，另一种是不扩增。这种简单的判定方法会同时检测多种核酸，这对样本的复杂性进行了限制，因此为检测出更多重的禽流感病毒，需要对环介导恒温扩增技术进行更多实用性的研究。对于禽流感病毒，在进行传染的过程中，可能出现很多变异情况，这对于我国的环介导恒温扩增技术又提出了更高的要求，因此，我国环介导恒温扩增技术需要得到更好的发展，才能满足我国禽流感病毒的检测需要，使检测结果更加准确[4]。

3 结束语

禽流感病毒对人体的危害十分严重，并且在很大程度上抑制了我国家禽业的发展，因此在未来的发展中，需要根据禽流感病毒的不断变化，研制出更好的检测方法，也应该对环介导恒温扩增技术进行推广，使其能更好地进行禽流感病毒的检测。另外，需要提升禽流感病毒的检测技术，使检测技术更加快捷，进而更好地满足我国医学科技发展的需要。