LC—FLD法测定奶粉中维生素B1含量的方法研究

杨再清　杨婷　赵应梅　莫我跃

【摘 要】建立了LC-FLD方法测定奶粉中维生素B1的分析方法。采用Inert sustain C18（4.6×250mm， 5μm）色谱柱，流动相以浓度为0.05mol/L乙酸钠溶液与甲醇比为65：35， 流速为1.0mL/min，进样量为20uL。本方法标准物质峰和样品峰峰型对称无拖尾现象，校准曲线线性0.9999931，精密度试验RSD为0.65%，回收率都在90%以上，本方法灵敏度、准确度、精密度良好，适用于奶粉中维生素B1的测定。

【关键词】奶粉；维生素B1；LC-FLD

中图分类号： TS252.7 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2018）36-0196-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.36.083

Determination of vitamin B1 in milk powder by LC-FLD

Yang Zaiqing Yang Ting Zhao Yingmei Mo Yiyue

（Guiyang Food and Drug Inspection and Testing Center）

【Abstract】A method LC-FLD for the determination of vitamin B1 in milk powder was developed. In the method， the chromatographic column is column of Inert sustain C18（4.6×250mm， 5μm）.the mobile phase is 0.05mol/L sodium acetate water solution：methanol（65：35），the flow is 1.0mL/min ，and the injection volume is 20μL. In the method， the Chromatographic peak of standard material and the chromatographic peak of the sample is all symmetric and no trailing. The linear relation of calibration curve is 0.9999931，the experiment of precision RSD is 0.65%， Overall recoveries were up 90%， the sensitivity、degree of accuracy、precision was good. .which can be used to detect vitamin B1 in milk powder.

【Key words】Milk powder；Vitamin B1；LC-FLD

维生素B1又称硫胺素或抗神经炎维生素。由嘧啶环和噻唑环通过亚甲基结合而成的一种B族维生素。为白色结晶或结晶性粉末，有微弱的特臭，味苦，有引湿性，露置在空气中，易吸收水分。婴幼儿生长发育迅速，代谢旺盛，需要得到优质的营养素，B族维生素对婴幼儿的生长发育有着至关重要的作用，其主要来源是母乳及奶粉等[1]。目前，对于奶粉中维生素B1含量的测定方法主要有动态液滴荧光法[2]、紫外可见分光光度法[3]、高效液相色谱法[4-7]等。维生素B1是人体生长和发育所必须的营养物质，也被广泛应用于食品和保健食品中，因此，准确测定食品中维生素B1的含量具有十分重要的意义。

1 实验部分

1.1 仪器、标准品与试剂

液相色谱仪（Shimadzu LC-20A，岛津），配有荧光检测器（FLD）和自动进样器；离心机（TDL-5-A，上海安亭）；压力蒸汽灭菌器（HRLM-80，海尔）；培养箱（DHP-9082，上海一恒）。

维生素B1标准品，纯度为97%，购于中国食品药品检定研究院。

甲醇（色谱级）、正丁醇、铁氰化钾、盐酸、三水乙酸钠、冰乙酸、氢氧化钠。

1.2 样品前处理

称取5g奶粉置于三角瓶中，加入盐酸溶液（0.1 mol/L）60mL，摇匀封口后放入高压灭菌锅内，121℃保持30min。冷却后用乙酸钠溶液（2.0mol/L）调pH至4.0左右，加入淀粉酶溶液和木瓜蛋白酶溶液，摇匀后置于培养箱中过夜。将酶解液定容至容量瓶中，过滤得滤液加入碱性铁氰化钾进行衍生，然后用正丁醇萃取，离心后吸取正丁醇溶液进液相色谱分析。

1.3 液相色谱条件

色谱柱Inert sustain C18柱（4.6×250mm， 5μm）；流动相：0.05mol/L乙酸钠溶液-甲醇（65：35）； 流速：1.0mL/min；进样量20uL；柱温：25℃；检测器：FLD；检测波长：激发波长375nm，发射波长435nm。

1.4 定性定量分析方法

定性分析：采用标准品的出峰保留时间对样品峰进行定性。

定量分析：采用外标法以峰面积进行定量，配制5个浓度梯度的标准品溶液进样分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制校准曲线。

2 结果与分析

2.1 校准曲线

将配制好的5个浓度的标准品溶液按上述条件进行分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制校准曲线，线性方程见表1。维生素B1标准溶液色谱图见图1，校准曲线见图2。

2.2 精密度试验

配制维生素B1浓度0.5ug/mL的标准溶液，按上述色谱条件连续进样6次，结果及相对标准偏差见表2。

2.3 准确度试验

在市场所购买的某种含有维生素B1的奶粉3份，准确称量后加入标准溶液，与样品以相同的前处理方法和色谱条件测定，计算检测结果和回收率见表2，某奶粉中维生素B1色谱图见图3、回收率色谱图见图4。

3 结论

本文建立了LC-FLD法准确测定奶粉中维生素B1含量的方法。本方法标准物质出峰和样品峰峰型对称无拖尾现象，校准曲线线性0.9999931，精密度试验RSD为0.65%，回收率都在90%以上，本方法灵敏、准确度、精密度良好，可以满足日常维生素B1含量的测定。

【参考文献】

[1]郑彦峰，胡迎芬，刘烈刚，等.城乡婴幼儿维生素B1、维生素B2和烟酸机体营养状况分析[J].卫生研究，2013，42（3）：369-374.

[2]王益林，韦月早，莫利书，等.荧光分光光度法测定花生和黄豆中的维生素B1[J].广西大学学报2009，34（1）：60-72.

[3]吴秀生，张爽，张丽媛，等.紫外可见分光光度法测定维生素B1 含量[J].黑龙江医药，2011，091，（02）：170-171.

[4]曹红，王浩.HPLC法快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B1[J].中国乳品工业，2010，38（11）：46-47.

[5]刘莉治，林玉娜，周洪伟，等.婴幼儿奶粉中維生素B1和B2的高效液相荧光测定法[J].环境与健康杂志，2009，26（5）：451-452.

[6]华娟，林光美，傅武胜，等.柱前衍生-高效液相色谱法测定食物和保健食品中维生素B1[J].中国食品学报，2014，14（4）：251-257.

[7]吴轶，孙凯峰，袁波，等.婴幼儿奶粉中维生素B1的检测方法研究[J].现代食品科技，2010，26（4）：417-422.