子宫上皮细胞稳定性细胞游离亚铁原卟啉对宫颈癌的诊断意义

陈艳辉+周训华+赵莹

[摘要] 目的 探討子宫上皮细胞稳定性细胞游离亚铁原卟啉（FH）对宫颈癌的诊断价值。 方法 选取2014年2月～2016年12月湖南省脑科医院接受宫颈癌筛查的女性患者303例，经病理学诊断宫颈癌患者56例，宫颈上皮内瘤变Ⅱ～Ⅲ（CINⅡ～Ⅲ）患者112例，宫颈刮片检查健康正常健康者135例，均行子宫上皮细胞稳定性FH检测和液基薄层细胞检测（TCT）。将病理学诊断结果作为金标准，分析上皮细胞稳定性FH和TCT对宫颈癌与CINⅡ～Ⅲ检测的灵敏度、特异度、准确度、约登指数、阳性和阴性预测值。 结果 经上皮细胞稳定性FH检测，宫颈癌患者与CINⅡ～Ⅲ患者的总阳性率均明显高于正常健康者（P < 0.05），且宫颈癌患者明显高于CINⅡ～Ⅲ患者（P < 0.05）；上皮细胞稳定性FH检测宫颈癌患者54例，CINⅡ～Ⅲ患者97例，TCT检测宫颈癌患者49例，CINⅡ～Ⅲ患者93例；上皮细胞稳定性FH检测的灵敏度、特异度、准确度、约登指数、阳性预测值及阴性预测值均高于TCT检测。 结论 上皮细胞稳定性FH在宫颈癌高表达，检测结果有较高的准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。

[关键词] 细胞游离亚铁原卟啉；宫颈癌；宫颈上皮内瘤变Ⅱ～Ⅲ；液基薄层细胞检测

[中图分类号] R711.74 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）01（b）-0079-04

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of the uterine epithelial cells stability of the cells free ferrous protoporphyrin （FH） for cervical cancer. Methods Three hundred and three female patients with cervical cancer screening in Brain Hospital of Hunan Province were selected from February 2014 to December 2016， and there were 56 cases of cervical cancer and 112 cases of cervical intraepithelial neoplasia Ⅱ-Ⅲ （CIN Ⅱ-Ⅲ） by pathological diagnosis and 135 cases of normal healthy women by cervical scraping smear test， who were detected by uterine epithelial cells stability FH test and thinprep cytologic test （TCT）. The pathological diagnosis was used as the gold standard， and the sensitivities， specificity， accuraciy， Youden indexes， positive and negative predictive values of the uterine epithelial cells stability FH and TCT for cervical cancer and CINⅡ-Ⅲ were analyzed. Results The total FH positive rate of cervical cancer patients and CIN Ⅱ-Ⅲ patients were significantly higher than that of normal healthy subjects （P < 0.05）， of which the patients with cervical cancer were significantly higher than of the CINⅡ-Ⅲ patients （P < 0.05）. There were 54 cases patients of cervical cancer and 97 patients of CIN Ⅱ-Ⅲ who were detected by uterine epithelial cells stability FH， and there were 49 patients of cervical cancer and 93 patients of CINⅡ-Ⅲ who were detected by TCT. The sensitivities， specificity， accuracies， Youden indexes， positive predictive value and negative predictive value of the uterine epithelial cells stability FH test were higher than those of the TCT. Conclusion The expressions of the uterine epithelial cells stability FH test are increased in cervical cancer， which has higher accuracies， sensitivity， specificity， positive and negative predictive values for the detection of cervical cancer.

[Key words] Cells free ferrous protoporphyrin； Cervical carcinoma； Cervical intraepithelial neoplasiaⅡ-Ⅲ； Thinprep cytologic testendprint

宫颈癌是妇科最常见的一种恶性肿瘤，宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宫颈癌前病变，近年来，宫颈癌与CIN的发病均有逐渐年轻化的趋势，且宫颈癌在女性癌症患者中死亡率较高，严重威胁妇女的生命安全[1-2]。宫颈液基薄层细胞检测（Thinprep cytologic test，TCT）是目前主要的宫颈细胞学筛查方法，有较高的灵敏度与特异度，对宫颈癌及CIN有较高的检出率，但TCT的检测效果并没有预期理想[3-4]。细胞游离亚铁原卟啉（free ferrous protoporphyrin，FH）含量同细胞癌变程度有密切关系，其析出量越高，癌变越严重，对宫颈癌的早期筛查与诊断有重要作用[5]。为提高宫颈癌的筛查诊断，以助于疾病的及时治疗，本研究对宫颈癌及CINⅡ～Ⅲ患者均行子宫上皮细胞稳定性FH檢测和TCT检测，根据其相应指标对比，分析子宫上皮细胞稳定性FH检测临床诊断价值，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年2月～2016年12月接受宫颈癌筛查的女性，纳入标准：经病理学诊断为宫颈癌、CINⅡ～Ⅲ患者及宫颈刮片检查正常者，有性生活史；排除标准：宫颈息肉、阴道不规则出血、子宫切除、黏膜下子宫肌瘤患者，近期接受放化疗患者，有急性生殖道感染者。其中，经病理学诊断：宫颈癌患者56例，年龄36～71岁，平均（51.21±4.62）岁；CINⅡ～Ⅲ患者112例，年龄28～57岁，平均（40.61±3.54）岁；宫颈刮片检查正常者135例，年龄26～61岁，平均（42.74±4.19）岁。本研究患者均签署知情同意书，且通过医院医学伦理委员会审查批准。

1.2 检测方法

1.2.1 病理学检测方法 阴道镜下选择宫颈鳞-柱交接部的3、6、9、12点处取活检标本，4%甲醛固定，常规脱水、浸蜡及石蜡包埋，切5 μm薄片，进行HE染色，在光镜下观察组织病理学形态，并做出病理诊断。

1.2.2 子宫上皮细胞稳定性FH检测 ①检测试剂与材料：FH染色试剂盒购于青岛东孚美伦生物科技有限公司，细胞保存液与细胞刷均购于Hologic公司；②检测方法：将宫颈渗液采样器从阴道缓缓插入至子宫颈部位，并按右上、右下、左下、左上、宫颈管口部位循序擦拭，获取细胞渗液，并将其与细胞保存液混匀送检，严格按照FH染色试剂盒的步骤进行操作（顺时针折断乳白色滴管管口，将试剂滴入测试池，并用该管吸入样本液1 mL将其滴入测试池内，之后将橘红色滴管旋转折断，将试剂滴入测试池，2 min内对比显色情况）。

1.2.3 TCT检测 将TCT宫颈细胞刷置入宫颈管1 cm左右，采集宫颈脱落细胞，将细胞转移到装有细胞保存液瓶中送检，通过全自动细胞制备对样本细胞进行混匀、过滤及转移，贴附于玻片上，染色固定，最后于显微镜下进行观察诊断。

1.3 判定标准

1.3.1 子宫上皮细胞稳定性 FH检测结果判定标准， 阴性：细胞不着色或微蓝色；阳性：蓝色（子宫上皮细胞不稳定）；强阳性：深蓝色或显深蓝色后即刻转为深黄色或棕红色（子宫上皮细胞极不稳定），总阳性率=（阳性+强阳性）/总人数×100%。

1.3.2 TCT检测结果诊断标准 细胞核大、胞浆较少、核质较粗糙、胞浆呈多形性或细胞边界模糊等属于CINⅡ～Ⅲ；细胞排列松散或紊乱、核质深染、胞浆角化明显、细胞形状奇怪、核膜不规则增厚等属于宫颈癌。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，多样本比较采用秩和检验，等级分布比较采用秩和检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 子宫上皮细胞稳定性FH检测不同研究对象的结果比较

三组研究对象等级分布、总阳性率比较差异均有统计学意义（P < 0.05）；宫颈癌患者与CINⅡ～Ⅲ患者的总阳性率均明显高于正常健康者，且宫颈癌患者明显高于CINⅡ～Ⅲ患者，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 两种检测方法检测结果与病理学诊断结果比较

子宫上皮细胞稳定性FH检测宫颈癌、CINⅡ～Ⅲ的灵敏度、特异度、准确度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、隐形预测值均高于TCT检测。见表2、3。

3 讨论

宫颈癌是目前我国最常见的妇科恶性肿瘤，高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染是其主要危险因素。高危型HPV亚型产生E6和E7两种癌蛋白，其可与细胞周期调节蛋白相结合，导致细胞周期调节失控，发生癌变[6-8]。宫颈癌变的发生发展是一个渐进性过程，CIN是宫颈癌前病变，通过临床检测可及时发现，确诊后进行积极治疗，可避免其进一步发展成宫颈癌，降低宫颈癌癌变率[9-11]。

本研究检测结果发现，上皮细胞稳定性FH在宫颈癌与CINⅡ～Ⅲ患者中阳性率均显著升高，且宫颈癌患者明显高于CINⅡ～Ⅲ患者；此外上皮细胞稳定性FH检测的灵敏度、特异度、准确度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值均高于TCT检测，说明上皮细胞稳定性FH检测具有较高的临床诊断价值，其诊断准确率具有相对可靠性。TCT检测是临床检测CIN和宫颈癌的主要方法之一，其操作过程中清除了黏液、血液、各种炎症细胞等干扰，在一定程度上提高了细胞制片质量，使其临床检测结果有较高的灵敏度和特异度，有利于CIN和宫颈癌的早期发现和治疗，但其受细胞学医生操作技术水平和对细胞异常形态主观判断等的影响，容易漏诊和误诊，对CIN和宫颈癌早期诊断有一定的限制，效果不甚理想[12-15]。上皮细胞稳定性FH检测是近年来临床上使用的一种新型的宫颈癌诊断方法，主要是通过FH与特定物质的氧化还原反应使子宫上皮细胞染色，根据着色的深浅分析患者病变程度[16]。正常情况下，亚铁血红素通常以结合蛋白的形式参与机体各种调节活动，但当出现致癌因子时，抑癌基因p53会发生突变或缺失，导致对糖代谢葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的抑制作用丧失，从而使细胞内稳定性失调、能量代谢发生异常、蛋白质构象发生变化，最终使亲脂性物质进入含有亚铁原卟啉蛋白的疏水核内，导致亚铁原卟啉脱落成为FH。游离的FH极不稳定，可从邻近的蛋白质、脂肪和DNA上夺取电子，使自己处于稳定状态，如此连锁反应，引起细胞膜脂质、细胞骨架、脂蛋白、DNA等氧化损伤，细胞自身调控发生紊乱，最终导致组织细胞发生癌变。因此，稳定性FH可作为宫颈癌生物标志物，通过检测其含量多少可对患者进行癌变诊断[17-19]。有研究发现[20]，上皮细胞稳定性FH检测在宫颈癌及CIN患者的临床诊断中有较高的准确率，其临床诊断相对可靠，此与本研究结果相符。endprint

综上，上皮细胞稳定性FH对宫颈癌检测有较高的准确度、灵敏度、特异度，阳性预测值、阴性预测值，对宫颈癌的临床诊断敏感性较高。但由于本研究样本量较小，且样本细胞收集及上皮细胞稳定性FH检测操作过程受人为因素的影响，如细胞取样偏差、操作水平参差不齐等均可影响检测结果的准确性，因此还需进一步扩大样本量进行研究，并改善上皮细胞稳定性FH检测方法，减少主观因素的影响，以进一步提高检测结果的准确度。

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（收稿日期：2017-09-28 本文编辑：任 念）endprint