山西管涔山林区传统食用菌红水皮的DNA分子鉴定

刘 虹 ，董淑英 ，许 晶 ，李素玲

（1.山西省农业科学院食用菌研究所，山西太原 030031；2.忻州市科技局，山西忻州 034000）

红水皮是山西管涔山林区出产的一种肉红色、个体比较小的特产蘑菇。管涔山当地人通常把菇体肥大、香味浓郁的森林里的野生食用蘑菇叫银盘，而将菌肉较薄的种类叫水皮。红水皮是当地最为常见的水皮蘑菇，每年夏、秋两季在华北云杉Picea wilsonii Mast和华北落叶松（红杄）Larix principis-rupprechtii Mayr林内草地上生长，散生或者群生，有时形成蘑菇圈。当地人通常将其用开水煮熟调凉菜或者做汤，味道虽然不浓，但是也别有滋味。查阅此前的山西野生食用菌类相关专业文献[1-10]，山西管涔山红水皮蘑菇并没有发现对应的拉丁学名。

山西省农业科学院食用菌研究所育种室课题组首次采用nr DNA-ITS分子方法，对2017年采自山西管涔山林区的红水皮蘑菇进行了鉴定分析，并结合子实体形态特征，确认其科学名称为深凹漏斗伞 Infundibulicybe gibba（Pers.）Kumm.。

1 材料和方法

1.1 标本采集

担子果样本于2017年7—9月采自山西省中北部宁武县管涔山一带的华北落叶松Larix principis-rupprechtii Mayr和华北云杉Picea wilsonii Mast林中草地上，共3份，分别编号为FANM99，LH170750，LH170925。新鲜的担子果标本经45℃烘干后保存于山西省农业科学院食用菌研究所和首都师范大学标本馆（BJTC）。

1.2 形态学方法

将担子果的宏观特征放在手持放大镜和体视显微镜下进行观察和描述，主要包括担子果的形状、大小、颜色、菌褶及菌柄特征等。

将担子果的显微结构特征在北京首都师范大学生命科学学院微生物实验室光学显微镜下进行观察。首先采用手术刀进行徒手切片，以蒸馏水、3%KOH作为浮载剂制作水封片。用棉兰（cotton blue）和梅氏试剂（Melzer）来检验担孢子壁有无喜兰和淀粉质反应。

1.3 分子方法

本研究在北京首都师范大学生命科学学院微生物实验室进行，研究样本的DNA提取、PCR以及测序方法等完全采用了FAN等[11-12]研究块菌属物种所使用的方法。本研究比对的DNA序列下载自NCBI数据库，提取和测序的nr DNA-ITS序列采用BLAST软件在NCBI上进行比对，比对结果中相似性高于97%的序列用于本研究分析。

2 结果与分析

2.1 nr DNA-ITS比对结果

3份样本之间nr DNA-ITS片段相似性高于99%，证实为同一物种。其中，样本FANM99在NCBI数据库比对，结果显示，本样本与NCBI数据库中8条Infundibulicybe gibba名下序列相似值高于97%（表1），结果证实这些序列与山西省管涔山林区出产的红水皮蘑菇为同一个物种。

表1 红水皮样本FANM99的ITS片段的BLAST结果

2.2 形态学结果

对采自山西管涔山林区样本进行观察，红水皮蘑菇形态学特征如图1所示。

担子果小到中型，菌盖初期扁半球形，光滑，无毛，后渐平展、稍下凹到最后强力下凹呈漏斗状，边缘整齐，无条纹，中部有时有一小凸起，浅黄褐色、黄褐色、肉褐色或有点浅红褐色，直径1.5～6 cm；菌肉白色，较薄；菌褶白色，不等长，较密，延生；菌柄较细，圆柱状或向下渐渐变细，2～8 cm长，0.5～0.9 cm粗，白色或浅肉褐色，表面近平滑，初期中实，后近中空；担孢子椭圆形或杏仁状，有一小尖，（6～9）μm×（4～5）μm，无色，表面光滑，非淀粉质。

3 结论

从产于山西管涔山林区的红水皮蘑菇提取的ITS-DNA片段在NCBI上用BLAST比对，结果显示，与样本相似度高于97%（同时满足QC大于88%）的8条来自北美洲美国、墨西哥，欧洲的意大利，亚洲的朝鲜、日本以及中国的序列名称均为深凹漏斗伞Infundibulicybe gibba；从宏观形态的担子果和微观特征的担孢子分析，红水皮蘑菇也完全符合深凹漏斗伞。因此，综合DNA分子和形态学特征分析，确认山西管涔山的红水皮蘑菇的科学名称为深凹漏斗伞 Infundibulicybe gibba（Pers.）Kumm.，主要异名为 Clitocybe gibba（Pers.）Kummer，在我国文献中也叫深凹杯伞[2]或杯伞[3]，是一种可以食用的野生蘑菇。四川九寨沟地区新近发现的红漏斗伞Infundibulicybe rufa[13]与本种相似，区别在于红漏斗伞菌盖和菌柄颜色为红褐色，而深凹漏斗伞颜色为肉褐色或黄褐色。深凹漏斗伞在我国北部各地和南部高海拔地区均有分布[2-3，7-10，14-17]，是一个北温带物种[18-20]。深凹漏斗伞在管涔山林区有一个类似的种类，即当地著名的野生食用菌品种红银盘，这2个物种形状和颜色很像，区别在于红银盘个体明显较大，柄粗壮，肉厚，就像大一号的红水皮。此外，红水皮产季较长，每年从初夏到深秋在山西管涔山都极为常见，而红银盘通常只在秋季发生。

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