葛花黄酮煎煮浸提工艺与解酒活性研究

孙一 赵红岩

摘要 采用煎煮法浸提葛花中的总黄酮，通过正交试验优选最佳提取工艺并初步分析其解酒活性。采用L9（34）正交试验，以总黄酮得率为考察指标，优选最佳提取工艺；从耐受性、醉酒时间、醉酒率、死亡率等方面初步分析其解酒特性。结果表明，葛花总黄酮煎煮浸提的最佳工艺为煎煮时间6 h，加水量12倍，浸泡时间1 h。此工艺条件简单方便，稳定性好，可用于工业化生产，并适用于葛花解酒茶的开发过程。

关键词 葛花；总黄酮；煎煮浸提工艺；解酒活性

中图分类号 TS275.4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）04-0235-02

Abstract The total flavonoids were extracted from Pueraria lobata using decoction method，the optimum extraction process was optimized by orthogonal test and the anti-alcohol activity of Pueraria lobata flavonoids was analyzed.Using L9（34）orthogonal test，the optimal extraction process was optimized guiding by the extraction rate of the total flavonoid. The anti-alcohol characteristics of Pueraria lobata flavonoids were analyzed from tolerance，intoxication time，intoxication rate and death rate.The optimum extraction process was that the decoction time was 6 h，added water was 12 times and soaking time was 1 h. This process is simple and convenient and has good stability，it can be used for industrial production，and is applicable to the development of Pueraria lobata anti-alcohol tea.

Key words Pueraria lobata；total flavonoid；decoction extraction process；anti-alcohol activity

葛花为药食同源植物野葛[Pueraria lobata（Willd.）Ohwi]、甘葛藤（P.thomsonii Benth.）的花。葛花和葛根同为葛属植物的入药部位。葛根是功能性保健品和药品的主要原材料，可藥食两用，享有“亚洲人参”的美誉，开发利用程度较高。与葛根相比，葛花的开发利用程度较低。葛花于每年8—9月花苞初开时采收，晒干即可。葛花味甘性凉，具有解酒、醒脾、止血的功效，常用于治疗烦热口渴、头痛头晕、脘腹胀满、呕逆吐酸等症。葛花为解酒护肝的良药，民间素有“千杯不醉葛藤花”之说，被称为“酒之克星”。现代生物科学和药理学研究表明，葛花的主要有效成分为黄酮类化合物、皂苷类化合物、挥发油类化合物、甾醇类、生物碱、氨基酸等，其中黄酮类化合物具有较强的抗氧化消除氧自由基的作用，皂苷类化合物具有强大的保肝功效。这2种成分协同作用可有效抑制肠胃对酒精的吸收，并促进血液中酒精的分解和排泄，达到解酒、护肝、养胃之功效，且安全无副作用。本文以煎煮法浸提葛花黄酮，以水作为溶剂，安全性高，成本更低，能更好地为后续葛花黄酮解酒茶的开发提供可靠的理论依据[1-3]。

1 材料与方法

1.1 试验仪器

UV-2550紫外分光光度计：日本岛津；DZF真空干燥箱：上海丙林电子科技有限公司；CJJ-931磁力搅拌器：江苏环宇科学仪器厂；RE-5210旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂。

1.2 试验材料

试验材料为葛花，市售；芦丁：中国药品生物研究所提供（0080-9705）。

1.3 试验方法

1.3.1 葛花样品的制备。取葛花药材适量，粉碎，过80目筛，置于真空干燥箱70 ℃、95 KPa的条件下烘干至恒重，备用。

1.3.2 芦丁标准曲线的绘制。精确称取于105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品5 mg，以95%乙醇溶解并定容于50 mL容量瓶中。分别精确吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL标准溶液至10 mL容量瓶中，并用超纯水定容。空白对照为1 mL 95%乙醇加入10 mL容量瓶中的溶液。检测波长为510 nm，对芦丁质量浓度与吸光度作线性回归，得到芦丁标准曲线回归方程为C=67.561A-0.412，R2=0.999 1，芦丁在10～50 μg/mL范围内线性关系良好。

1.3.3 总黄酮提取工艺。精确称量葛花粉末1.00 g，按照一定的液料比以水进行浸泡，并煎煮提取一定的时间。煎煮后抽滤，将滤液于4 000 r/min条件下离心处理10 min，将全部离心上清液定容至50 mL容量瓶中。精密量取1 mL于10 mL容量瓶中，按照1.3.2所示方法在510 nm处测吸光度，计算总黄酮的含量。

葛花总黄酮得率的计算公式如下：

W=■×B×V

式中：W为总黄酮得率（mg/g）；M为试验原料所称量的质量（g）；A为测量的吸光度；B为稀释的倍数；V为过滤液体的总体积（mL）。

1.3.4 正交试验设计。为了优化总黄酮的煎煮浸提工艺条件，试验中选择煎煮时间A（h）、加水量、浸泡时间C（h） 3个因素，每个因素3个水平，以总黄酮得率（mg/g）为考察指标，进行L9（34）正交试验（表1）。

1.3.5 小鼠醒酒特性的测定。试验中以翻正反射是否消失作为衡量小鼠醉酒与否的标准，即将正常小鼠置于仰卧或侧卧位时，小鼠会很快翻正过来；而醉酒小鼠则翻正反射消失，可以由人任意将其翻转。将30只昆明小鼠随机分为3组，每组10只，试验前禁食8 h，称量并记录。阴性对照组小鼠用去离子水灌胃，阳性对照组小鼠用1 g/mL海王金樽溶液灌胃，试验组以葛花提取物灌胃，灌胃溶液体积均为0.1 mL。给药0.5 h后对所有小鼠按照0.1 mL/10 g体质量的标准用56°二锅头灌胃。观察并记录每组小鼠的耐受时间（从灌酒至醉酒后翻正反射开始消失的时间）、醉酒时间（从醉酒后翻正反射开始消失至其恢复的时间）、醉酒只数和死亡只数[4-6]。

2 结果与分析

2.1 正交试验结果

根据单因素试验得到的结果，选取煎煮时间、加水量、浸泡时间3个因素按表1所示水平进行正交试验，试验结果及极差分析见表2，方差分析见表3。

由表2可知，对总黄酮得率的影响因素主次顺序依次为煎煮时间>加水量>浸泡时间，最佳组合为A3B2C1，即最佳煎煮工艺条件为煎煮时间6 h、加水量12倍、浸泡时间1 h。由表3可知，煎煮时间、加水量、浸泡时间均对黄酮得率有显著性影响，影响得率的因素的主次顺序为煎煮时间>加水量>浸泡时间，这与表2极差分析的结果一致。

2.2 小鼠醒酒特性的测定结果

由表4可知，樣品试验组小鼠平均耐受时间延长，醉酒率下降，表明样品在饮酒前服用具有保护功效，同时，平均醉酒时间也有明显缩短，显示出了一定的解酒功效。

3 结论

本研究以总黄酮得率为考察指标，利用正交试验确定葛花黄酮最佳煎煮浸提工艺为煎煮时间6 h、加水量12倍、浸泡时间1 h。该方法以水作为溶剂，安全性高，成本更低，能更好地为后续葛花黄酮解酒茶的开发提供可靠的理论依据。

4 参考文献

[1] 孙洋.葛花药理作用与临床应用研究[J].亚太传统医药，2014，10（8）：51-53.

[2] 李玲，全沁果，沈艳欣，等.野葛藤地上部分葛根素的提取及稳定性研究[J].食品工业科技，2016，37（9）：235-239.

[3] 国海东，蒋艳，上官新晨，等.葛根素的稳定性研究[J].食品科技，2014，39（11）：229-232.

[4] 吴玲玲，韩墨，黄真，等.葛根素提取及分离纯化的研究进展[J].中华中医药学刊，2011，29（3）：569-571.

[5] 高学清，汪何雅，钱和，等.葛根和葛花对急性酒精中毒小鼠的解酒作用[J].食品与生物技术学报，2012，31（6）：621-627.

[6] 雷红伟，杨伟峰.葛花对酒精性肝损伤保护作用的研究[J].时珍国医国药，2010，21（2）：489-490.