一起实验兔感染支气管鲍特杆菌病的病例分析

郑立锋 邓寿斌 詹先强 吴润生 林 健 姚 尧 翁顺太＊

（1.福建省人兽共患病研究重点实验室，福建省疾病预防控制中心 福州 350001；2.福州大北农生物技术有限公司 福州 350014）

福建省某单位为完成一项课题，于2017年3月从上海某养殖单位购进38只雄性日本大耳白兔（体重1.0～1.5 kg，准备作预试验用），经过140 d饲养管理，在未进行任何实验处置的前提下，兔子相继出现发病、死亡，每天1～3只，共死亡25只。通过现场调查和采样检查，掌握了饲养管理过程中存在的问题，确认为一起管理原因引发的传染性疾病。

1 症状及细菌学检查

1.1 临床症状 食欲减退，消瘦，反应迟钝，萎靡不振，双眼无神，不活动，打喷嚏，鼻腔有分泌物，伴出血或黄色液体[1]。紧随鼻炎卡他症状后即出现呼吸困难，笼内乱窜、迅速死亡，病程仅2～3 d。死亡前四肢乱蹬并发出痛苦的尖叫声，肛门有粪便排出。

1.2 解剖症状 鼻腔、气管黏膜充血，鼻腔内有浆液性分泌物。内脏病变主要集中在肺脏，表面光滑、水肿，解剖时有液体流出，充血发红，有的甚至发黑呈暗红色[2]。肝脏病变较少见，只有2只患兔肝脏表面可见黄豆大小的脓疮。

1.3 细菌学检查[3]

1.3.1 仪器与试剂 革兰氏染色液、血琼脂平皿、DHL琼脂平皿及微量生化鉴定管，购自广东环凯微生物科技有限公司；VITEK 2 GN卡（革兰氏阴性菌鉴定卡）购自广州江河生物科技有限公司；梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定仪。

1.3.2 分离培养 分别采集4只死亡兔的病变肺脏各一小块，接种于血琼脂平皿和DHL琼脂平皿置于培养箱（36±1℃）中培养48 h，观察平皿上菌落生长情况。对分离菌株进行革兰氏染色镜检，并进行生化实验，同时按照VITEK 2 Compact自动鉴定仪GN鉴定卡的说明书进行操作，上机鉴定。

1.3.3 初步鉴定 在血琼脂平皿上均形成1 mm左右呈灰白色的菌落；DHL琼脂平皿上均形成半透明2 mm左右的菌落。将分离自血琼脂平皿的可疑菌株接种于DHL琼脂平皿中，置于培养箱（36±1℃）培养48 h，生长良好。经革兰氏染色镜检，均为革兰氏阴性小杆菌。微量管生化反应结果为：动力、尿素为阳性，葡萄糖、蔗糖、靛基质、硫化氢均为阴性。并将菌株使用VITEK 2 GN卡经梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统鉴定为支气管鲍特杆菌，概率为99%。

1.4 诊断结果 综合临床症状、病理剖检及细菌学检查结果，可诊断为支气管鲍特杆菌病。

2 临床干预

2.1 发病初期 出现卡他症状时，用卡那霉素 0.2～0.4 g/只·次，肌肉注射，每日2次，效果不佳，仍陆续出现死亡现象。后使用卡那霉素（剂量、方法同上）和口服酞酰磺胺噻唑 （按每千克体重用0.2～0.3 g）联合干预，2次/d，连用 5～7 d[4]，病情逐渐得以控制。

2.2 干预期间 每天用0.2%过氧乙酸溶液对各区域设施进行喷雾消毒。

3 分析与讨论

支气管鲍特杆菌为一种革兰氏阴性小杆菌，有鞭毛、能运动，不形成芽胞，主要寄居于大鼠、豚鼠和家兔的上呼吸道。该病多发生在气候多变的春秋两季[5]，主要通过空气传播经呼吸道而感染，带菌兔和患兔鼻腔分泌物中的病菌随咳嗽、喷嚏飞沫污染饲料、饮水、笼舍和空气，传染给健康兔[6]。当机体受到各种因素如气候骤变、感冒、寄生虫病等的影响而降低机体的抵抗力，或其他诱因如灰尘和强烈性气味的影响，使上呼吸道黏膜的保护屏障受到破坏，易导致发病。

实验兔于7月底、8月初发病，与发病季节吻合。发病时已经成年，与大多文献所报道的“幼兔发病率高，成年兔较少发病”有较大出入[7]。引发疾病的主要原因如下。

1）实验室体积不大（3 m×4 m×2.6 m），放置 2 台共12个笼位的兔平板架，平均每笼饲养3只，饲养密度过大。且回风管过滤网上沾满蜘蛛网、兔毛和黑色粉尘，室内通风换气不良，氨浓度明显超标，是引发该病的主要原因。

2）工作人员没有经过操作技能的专业培训，对设施温湿度的控制、通风换气的控制、实验动物的生活习性了解不多，专业理论知识、操作技能和管理经验欠缺。当早期个别家兔出现鼻炎症状时得不到足够重视，任病情发展和蔓延，导致最终暴发流行。

3）实验室虽取得使用许可证，但卫生现状很差，缺乏规范的卫生清理和环境消毒。通过了解，原来是没有经过正规培训的在校学生负责日常管理。发病时正值毕业季，参与管理的两批学生没有做好工作交接、没有经过内部专业培训就匆促上岗。

4）实验兔从不具备生产许可证的单位购进，也是一种违规做法。国家标准中该病虽然不列为等级家兔应排除的病原菌，但它是以隐性感染状态长期存在家兔体内，一旦外界环境改变、手术实验等因素的刺激，很可能显性蔓延，对兔群造成毁灭性的打击[8]。

综上述，该病例完全是由于管理不善引发的一起人为事故。如果能按既定管理制度和操作规程来规范管理，该起事故当可防、可控，应引以为鉴。

4 预防措施

1）加强饲养管理。从业人员（含科研人员、管理技术人员、饲养人员）应经过必要的专业理论学习和实践操作技能的培训，持证上岗。设施应保持恒温恒湿，日温差变化小于4℃，每天注意观察实验兔精神状态，发现异常立即报告主管技术人员。患兔应隔离、观察、治疗，查明病因，同时加强卫生消毒，防止疫情蔓延扩散。

2）加强设施内部的通风换气，平衡进风、排风时间，避免污浊空气滞留，保证通风良好。该单位普通级实验用兔设施的气流组织形式是上送侧下排，提示这种气流组织形式很可能不适合普通级兔的生物学特性和生长、生活环境。减少室内各种有害气体对家兔生长发育的影响，应定期清理动物的排泄物、保持适当的换气次数，这样才能有效降低氨浓度，有利于家兔正常的生长发育[9]。

3）定期进行卫生消毒。制定实验室各部位、笼架具、室内空气等定期卫生消毒制度并严格执行。及时清除粪便、尿垢等污物，保持实验室、笼架具整洁，增强动物抵抗力。及时更换、清洗、消毒进风、回风管过滤网。

做好卫生消毒工作，强化无菌观念是开展标准化实验动物工作的根本保证。工作人员须更衣、戴帽、戴口罩、戴手套、更鞋方能进入实验室，每天工作完毕，要对实验室的地面、工作台面等部位进行全面消毒，还要定期对设施内的空气进行喷雾消毒。最好采用独立的饮水方式。

4）严格按国家《实验动物许可证管理办法（试行）》[10]的规定开展实验动物工作。其中第六条第一款明确规定 “使用的实验动物必须来自持有生产许可证的单位或个人，质量合格”，这将直接影响科研工作的成败，是先决条件。否则随意从无生产许可证的单位或个人去购买，实验动物的质量将无法保证。同时要索取实验动物的生产许可证、质量合格证等相关证明材料。

5）对于中等以上实验动物，刚引进时应当做好隔离检疫工作，且检疫期不少于14 d，经细菌检查为阴性方可继续使用。这样可有效排除某些潜在隐性疾病对动物的影响。将所有患病动物进行隔离、观察，禁止与健康动物混居一笼或混居一室[11]，以免造成交叉感染、疫情蔓延。及时找明原因、对症治疗。

6）该病例中经药物治疗而好转的兔，虽幸存下来，但已失去应有的利用价值。用它们来继续进行科研实验，很可能会产生药物的拮抗作用，导致实验失败。

[1]王伟,朱瑞良,李新苍,等.兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性检测[J].中国兽医学报,2008(8):897-900.

[2]余树民,邓俊良.獭兔金黄色葡萄球菌和波氏杆菌混合感染的诊治[J].四川畜牧兽医,2002,29(B05):9-10.

[3]国家质量监督检验检疫总局.GB/T14926.6-2001实验动物 支气管鲍特杆菌检测方法[S].北京:中国标准出版社,2002.

[4]黄引贤,李乃津.兔波氏杆菌病的防治试验初报[J].北京实验动物科学与管理,1994(1):21.

[5]范志宇,恽时锋,王芳,等.兔支气管败血波氏杆菌不同感染途径研究[J].现代农业科技,2008(18):235-237.

[6]方喜业.医学实验动物学[M].北京:人民卫生出版社,1995:48-49.

[7]蒋金书.兔病学[M].北京:北京农业大学出版社,1991:46-48.

[8]郑立锋,高昔英,姚尧,等.剖腹净化建立清洁级獭兔核心种子群研究[J].医学动物防制,2017,33(5):518-520.

[9]翁顺太,高昔英,徐海滨,等.双致病菌混合感染引起家兔发病的调查分析[J].福建畜牧兽医,2017,39(3):41-43.

[10]科学技术部,卫生部,教育部,农业部,国家质量监督检验检疫局,国家中医药管理局,中国人民解放军总后勤部卫生部.实验动物许可证管理办法 （试行）国科发财字［2001］545 号[EB/OL].(2001-12-05)[2017-09-13].http://www.lascn.net/Item/12630.aspx.

[11]汪洋,赵德明.一起兔支气管败血波氏杆菌病的诊治[J].中国畜牧兽医,2008,35(8):93-94.