SPF鸡的检测及在外源病毒检测时的注意事项

战玉清

（山东省青岛易邦生物工程有限公司，山东 青岛 266114）

1 SPF鸡的定义及标准

SPF：Specific Pathoge Free即无特定病原。

SPF鸡是指人工控制无标准指定微生物感染史，其本身鸡所产的蛋供动物实验及用做生物制品原材料的鸡。SPF鸡（蛋）的标准因国家、地区、行业及企业有所不同，我国目前执行的“GB/T17999-2008-SPF鸡微生物学检测总则”是目前最基本的SPF鸡标准，这项标准相对稳定，但随着科技的进步，对新病原的不断发现及对已知病原的不断认识，检测手段不断提高而修订。

2 检测方法的确定及试剂的标准化

检测方法的确立，应具有良好的特异性和敏感性，操作简便，易于判定，适宜的检验成本。由于SPF鸡群的检测样品量大，检测频率高，试剂用量大，目前基本采用血清学方法，具体检测项目及其方法见表1。集试验；ELISA-酶联免疫吸附试验；CO-临床观察；IFA-间接免疫荧光试验；IA-病原体分离；PCR-聚合酶链式反应；RT-PCR-反转录-聚合酶链式反应；EST--胚敏感试验；SN-血清中和试验；IFA-间接免疫荧光试验；TA-试管凝集试验；HI试验检测病毒抗体效价＜1∶16为阴性。

表1 SPF鸡检测项目及其方法

3 生物制品生产使用SPF蛋的必要性

杜绝因垂直传播蛋内带有的病原混入疫苗中，随疫苗接种传播疫病，造成发病，特别已造成免疫抑制。可介卵垂直传播的病原如网状内皮增生症病毒（REV）、传染性贫血病毒（CAV）、呼肠股病毒（REV）、禽白血病病毒（ALV）、传染性脑脊髓炎病毒（AEV）、腺病毒Ⅰ群、腺病毒Ⅲ群、支原体、沙门氏菌。

非SPF蛋多带有抗体，影响疫苗株的增殖，造成疫苗效价不高，保护率低。

4 检测外源病毒时的干扰因素及方法

禽外源病毒检验（用鸡检查法）：除本疫苗所产生的特异性抗体外，不应有其他病原的抗体存在，检验周期长（一般至少42d，有的需56d），要进行2次不同部位、不同剂量的免疫，所以首先排除外在干扰是非常重要的。

SPF鸡在饲养过程中，饲养环境、运输过程、转移饲养容器等都要严格把控，应避免这些环境因素造成机体抵抗力低而引起鸡本身有其他病原的抗体存在。

在外源病毒检验时，为了正确判定疫苗本身是否带有外源，最好的方式就是在疫苗检测上鸡之前把所有检验用鸡进行采血，离心后提取血清冻存留样，再免疫疫苗，按标准规定时间后进行检测，如果出现阳性，则把之前采过的血清进行检测，这样就能顺利排除由SPF鸡产生的抗体，对复检结果也会有一定的参考。所以，SPF鸡在使用前及过程中的监控也是必不可少。两种疫苗不同批次的试验结果见附表2。

表2 SPF鸡外源检测前采血试验