脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植用于隆乳的临床对照研究

叶飞轮 徐杨 邓萌 卢娅 余红 林威

[摘要]目的：对比脂肪干细胞联合自体脂肪移植与单纯脂肪移植对治疗小乳症的疗效差异。方法：纳入小乳症患者20例，共计40侧乳房，随机分为治疗组和对照组，治疗组进行脂肪干细胞联合自体脂肪移植隆乳，对照组接受单纯自体脂肪移植隆乳。患者分别于术后1周、1个月、3个月进行随访，进行乳房基本数据采集记录及MRI检查，对比两组患者乳房体积改善效果及乳房形态满意率情况。结果：治疗组患者无论是乳房体积改善效果还是乳房形态满意率均显著高于对照组（P<0.05）。结论：脂肪干细胞联合自體脂肪移植治疗小乳症的疗效明显优于单纯脂肪移植，是一种值得推广和进一步研究的小乳症治疗方法。

[关键词]小乳症；脂肪移植；脂肪干细胞；隆乳

[中图分类号]R622 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2018）03-0032-04

Clinical Comparative Study on Adipose-derived Stem Cell Assisted Autologous Granular Fat Transplantation for Augmentation Mammoplasty

YE Fei-lun，XU Yang，DENG Meng，LU Ya，YU Hong，LIN Wei

（Department of Medical Cosmetology，the Third Pelples Hospital of Chengdu，Chengdu 610031，Sichuan，China）

Abstract： Objective To compare the effects of adipose-derived stem cell assisted autologous granular fat transplantation and simple fat transplantation in the treatment of micromastia. Methods A total of 20 cases（40 breasts） with small milky disease， were randomly divided into the treatment group and the control group. The treatment group was treated with adipose-derived stem cell combined with autologous fat transplantation for augmentation mammoplasty， while the control group with autologous fat transplantation. Basic data of the breast was recorded and magnetic resonance imaging（MRI） was performed at 1 week， 1 and 3 months postoperatively. Then the breast volume variation and the breast shape satisfaction rate of the two groups were compared. Results Both the retention rate of the breast volume increment and the satisfaction rate of breast shape were significantly higher in the treatment group than those of in the control group （P<0.05）. Conclusion Adipose-derived stem cell combined with autologous fat transplantation has a significantly better effect on the treatment of micromastia than simple fat transplantation， and worth being popularized and further studied.

Key words： micromastia； fat transplantation； adipose-derived stem cell（ADSCs）； augmentation mammoplasty

小乳症是临床上常见的一种先天性乳房发育异常性疾病，在东方人中发病率较高。小乳症的女性常常在日常生活及异性交往中遭受挫折，严重影响患者的生活质量和身心健康[1]。目前针对小乳症的治疗方法主要包括人工假体置入、自体脂肪填充等。假体置入是目前较为安全、效果确切的一种治疗小乳症的方法，但因其需要使用人工材料，安全性风险较高，多数患者常常无法接受。自体脂肪移植技术的出现和发展同时解决了以上两种问题，但由于移植脂肪在植入区域的吸收率较高（30%～70%）[1-2]，常常需要多次手术才能获得较为满意的效果，患者承受的痛苦也相对较大。

有关研究发现[3]，将纯化后的脂肪干细胞重新注射到脂肪移植部位可以明显改善移植脂肪的长期存活率。因此，脂肪干细胞联合自体脂肪移植极有可能成为一种安全性及可操作性较高的新型小乳症矫正手段。为了验证脂肪干细胞的加入是否真能提高移植脂肪存活率，进行了本项研究，对比自体脂肪干细胞联合颗粒脂肪隆乳与单纯自体颗粒脂肪移植隆乳的疗效。

1 资料和方法

1.1 一般资料：纳入2014年4月-2017年6月来本院就诊的符合条件的小乳症患者20例（共计40侧乳房），均为女性，随机分为治疗组和对照组，每组10例（20侧乳房）。治疗组患者行脂肪干细胞辅助的脂肪移植隆乳，对照组行单纯脂肪移植隆乳。所有患者均为第一次接受治疗，均签署知情同意书。对照组：年龄23～41岁，平均（33.6±6.1）岁；体重46.5～63.0kg，平均（53.5±5.9）kg；术前乳房体积169.4～231.7cm3，平均（190.4±20.3）cm3。治疗组：年龄25～39岁，平均（34.2±4.9）岁；体重43.0～60.5kg，平均（48.6±6.4）kg；术前乳房体积169.4～231.7cm3，平均体积（176.7±28.3）cm3。两组患者年龄、体重及术前乳房平均体积比较，差异均无统计学意义（P<0.05）。

1.2 纳入标准：需同时满足以下5点方能入组：①18～50岁健康成年女性；②有足够时间，自愿接受长期随访观察者；③心理准备充分者；④先天性乳房体积过小或产后乳房萎缩者；⑤供区有足够脂肪分布者。

1.3 排除标准：符合以下任意一点者均不可入组：①精神疾患、严重系统性疾病（如高血压、心脏病、糖尿病等）者；②乳腺彩超发现疑似肿瘤性包块者；③个人有乳腺癌病史或家族史（直系亲属）者；④家属强烈反对者。

1.4 方法

1.4.1 術前数据采集：所有患者术前均需拍摄乳腺MRI，并按照正位、左右侧位、左右45°侧位在相同背景下进行乳房外形照相，同时测量记录胸围、胸骨切迹-乳头距离（SN-N）、锁骨-乳头距离（C-N）、乳头-下皱襞距离（N-IMF）等乳房数据。

1.4.2 脂肪干细胞的获取、分离与扩增：一期手术仅治疗组患者进行。局部肿胀麻醉下，于患者大腿部内侧抽取脂肪与肿胀液混合物80～130ml（包含脂肪约50～90ml），放置于无菌试剂瓶中使用低温保温箱运送至合作单位（成都美进生物科技有限公司）进行脂肪干细胞分离培养及扩增。经过约45d的周期，脂肪干细胞传代至P3代并且获得了足够的细胞数量，经流式细胞检测确认为脂肪干细胞后制备成富含脂肪干细胞的悬液备用。

1.4.3 自体颗粒脂肪移植隆乳：二期手术治疗组与对照组患者均进行。①消毒铺巾：全身麻醉后常规消毒脂肪供区及乳房受区，铺巾；②脂肪采集：根据受试者术前乳房测量结果预估脂肪移植量，优先选用大腿内外侧作为脂肪供区，对于大腿脂肪量不足者可选择腰腹部脂肪作为补充，采用自体脂肪移植一体机（北京燕山，KYZ-2）进行脂肪采集（3mm吸脂针，0.5atm）；③脂肪处理：将获得的脂肪转移入离心管中并于离心机中离心（1 000rpm，3min），去除下层液体及表面油滴、保留中层颗粒脂肪，按1ml脂肪组织添加2～7×105个脂肪干细胞的比例充分混匀（对照组不添加脂肪干细胞，只添加等体积生理盐水）；④脂肪填充：于乳房下皱襞作约1mm宽小切口，使用10ml注射器搭配2mm螺口脂肪移植针从切口处进针按照科尔曼脂肪移植法进行脂肪扇形、多层次、多隧道、多点小量注射（注射层次包括皮下、乳腺后间隙、胸大肌内、胸大肌后），注射过程中低速、低压，乳房形态及大小满意后结束注射；⑤测量术后即刻测量乳房数据并记录。

1.4.4 评价指标：所有患者均在术后1周、1个月、3个月进行随访，复诊时再次测量记录胸围、胸骨切迹-乳头距离（SN-N）、锁骨-乳头距离（C-N）、乳头-下皱襞距离（N-IMF）等乳房数据，拍摄照片。术后3个月时，患者填写满意度调查问卷并根据患者乳房形态进行形态学评分（形态学评分5～10分为满意，<5分为不满意）。同时行乳腺MRI检查（判断乳房有无病变、脂肪存活情况，并计算乳房体积）。

乳房体积改善效果评价：利用MRI数据进行术前、术后乳房体积计算并分别得出术后1周、1个月、3个月的乳房体积增加值D1、D2、D3，术后1个月乳房体积增量留存率V1%= D2/ D1，术后3个月乳房体积增量留存率V3%= D3/D1。留存率<30%为无效，30%≤留存率<60%为有效，留存率≥60%为显效。

1.4.5 统计学分析：采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P3代脂肪干细胞检测结果：所有治疗组患者的脂肪干细胞均获得了成功分离并传代至P3代，流式细胞检测结果如下，脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells， ASCs） P3细胞高表达（阳性率>95%）：CD29、CD44、CD105、CD73、HLA-ABC；不表达（阳性率<3%）：CD31、CD14、CD34、CD45、HLA-DR。结果表明，分离培养获得的细胞确为脂肪干细胞。

2.2 两组患者一般情况：本研究共纳入患者20例（40侧乳房），所有患者均按照要求完成了随访，对照组患者平均脂肪填充量为220ml（185～295ml），治疗组患者平均脂肪填充量为230ml（190～285ml），两组脂肪填充量比较，差异无统计学意义（t=0.565，P>0.05）。治疗组患者乳房形态术后获得了明显改善，乳房各象限均较术前更加饱满（见图1～2）。

2.3 两组患者疗效比较

2.3.1 MRI比较结果：通过术前、术后MRI结果比较可知，治疗组患者术后3个月移植脂肪存活状况良好、未出现明显钙化、液化、囊肿等（图3），而对照组移植脂肪出现了很大程度的吸收（图4）。

2.3.2 两组患者乳房三维数据比较结果：两组患者术后1个月及3个月乳房测量三维数据均较术前有一定提高，治疗组乳房三维数据增加值明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），具体见表1。

2.3.3 两组患者乳房体积改善效果比较结果：治疗组术后1周、1个月、3个月乳房体积平均增加量分别为（231.5±21.4）cm3、

（180.1±29.8）cm3、（158.8±24.7）cm3；对照组术后1周、1个月、3个月乳房体积平均增加量分别为（242.4±19.7）cm3、（113.6±33.4）cm3、（89.3±34.1）cm3。两组乳房体积增量留存率结果见表2～3。

2.3.4 两组患者乳房形态满意率比较：术后3个月治疗组满意形态学评分满意14侧，不满意6侧，满意率为70.0%；对照组形态学评分结果满意2侧，不满意18侧，满意率10%，两组满意率比较，差异有统计学意义（χ2=15.000，P=0.000）

2.4 两组患者不良反应情况：所有患者均未出现感染、剧烈疼痛、上肢活动受限等严重不良反应。治疗组5例、对照组4例患者术后出现局部瘀斑，均在术后1～2周内完全消退；治疗组1例、对照组2例患者在术后1个月时发现脂肪钙化，其余对照组及治疗组患者均未出现脂肪钙化、液化、囊肿等脂肪变性。

3 討论

自Coleman等[4]公布了关于颗粒脂肪移植临床应用的研究结果后，脂肪作为一种自体软组织填充材料受到了广泛关注。经过数十年的发展，目前脂肪移植技术被广泛用于面部凹陷、软组织缺损、面部轮廓调整等领域。但由于目前技术的限制，脂肪移植后存活率不稳定（30%～70%）[1-2]，尤其是在进行脂肪移植隆乳等较大剂量脂肪移植时，可能会出现大幅度吸收、不对称吸收、局部脂肪液化钙化等并发症[5-6]。

干细胞是一种具有自我更新和分化成多种细胞的特殊细胞。全能或多能干细胞大量存在于胚胎或胎儿组织中，但通过胚胎获取这些细胞面临着较大的伦理问题。脂肪干细胞是存在于脂肪组织中的一种多能干细胞，它具有分化为软骨细胞、肌细胞、血管内皮细胞、脂肪细胞等多种细胞的潜能[7]。其具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用，在再生医学领域展现了广阔的应用前景。有关研究发现[7-8]，脂肪干细胞可促进脂肪生成及组织血供的建立，将纯化后的脂肪干细胞重新注射到脂肪移植部位可以明显改善移植脂肪的长期存活率，其原因可能与脂肪干细胞可以表达和分泌多种造血细胞因子（如巨噬细胞集落刺激因子，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）及抗凋亡和促血管生成因子（如血管内皮生长因子，肝细胞生长因子HGF，TGF-β等）有关。

以往的临床研究大都采用添加富含基质血管成分（Stromal vascular fraction， SVF）的脂肪提取物来提升移植脂肪存活率[8-13]，尽管取得了一定的疗效，但由于血管基质成分复杂，很难说明干细胞对促进移植脂肪存活率的作用[14-15]。本研究将脂肪干细胞进行分离培养传代后再添加到自体脂肪中进行移植，非常直观可信地验证了脂肪干细胞对移植脂肪存活率的提升作用。后期仍然需要更多大样本的研究以及长期随访来进一步观察脂肪干细胞联合自体脂肪隆乳的远期有效性和安全性。

目前脂肪干细胞已经成为国内外的研究热点，针对多种疾病（如肝硬化、脊柱损伤、软组织缺损等）的基于脂肪干细胞的研究正在国内外广泛开展。未来随着脂肪干细胞研究的不断深入，其应用范围必将越来越广泛，其在组织再生和重建方面的应用潜力非常巨大。

[参考文献]

[1]Derder M，Whitaker IS，Boudana D，et al.The Use of Lipofilling to Treat Congenital Hypoplastic Breast Anomalies： Preliminary Experiences[J].Ann Plast Surg，2014，73（4）：371-377.

[2]Kurita M，Matsumoto D，Shigeura T，et al.Influences of centrifugation on cells and tissues in liposuction aspirates： optimized centrifugation for lipotransfer and cell isolation[J].Plast Reconstr Surg，2008，121（3）：1033-1041.

[3]Kuhbier JW，Weyand B，Radtke C，et al.Isolation， characterization， differentiation， and application of adipose-derivedstem cells[J].Adv Biochem Eng Biotechnol，2010，123：55-105.

[4]Coleman SR.Long-term survival of fat transplants： controlled demonstrations[J]. Aesthetic Plast Surg，1995，19（5）：421-425.

[5]Kaufman MR，Miller TA，Huang C，et al.Autologous fat transfer for facial recontouring：is there science behind the art[J]？Plast Reconstr Surg，2007，119（7）：2287-2296.

[6]Villani F，Caviggioli F，Giannasi S，et al.Current applications and safety of autologous fat grafts： a report of the ASPS Fat Graft Task Force[J].Plast Reconstr Surg，2010，125（2）：758-759.

[7]James IB，Coleman SR，Rubin JP.Fat， Stem Cells， and Platelet-Rich Plasma[J].Clin Plast Surg，2016，43（3）：473-488.

[8]Yoshimura K，Asano Y，Aoi N，et al.Progenitor-enriched adipose tissue transplantation as rescue for breast implant complications[J].Breast J，2010，16（2）：169-175.

[9]Gentile P，De Angelis B，Pasin M，et al.Adipose-derived stromal vascular fraction cells and platelet-rich plasma： basic and clinical evaluation for cell-based therapies in patients with scars on the face[J].J Craniofac Surg，2014，25（1）：267-272.

[10]Gentile P，Orlandi A，Scioli MG.A comparative translational study： the combined use of enhanced stromal vascular fraction and platelet-rich plasma improves fat grafting maintenance in breast reconstruction[J].Stem Cells Transl Med，2012，1（4）：341-351.

[11]Kim DY，Ji YH，Kim DW，et al.Effects of platelet-rich plasma， adipose-derived stem cells， and stromal vascular fraction on the survival of human transplanted adipose tissue[J].J Korean Med Sci，2014，29（3）：S193-200.

[12]Sasaki GH.The Safety and Efficacy of Cell-Assisted Fat Grafting to Traditional Fat Grafting in the Anterior Mid-Face： An Indirect Assessment by 3D Imaging[J]. Aesthetic Plast Surg，2015，39（6）：833-846.

[13]Willemsen JC，van der Lei B，Vermeulen KM，et al.The effects of platelet-rich plasma on recovery time and aesthetic outcome in facial rejuvenation： preliminary retrospective observations[J].Aesthetic Plast Surg，2014，38（5）：1057-1063.

[14]Serra-Mestre JM，Serra-Renom JM，Martinez L，et al.Platelet-rich plasma mixed-fat grafting： a reasonable prosurvival strategy for fat grafts[J] ？Aesthetic Plast Surg，2014，38（5）：1041-1049.

[15]Jung HK，Kim CH，Song SY.Prospective 1-Year Follow-Up Study of Breast Augmentation by Cell-Assisted Lipotransfer[J].Aesthet Surg J，2016，36（2）：179-190.

[收稿日期]2017-11-09 [修回日期]2017-12-04

編辑/朱婉蓉