老年2型糖尿病和冠心病患者高密度脂蛋白与高密度脂蛋白中血清淀粉样蛋白A含量改变的相关性

玛依拉·卡哈尔 哈丽达·木沙 李雅丽

(新疆医科大学第一附属医院，新疆 乌鲁木齐 830011)

无论是体内研究或是体外实验均明确高密度脂蛋白(HDL)能够对血管内皮细胞表达黏附分子形成抑制反应，因此临床学者也将HDL称之为“血管脂质清道夫”，具备抗动脉粥样硬化生理特性〔1,2〕。但目前临床医疗对HDL发生病理性因素造成HDL结构异常转变后，其是否尚存细胞表达黏附分子的抑制效果鲜有研究。血清淀粉样蛋白(SA)A是炎症反应蛋白特异性指标，研究表明SAA不仅参与冠状动脉粥样硬化病变过程，同时也能够对HDL形成介导干扰胆固醇的逆转〔3,4〕。为进一步明确病理状态下HDL与HDL中SAA相关影响，本文抽选2型糖尿病(T2DM)、冠心病(CHD)老年患者54例，行前瞻对照研究。

1 对象与方法

1.1研究对象 选取新疆医科大学第一附属医院2016年5月至2017年5月收治的T2DM老年患者54例，年龄61～83〔平均(71.25±2.64)〕岁。根据患者疾病分组观察，T2DM组18例，CHD组19例，T2DM+CHD组17例，另抽选15名>60岁健康人员作为健康参考组。

1.2纳入、排除标准 纳入标准：①T2DM组符合《中国2型糖尿病防治指南》诊断标准〔5〕；②CHD组确诊符合《冠心病的诊断与治疗》〔6〕诊断标准；③动脉造影检测>50%血管狭窄；④患者知情同意。排除标准：①合并急性冠状动脉综合征；②确诊1型糖尿病者；③肝肾功能异常者；④研究前2 w内使用他汀药物。

1.3基本资料调查 性别、年龄、疾病史、血糖、血脂等指标。

1.4HDL中SAA、 细胞黏粘附分子(ICAM)-1、血管细胞黏附分子(VCAM)-1 、人急性单核细胞白血病细胞株(THP)-1 细胞黏附检测 ①脂蛋白分离提取：静脉血离心(2 000 r/min)20 min，取血浆，再行超速离心法分离脂蛋白(提取-分离-透析-过滤)，二喹啉甲酸(BCA)法检测脂蛋白含量。②HDL中SAA检测：选用人SAA-ELISA试剂盒检测SAA含量。③人脑静脉内皮细胞(HUVEC)获取：正常分娩产妇脐带取材，胶原酶Ⅰ溶液(0.1%)下消化处理，收集HUVEC，行ECM传代培养。④HDL中ICAM-1、VCAM-1表达、THP-1 细胞黏附检测：HUVEC与各组HDL做共孵4 h，增用肿瘤坏死因子(TNF)-α进行持续4 h刺激，利用CD106-FITC 单克隆抗体与抗人CD54-PE标记，流式细胞术检测ICAM-1、VCAM-1表达；加入Calcein-AM荧光染色剂标记THP-1细胞，检测HDL抑制HUVEC下THP-1 细胞黏附量。

1.5统计学方法 采用SPSS19.0统计软件进行t及χ2检验，Logistic线性回归分析HDL中SAA与HDL生理作用的相关性。

2 结 果

2.1基本病例资料比较 各组年龄、体重指数(BMI)、性别、总胆固醇(TC)差异无统计学意义(P>0.05)；各组高血压、吸烟、三酰甘油(TG)、HDL、空腹血糖(FPG)、低密度脂蛋白(LDL)差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2各组HDL中SAA、 ICAM-1、VCAM-1 、THP-1 细胞黏附量对比 各组HDL中SAA、ICAM-1比较差异有统计学意义(P<0.05)；VCAM-1表达检测T2DM+CHD组最高，与其他组差异有统计学意义(P<0.05)，T2DM组与CHD组VCAM-1 表达略有上升，与健康参考组对比差异无统计学意义(P>0.05)；THP-1表达检测中T2DM+CHD组最高，T2DM组与CHD组次之，各组差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 各组基本病例资料比较

与T2DM组比较：1)P<0.05；与CHD组比较：2)P<0.05；与T2DM+CHD组比较：3)P<0.05，下表同

表2 各组HDL中SAA、 ICAM-1、VCAM-1 、THP-1 细胞黏附量比较

2.3HDL中SAA水平与 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 细胞黏附相关性 多因素线性回归方程，校正年龄、性别、糖尿病、冠心病、吸烟、血浆TC、TG 水平的影响，分析HDL中SAA水平与 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 细胞黏附相关性分析证实，HDL中SAA与 ICAM-1表达呈正相关；与THP-1细胞黏附呈负相关；与VCAM-1表达无明显相关性。见表3。

表3 HDL中SAA水平与 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 细胞黏附相关性

3 讨 论

研究表明，T2DM患者在动脉粥样硬化的发生风险及硬化程度方面均较正常人员更高〔7，8〕。Kawano等〔9〕研究通过调查明确，T2DM患者α-1HDL、α-2 HDL及pre-α-1 HDL指标可发生异常减少现象，同时患者α-3 HDL指标将异常增多，且这类指标均与机体炎症因子的活化形成明显关联性。研究认为，HDL因糖尿病病理性改变，造成该物质结构异常造成体内HDL正常的抗炎机制反应遭受抑制〔10〕，由此推论病理HDL变化将影响HDL的抗炎生理作用。本研究显示T2DM患者HDL内所含 ICAM-1、THP-1等异常改变，将造成HDL抗炎效应衰减，并与CHD患者做同比分析也有着明显差异，表明糖代谢病理改变将造成HDL抗炎效果异常弱化，甚至较CHD更为显著，提示T2DM患者后期并发动脉粥样硬化风险较高。

CHD可造成HDL所含的纤维蛋白原、补体C3及其他炎性蛋白异常增多，且这类HDL特有的生物结构物质将造成HDL所形成的炎性抵抗反应削弱〔11～13〕。李勉贤等〔14〕研究明确心肌梗死患者与正常人在HDL-C指标并无明显差异，不过深入观察HDL-P亚型，结果发现亚型太异常将造成HDL对动脉粥样硬化的抵抗效果弱化，产生HDL逆转反应，即反之诱导动脉粥样硬化的进展〔15〕。Ji等〔16〕研究明确，CHD患者HDL内血红蛋白指标可出现异常增多迹象，其中HDL与血红蛋白所形成的紧密连接将造成HDL促炎反应。当机体处于炎症反应机制激活状态，其HDL内所含盖的SAA水平也将明显提高，结构改变的同时抗炎能力下降〔17〕。范晓方等〔18〕通过对CHD及糖尿病患者HDL多种复杂蛋白物质调查明确，仅伴有SAA指标的HDL才能形成强烈的炎症性因子刺激效应，可随SAA指标的增长，其HDL抗炎作用将随之削弱，SAA与HDL抗炎呈负相关〔19〕。Röcken等〔20〕研究明确，SAA对HDL干扰机制主因为 SAA激活核因子(NF)-κB途径，造成炎性细胞因子的快速活化，形成高表达状态。本研究说明HDL可受病理性影响造成自身生物抗炎作用削弱。

本研究表明，无论是T2DM或是CHD，体内HDL受病理因素转变可造成HDL原有生物反应机制受限，这一变化不仅仅受患者HDL浓度的影响，同时亦受HDL结构改变更为显著；其中当属T2DM患者HDL病理改变较明显，其SAA含量提高比CHD患者更高，造成HDL抗炎效果较CHD者更差。

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