马莲种皮有效成分的提取及黄酮含量的测定

马小虎，丁润梅

（宁夏医科大学基础医学院，宁夏银川 750004）

马莲又名马蔺，是鸢尾科鸢尾属多年生草本植物，生长于荒地、路旁、天然草地，尤以过度放牧的盐碱化草场上较多，分布于中国内蒙古、宁夏、青海、西藏等20多个省区[1]。由于其耐旱、耐盐碱等特点，在绿化、水土保持、医药等方面具有一定的开发潜力[2]。马莲的根、花和种子均可入药[3，4]。其中马莲种子呈不规则卵形的多面体，种子入药称马蔺子，有抑癌作用。马蔺子甲素是从马蔺种皮分离得到的化合物，能凉血、止血、清热利湿，主治骨结核、淋巴结核，还可作口服避孕药[5-7]。

马莲根系发达，绿期长，花色高贵幽雅，绿地建植景观效果良好，近年来逐渐被用作缺水城市绿化、护坡固沙、盐碱地改良、园林绿化和西部植被恢复，马莲全株都具有药用价值。本文采用索氏提取法对马莲种皮总黄酮进行提取并测定，旨在为马莲子的药用价值和保健功能的研究及资源开发上提供理论依据及检测手段。

1 材料与方法

多余的醇液，转100 mL容量瓶中，以同浓度的乙醇定容，摇匀，提取3次，溶液待用。

1.2.4 样品的测定 精密吸取1.00 mL样品提取液至50 mL容量瓶中，按照1.2.2中NaNO2-Al（NO）3-NaOH比色法，用同浓度乙醇定容至刻度，摇匀，用紫外分光光度计在510 nm处，以0 mL管为对照，测定吸光度，平行3次，取其平均值。计算公式如下：

1.1 试验仪器与试剂

电热恒温鼓风干燥箱（101-4-S，上海跃进医疗器械厂）；紫外分光光度计（UV-1600，上海美谱达仪器有限公司）；KDM型调温电热套（山东省鄄城汇鑫科技有限公司）；万分之一电子分析天平（AEU-210，日本岛津）；索氏提取仪（瑞尔）。

马莲种皮；芦丁标准品（92.5%）（中国药品生物制品检定所）；无水乙醇、NaNO2、Al（NO）3、NaOH均为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 试剂的配制

（1）芦丁标准品溶液的配制：精密称取芦丁标准品10.00 mg，用60%乙醇溶解，完全转入50 mL容量瓶中，用同浓度的乙醇定容至刻度，摇匀，配制成浓度为0.2 mg/mL的芦丁标准储备液。

（2）5%NaNO2溶液的配制：精密称取2.50 g NaNO2置于500 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，配制成5%NaNO2溶液。

（3）10%Al（NO）3溶液的配制：精密称取5.00 g Al（NO）3置于500 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，配制成10%Al（NO）3溶液。

（4）4%NaOH溶液的配制：精密称取2.00 gNaOH置于50 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，配制成4%NaOH溶液。

1.2.2 芦丁标准曲线的绘制 精密吸取上述芦丁标准储备液 0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别置于25 mL容量瓶中，依次5%NaNO21.25 mL，混匀放置5 min，加入10%Al（NO）3125 mL，摇匀放置6 min，加入4%NaOH 7.5 mL，加同浓度乙醇定容至刻度，摇匀，静置10 min后，用紫外分光光度计在510 nm波长处，以未加芦丁储备液的显色试剂乙醇溶液作为空白，在510 nm处测定其吸光度值。

1.2.3 样品的提取 取马莲种皮洗净烘干，研磨粉碎，过40目筛，各称取5.0 g置于索氏提取装置中，以不同浓度的乙醇为溶剂，回流。所得提取液减压蒸馏，除去

式中：C-由标准曲线计算出的稀释后提取液中总黄酮浓度；50-稀释倍数；0.1-样品提取液体积，L；5-样品粉末质量，g。

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线

以芦丁质量浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线（见图1），所得的回归方程为y=11.745x-0.018 3，R2=0.999 8。

图1 芦丁标准曲线Fig.1 Rutin standard curve

2.2 黄酮含量

采用 L9（34）正交试验设计，考查料液比、提取时间、浓度3个因素对马莲种皮提取物的黄酮提取效果。正交试验因素与水平（见表1、表2）。

表1 正交试验因素与水平Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment

由表2可知，正交试验不同条件下提取黄酮含量有一定的差别。最佳提取条件组合为A1+B3+C3，即提取马莲种皮中的最佳工艺条件为料液比1∶15，提取时间5 h，乙醇浓度70%。

表2 马莲种皮提取物正交试验结果Tab.2 Orthogonal experimental results of Marlene seed coat

3 结论

黄酮类物质具有很多有益的药理作用和生理功能，对于提高免疫力、降脂、降压、抗衰老、治疗心脑血管疾病都有一定的作用。本试验采用索氏提取法以乙醇为提取剂提取马莲种皮中的总黄酮，并以芦丁为标准品，通过分光光度法在510 nm处测定提取液中黄酮的含量并利用正交试验优化马莲种皮中的有效成分提取。结果表明最优工艺条件为：提取剂70%乙醇，提取时间5 h，料液比1:15，此时马莲种皮中黄酮的含量最高。

［1］宋立人，洪恂，丁绪亮，等.现代中药学大辞典渊上册［M］.北京：人民卫生出版社，2001.

［2］张英.马蔺繁殖特性研究［J］.青海大学学报（自然科学版），2010，28（1）：44-46.

［3］李蓉，刘明华，肖顺汉，谢伟蓉，曹阳，任美萍.马蔺子素对COCl/DDP的逆转作用研究［J］.四川生理科学杂志，2009，31（2）：62-64.

［4］朱伟宏，孙维凯，于永春，王凡，王胜，王良旭.放射增敏药马蔺子素对H22肝癌小鼠肺转移的影响［J］.江苏医药，2008，34（2）：176-178.

［5］姜显光，侯冬岩，翁霞，王翠艳.马蔺叶中黄酮的超声提取工艺优化及抗氧化性能的测定［J］.现代农业科技，2014（2）：301-303.

［6］铁芳芳，王洪伦.马蔺化学成分及药理作用研究进展［J］.天然产物研究与开发，2017，29（12）：2152-2156.

［7］王寒蕾，毛艳，梁洁，王勇，李觅，刘文其.马蔺子素对大鼠放射性肺损伤的防护作用［J］.中国实验方剂学杂志，2016，（5）：151-159.