食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定

田霞

目的：食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定。方法：现选取2016年5月- 2016年6月需要进行菌落总数检测食品样本共20例作为调查对象，根据GB/4789.2- 2010食品微生物学进行检测，观察检测结果。结果：在本次实验中，在食品微生物学总菌落数的检测中其不确定度的测量结果为：U为0.0219X2.086=0.046。结论：在微生物检测中，其总菌落数检测结果离散性比较大，因此测定的结果将取对数以后，采取合并样本的标准差，求总菌落数，在不确定度测定检测结果中比较适合。

随着我国经济的发展和提高，广大的人们群众越来越重视生活，尤其是食品卫生这一块，而且食品是否卫生、安全，和食品有关的问题直接的关乎到人们群众身体的健康问题。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。根据查阅食品相关的资料，发现近年来食品存在质量问题的新闻比较频繁，对此进行深入的了解，发现有很多的问题都是可以避免的，因此国家的有关部门，对食品安全生产采取了大力的监管，要彻底的杜绝此类问题，要从根本上找原因，经过讨论得出，导致此类问题的发生，存在两点的不足，其一为在食品质量的问题中没有给予高度的重视，其二为在对食品进行检验时在技术上还有不足之处的存在。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣，为此在本文中对食品中微生物的菌落总数检测实验状况进行详细的介绍，详情如下。

资料和方法

资料。现选取2016年5月- 2016年6月需要进行菌落总数检测食品样本共20例作为调查对象，其食品样本为奶粉。

注意事项。在选取奶粉样品时要均匀的选取；（2）保证每一份样品的菌落的数量较为完全；（3）在对微生物数目进行计算时，可以保证其准确度；（4）在操作时，每一位操作人员要严格遵照有关规定进行操作，保证没有误差出现；（5）对样本进行检测时，需要相同的测试人员进行测试。

检验方法。在食品微生物学对菌落总数进行检验与测定中要严格遵照GB4789.2- 2010。

测试的流程。

（1）取样本

将采用无菌操作进行称量25g的样本，取含量为225ml的灭菌生理盐水三角瓶，将样本放入瓶内，随即进行振摇，当振摇充分后，将其制作成为均匀的稀释液，为1∶10。

（2）将样品进行稀释

在稀释的过程中，将采用1ml的灭菌吸管吸取1：10的稀释液1ml，沿着管壁注入含量为9ml的灭菌生理盐水试管内，随即进行振摇，当振摇充分后，将其制作成1：100均匀的稀释液；取另外一根1ml的灭菌吸管，按照同样的操作顺序，以十倍的递增顺序进行稀释液的制作，在制作稀释液中，每一次稀释，将换一根灭菌吸管。

（3）稀释倍数的选择

依照样品卫生的情况在1∶1000以及1∶100的稀释程度中选取，在做十倍递增的稀释同时，采取灭菌的平皿将经灭菌吸管吸取的稀释液进行注入，其稀释液的含量为1ml，每个稀释将做二个平皿，取45℃的平板计数琼脂培养基注入到含有稀释液平皿当中，其平板计数琼脂培养基含量为15ml，随即对其进行转动，将其混匀，于此同时进行空白对照的制作，琼脂凝固之后，将其放在孵箱内进行培养，其孵箱温度为36℃±1℃，培养时间为48h±2h。

（4）对菌落进行技术计数

将每个平皿中菌落数进行计数，其计数方式为采用菌落计数器进行记录，菌落数则在30～300CFU之间稀释度中进行选择，乘以稀释倍数为报告菌落的总数。

评定奶粉菌落总数测定中的不确定度

在本次实验中，由实验人员取20个奶粉的小样，在时间间隔较短的时间内，依照GB/4789.2- 2010的方法進行重复的测试，将20个样品的总菌落数测试的结果进行得出，在本次实验的过程，在取样时依照GB/4789.2-2010的规定中严格的执行，可确保样品时稳定、均匀的。以下为不确定度的因素来源分析，如下。

（1）在称量中，使用天平进行检定合格，基本没有影响；

（2）样品的均匀性，对样本稀释后，为稀释液，大致均匀，基本没有影响；

（3）在样品培养时的温度，经过校对以后，其波幅是处于正常的范围，没有影响；

（4）其样品培养的时间，均在正常的范围，没有影响；

（5）人员的不同，在这之间有一定的差异存在；

（6）同一个人员，在进行多次重复的操作，在每一次操作的过程中，可能有小误差的存在；

（7）移液器，经过检验是合格，但在每一次取样时，在液器外面的液滴量，都有一定的小差异存在；

（8）细微营养没有均衡，其体现为倾倒计数琼脂0.2mL～2mL之间的差异；

（9）在对样品进行培养时，装有样品平皿厚薄有所不均匀，因此有可能导致培养温度不均匀；

参与本次调查的20件样品，在检测前和检测后存在5min时间差异，依照20min繁殖一代速度，这之间存在一定的差异，而在本次检测过程中有可能导致误差出现的因素，将体现于总菌落数计数之上。

实验标准计算不确定度

依照贝塞尔公式进行计算，可将检验结果对数值标准偏差合并样本的标准差计算出来，其公式为：S p={∑[（lg xi- lg x）2]/20（2-1）}1/2=[0.013823/20]1/2=0.026、uc=S p=0.026=0.019，其扩展的不确定度为U=ku c，置信水平选取为P=95%、V=20，得：t95（20）=2.086，因此扩展的不确定度：U为0.0219X2.086=0.046。

由此可见，检测结果当采用平行样对数值平均值进行表示，取值的区间应在0.045左右，检测结果采用平均值进行表示时，其相对对数值取值的分布应在反对的数取值的区间值内。而检验结果的发散性比较高时，应采取对合并样本标准差对检验结果不确定度中的最佳的选择，这种选择对每个样本都适用。伴随检验结果的增加，加入合并样本的数量越来越多，将对合并样本标准差进行重新计算，确定不确定度取值的范围。

食品质量问题和人们生活健康有着直接的关系，在本次讨论详细的说明了在食品微生物学总菌落数的检测中的不确定度，并将相关的数字模型进行建立，希望在我国食品安全的保障中，尽到微薄之力。