家禽血液样品采集及保存分析

潘 园 陈祥国

家禽血液样品是进行免疫抗体及疫病的检测，为疾病的预防、控制和净化提供技术支持。样品的质量，进而影响到免疫效果和疫情监测结果的准确性。所以血清的制备，操作要领、方法应用与选择（家禽种类及日龄、需要血量多少）、方法评价就显得比较重要，通过实际工作中遇到的情况，进行了较为详细的描述和总结，关键操作环节提出了注意事项。本文通过家禽血清样品的制备选择、操作方法选择、样品处理的研究为实验室检测获取更准确的样品提供了具体的技术支持。

1 家禽种类

家禽血浆中几乎不含有促凝血酶原激酶（因子Ⅸ、即抗血友病因子B）、接触因子（因子Ⅻ）、因子Ⅴ和因子Ⅶ，因而不能形成促凝血酶原激酶和凝血酶，也就不易发生内源性凝血。家禽的凝血主要靠组织释放的促凝血酶原激酶，促进凝血酶的形成，而发生外源性凝血①。根据实验室正常检测流程需要和家禽自然凝集产生血清量家禽采集血液样品需要在1～2ML，而家禽机体血液量为家禽体重的10%（公鸡血量为体重9%，母鸡为7%，鸭10.2%）②，所以在不影响采集对象正常生长生产的情况下，应选择体重在1千克以上的家禽个体为宜。

2 血液样品采集时影响因素

血液样品采集时影响因素主要包括采集时间，血液样品采集时环境条件，血液样品采集时家禽饲养状况。1.血液样品的采集时间，由于家禽饲养过程中采食饮水情况的差异，采集时间选择在可控条件下，宜选取家禽采食饮水结束后进行，特别是在环境温度高的季节，可以通过在饮水中加电解多维，提高采集对象饮水和减少采集血液样品时对家禽的应激。2.采集时环境条件，因为家禽血液采集多为户外采集，受环境温度影响交大，比如温度、湿度、光线等因素，且规避影响难度较大，但在条件容许情况下应选择环境温度在20℃以上为宜，最适宜温度为25℃～30℃，选择光线充足的工作场地进行操作，可以通过采样点工作人员配合采样人员，抽取要采集血液样本在畜禽生产区域之外采集血液样品，这样一方面可以避免外来人员对养殖场生产的威胁，另一方面也可以方便采集人员采集。同时采集样品的工作人员因注意安全防护和废物处理。

3 采集方法的选择

家禽血液样品的采集方法选择，主要取决于采集血液样品的目的和所需样品血清数量和家禽的实际状况，具体情况具体对待。一般包括以下几种方法：1.颈静脉采血法；2.跖骨内侧静脉采血法，跖骨内侧静脉采血法适合于雏鸡，其优点是易于保定，血管位置明显，并且血管游离性小；3.翼下静脉采血法，翼下静脉采血法是鸡的采血方法中最常用的，翼下静脉采血前一定要用酒精棉球消毒，酒精有扩张血管作用。采血完毕，要用干棉球压迫采血部位，不要用酒精棉球，因为酒精会引起溶血，造成血液凝固不良，不利于止血4.心脏采血法，鸡心脏采血对心脏有损伤，也易伤及肺脏等其他脏器，引起内脏出血，影响鸡的生长发育，甚至会造成死亡，特别是雏鸡，常因针头刺破心脏和肝脏导致出血过多而死，心脏采血虽然难度大，但是采血速度快、血量多、效率高，适宜于多量血液时使用。针对采集群体情况选择合理的采集方法，避免因为采集方法的原因影响采集的进行。

4 血液样品包装和运输

由于检测采样实际工作的需要，在日常工作中经常会对多个场点进行采集样品，由于工作任务量大所以没办法立即对采集的血液样品进行离心分离包装，只能通过采集后的自然凝集分离出血清样品，这就要求对血液样品采集后包装暂存和运输有了较强的要求，采集后的血液样品应倾斜放置于有一定固定作用的箱体内保存，且按一定数量捆扎标注，这样有利于血清样品在采集器具内形成自然分离层和方便自然分离出的血清转移至离心管中保存，为接下来的工作提供便利，采集的血液样品尽量使短期保存箱体内温度在20℃～30℃，只有在长时间运输或保存才需要冷藏或冷冻保存，因为血液样品采集后就冷藏或冷冻保存的全血样品要分离出血清就需要解冻或水浴，这样会对以后的血清分离造成困难，容易出现反复溶血的现象，特别要提到的是家禽中鹅和肉鸭的血清中血脂的含量高于鸡，所以能避免反复冻融就尽量避免反复冻融。

5 血液样品分离

在实际日常工作中血液样品多在采集结束后集中分离，分离中一般分两种情况：一种是通过自然凝集最用析出比较好的血清样品，一般在采集时温度等条件较好时容易得到这内样品，这类情况的样品只需要在采集后保存与1.5ML或2ML离心管中就可以；另一种就是受因素影响不能正常析出，这就需要通过其他方法来获得检测所需要的合格血清样品，这时候就需要借助必要的仪器设备来处理，综合几年工作经验，个人建议通过离心机获取血清，用水浴方法获取血清在获取效果和获取时间上相对与离心法获取都有很大差距。且通过离心法获取时，尽量选择2ML离心管在温度20℃～30℃时分离，分离转速在2000～4000转/分钟，时间3分钟为宜，当操作温度低时可以适当增加离心转数和时间。

6 血清样品保存

血清样品在获取后，应该根据工作的实际需要对样品分包后选择是冷藏保存还是低温冷冻保存，为后续的检测或送样提供帮助。