复方丹参滴丸处理对大鼠移植心脏心肌细胞保护作用及细胞凋亡线粒体途径的影响

刘尊涛，胡定辉，杜 琎，李 航，李鸿雁

（1.南京中医药大学附属中西医结合医院胸心外科，江苏 南京 210028；2.东南大学附属中大医院胸心外科，江苏 南京 210009）

为了探究复方丹参滴丸处理对大鼠移植心脏心肌细胞保护作用及细胞凋亡线粒体途径，研究利用大鼠移植心脏缺血再灌注损伤模型，分析复方丹参滴丸处理对大鼠移植心脏心肌细胞产生的影响，为临床应用推广提供理论依据。

1 实验材料及试剂

SD大鼠，复方丹参滴丸，兔抗鼠Bcl-2及Bax多克隆抗体、HRP-羊抗鼠二抗、TUNEL试剂盒，Powerlab多导生理记录仪等。

2 手术方法

受体的制备。受体鼠术前禁食6～8 h。用1%戊巴比妥钠按50mg/kg剂量腹腔注射麻醉，麻醉后固定四肢。腹部脱毛，碘伏消毒，腹部正中切口进腹，显露腹主动脉和下腔静脉备用。

供心摘取。同受体麻醉，固定，术区备皮，消毒。腹部正中切口进腹，暴露下腔静脉经其注入125u/mL肝素盐水2mL并剪断放血，迅速打开胸腔，游离修剪供心，置入冰水混合物中保存。

供心移植。暴露吻合口部位，采用Ono氏术，供心升主动脉和主肺动脉分别与受体的腹主动脉和下腔静脉作端侧吻合。供体心脏恢复血供之后大多先出现纤颤，用40℃左右生理盐水浇淋心脏使之快速复温，心脏复跳。观察无出血后，缝闭腹腔，灯照保温1 h。

术后处理与观察。手术后根据术中出血情况补入生理盐水5～6mL，保温。

3 实验设计

SD大鼠48只，随机分为4组，每组6例心脏移植（其中供体6只，受体6只），分组如下：①单纯移植组，术前未用任何药物。②缺血后处理组：术前未用任何药物，移植术毕，供心升主动脉完全开放前间断开放15s阻断15s，共3次。③复方丹参滴丸处理组，供体每日灌胃1次，连续7天，复方丹参滴丸溶于5mL生理盐水中。④模型对照组，供体于相应时间内等量生理盐水灌胃，每日1次，连续7天。实验结束后24h，分别处死各组动物，立即取出供心用冰生理盐水洗涤后置于液氮中保存。实验结束后利用Western blot对p53，Bcl-2及Bax蛋白水平进行分析，再利用TUNEL染色法及Western blot，对心肌细胞凋亡情况进行分析。

用SPSS18.0软件对数据进行统计学处理，P＜0.05为差异有统计学意义。

4 结 果

相较于其他3组，复方丹参滴丸组大鼠心肌细胞凋亡指数及Bax、P53蛋白阳性染色指数、Bcl-2的蛋白阳性表达较稳定，差异有统计学意义（P＜0.05）单纯移植组、缺血后处理组以及模型对照组3组间各项指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 4组心肌细胞凋亡指数及Bax、Bcl-2、P53蛋白阳性表达比较

5 讨 论

缺血再灌注损伤时心肌细胞由于缺血、缺氧等因素可导致出现细胞凋亡，这个过程是在凋亡基因调控下展开的。Bcl-2/Bax比值在对细胞凋亡过程介导中有着重要作用［1］。Bcl-2有抑制细胞凋亡的重要作用，而Bax则可以直接促进细胞凋亡，Bcl-2及Bax都是正负调控的凋亡蛋白，Bcl-2/Bax比值影响着细胞区域凋亡还是存活问题［2］。近年来，有研究显示，缺血再灌注损伤时Bcl-2/Bax比值会出现明显下降。大鼠移植心脏缺血再灌注损伤后心肌细胞Bcl-2/Bax也出现显著下降，提示移植心脏缺血再灌注损伤后心肌细胞出现凋亡。p53是介导细胞凋亡的一种调节蛋白，当细胞受损伤及辐射等影响时，p53表达上调且直接介导细胞凋亡［3］。Bax与Bcl2同为p53调控的线粒体凋亡途径Bcl2蛋白家族成员，单纯移植组和模型对照组p53蛋白水平升高，说明p53活化介导的线粒体凋亡通路Bax蛋白高表达可能是心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的原因之一。复方丹参滴丸可能通过下调p53蛋白水平抑制细胞凋亡信号通路，从而阻断心肌细胞凋亡蛋白，降低心肌细胞凋亡，对心脏功能进行保护［4］。