大方县引进能繁母牛发生焦虫病防治对策

万廷友 肖拉拉 吴位珩 徐景峨 杨莉 刘镜 孙启跃 蒲鲁琴 廖梅

（1，贵州省大方县动物疫病预防控制中心 551600；2，贵州省畜牧兽医研究所 550005；3，贵州省畜禽遗传资源管理站 550001）

牛焦虫病是由蜱为媒介传播的一种虫媒传染病，焦虫寄生于牛的红细胞内。主要临床症状是高热贫血或黄疸，反刍停止，泌乳停止，食欲减退，消瘦，严重者则造成死亡[1]。牛焦虫病在贵州省的流行已有40多年的历史，这是由于贵州属于高原地带，多山地灌丛，气候多温暖潮湿，适宜传播媒介蜱的生长发育，因此，牛焦虫病分布于全省各地州市县，凡是引进纯种牛、杂交牛和本地牛混合饲养放牧的场所，极容易发生和流行此病，如不及时治疗其发病死亡率则占发病数50%～100%[2]。大方县2016年8月至2017年6月间，通过恒大集团大方扶贫公司引进的西门塔尔能繁母牛陆续发病，由于当地兽医缺乏经验，不能及时准确诊断该病，按常规方法采用抗生素治疗，效果不佳，导致部分病牛死亡。笔者及时与贵州省畜牧兽医研究所相关专家进行会诊，并无菌采集病料 （血涂片、全血、病死牛肝、肺、脾、心、肾、淋巴结等）送至贵州省畜牧兽医研究所畜禽疫病研究室进行检测，确诊为牛焦虫病，严重的病牛系继发牛出败而死亡。现将具体情况汇报如下。

1 发病情况

2016年8 月至2017年6月间，大方县通过恒大集团大方扶贫公司陆续引进1～3岁西门塔尔能繁母牛，通过隔离观察后发放给贫困农户饲养，每户养牛1～3头，截止2017年6月12日共计发放扶贫牛1604头，在农户饲养过程中不同程度发生焦虫病，波及全县27个乡镇 （办事处），发病133头，发病率为8.29% （133/1604）死亡57头，死亡率为3.55% （57/1604）。

2 临床及剖检症状

2.1 临床症状

病牛出现体温升高达40～41.5℃，呈稽留热。病牛精神沉郁，采食下降，反刍减少，眼结膜苍白，贫血，喘气，消瘦，拉茶色尿，怕累，大部分病牛出现啃土等异嗜现象。后期病牛流涎，食欲废绝，反刍停止，后躯无力，卧地不起，倒地后3d左右死亡。同时在病牛体上采集到微小牛蜱。

2.2 剖检症状

病牛脾脏脾髓变软，呈暗红色，白脾髓大呈颗粒状突出表面；心肌柔软，呈黄红色，心脏表面弥漫性出血，心内膜点状出血；膀胱内充盈大量红色尿液，黏膜有出血点；气管内有泡沫状液体，肺脏切开轻微挤压可见带气泡的分泌物；血液稀薄。

3 病样的采集

无菌采集死亡牛的肝、肺、脾、心、肾、淋巴结等组织，冷藏置于保鲜箱中；无菌采集病牛的耳尖静脉血，制成血涂片，待自然干燥后，置于玻片盒中；微小牛蜱置于无菌小玻璃瓶中，一并送至贵州省畜牧兽医研究所畜禽疫病研究室。

4 实验室检测

（1）血涂片染色、镜检，将自然干燥的血涂片，经甲醇固定5min，用姬姆萨染液染色40～50min，冲洗，干燥，用40×10倍和100×10倍光学显微镜镜检。

姬姆萨染色液的配制：取姬姆萨染料0.6g，加于甘油50ml中，置55～60℃水浴中1.5～2h后，加入甲醇50ml，静置1d以上，滤过即成储存之姬姆萨染色原液。临染色前，于每毫升蒸馏水中加入上述原液一滴，即成姬姆萨染色液。应当注意，所用蒸馏水必须为中性或微碱性，若蒸馏水偏酸，可用于每10ml加入1%碳酸钾一滴，使其变成微碱性。

镜检可见，持续高热的病牛血液中大部分的红细胞正常形态被破坏，红细胞内有梨型、环形、逗点形、杆状形虫体，有些牛血涂片混合有附红细胞体感染，镜检可见红细胞边缘不整齐，呈菜花状或星状状，症状严重的病牛，80%以上红细胞被感染 （见图1）。

（2）采集到的微小牛蜱，取腹腔血涂片，自然干燥后，按上述方法染色镜检，可见红细胞内有梨型、环形、逗点形、杆状形虫体。

（3）将采集的病料组织接种于10%犊牛血清肉汤培养基中，37℃恒温培养24h，可见肉汤均匀浑浊，将培养物转接于10%犊牛血清固体培养基中，37℃恒温培养24h，可见灰白色、露珠状、针尖大小的菌落，美蓝染色镜检可见典型的两极着色，革兰氏染色为阴性的小杆状细菌。

（4） PCR诊断：采用建立的牛出败病原 （多杀性巴氏杆菌(Pm)）PCR诊断方法对和纯培养物进行PCR扩增，结果可见在585bp出现目标带 （见图2），判断为阳性。引物的序列为：Pm1 5′-TGCTCTATCCGCTATTTACCCAG-3′； Pm2 5′-TCCCACCACATCAAATCCCG-3′。

5 结论

根据发病情况、临床症状 （高热稽留热、眼结膜苍白，贫血，拉茶色尿等）、剖检症状及实验室诊断，确诊为焦虫病感染，严重后继发牛出败感染，导致牛死亡。

6 防治对策

6.1 消灭中间宿主

采用化学灭蜱、生物防治灭蜱、免疫学预防方法灭蜱等综合措施，可控制微小牛蜱对牛的侵扰，这也是防治牛焦虫病的基础。消灭牛身体上寄生蜱和圈舍内外的蜱，可采取人工捉蜱或体表喷洒药物的方法，用2.5%敌杀死油乳剂按1：200～l：250倍稀释，每隔15d喷雾牛体1次，或1.5%～2%敌百虫溶液，每7天喷雾1次，还有如残杀威、溴氰菊酯、氯氰菊酯、驱蜱灵等按说明书剂量使用。对圈舍内墙面、缝隙应定期喷洒药物灭蜱，用药时谨防人畜中毒；另外，结合人工种草、深翻土地、改良土壤等措施破坏蜱的生存条件，以消灭外界环境中的蜱；给感染微小牛蜱的牛注射大环内酯类抗生素如伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素的长效制剂来控制或消灭蜱。

6.2 定期进行药物预防

由于大方县属于高原地带，多山地灌丛，气候多温暖潮湿，适宜传播媒介蜱的生长发育，因此，引进纯种牛、杂交牛和本地牛混合饲养放牧的场所，极容易发生和流行此病，除积极灭蜱外，在引进牛应激阶段过后，在发病季节前 （5月前）采用三氮脒、青蒿素按治疗量的一半预防焦虫病，一次用药可预防2个月左右。在老疫区一般应进行2～3次预防。同时，在引进牛后，应及时接种牛出败疫苗。

6.3 加强饲养管理

5～9月是蜱的活动高峰期，牛群应避免到大量滋生蜱的牧地放牧。不从疫区引进牛，引进牛应作隔离检疫，对发病的牛进行隔离饲养，发现血液红细胞内有虫体的应及时治疗，病愈牛有带虫免疫现象，当营养不良、过度使役、环境气候突变等原因，可使病反复发作，遭受重复感染。因此，应加强饲养管理，减少应激，提高机体抵抗力，才能有效降低本病的发生。

6.4 早期诊断

图1 牛血涂片焦虫显微摄影

图2 PCR扩增结果

对临床疑似病例 （如5～9月有发热现象的牛）进行涂片镜检，通过早期诊断结果对阳性牛场采取防治措施，有助于降低本病的发病率与死亡率。对零星发生该病农户的牛采取有效防治，以防该病流行，最大限度降低农户损失。

6.5 治疗

三氮脒深部肌肉注射，重症病牛首次加肾上腺素，同时注射磺胺间甲氧嘧啶钠控制继发感染，连用3d。并采用中药辅助治疗：大蒜200g、灶心土100g、血余炭50g、土酒曲20g、山楂50g、厚朴50g捣碎加水调匀灌服。采用该方法治愈发病牛67头。