外周血染色体核型分析在染色体病诊断中的价值研究

万涛

【摘要】 目的：探析外周血染色体核型分析在染色体疾病诊断中的应用价值。方法：收集2012年7月-2017年11月于笔者所在医院进行遗传咨询并接受外周血染色体核型分析的1 000例患者作为研究对象，统计遗传咨询原因、外周血染色体核型分析结果。结果：1 000例遗传咨询者因先天愚型、性征异常、男性不育症、不孕症、原发或继发性闭经、先天性智力低下、习惯性流产、畸形胎史或死胎史、先天畸形等原因入院就诊，外周血染色体核型分析检查检出异常56例（5.6%），其中不良孕产组病例染色体全为结构异常，此外不孕不育组、新生儿表现异常组和生产发育异常组大多数为染色体数目异常。结论：遗传咨询者通过外周血染色体核型分析可检出异常核型，与临床表现相结合可诊断染色体病，应用价值高，值得推广。

【关键词】 外周血； 染色体核型分析； 染色体病； 诊断

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.19.026 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2018）19-00-03

染色体病发生的原因为染色体结构异常或染色体数目异常，目前医学对该疾病尚无根治方法，关键在于积极采取有效防御措施，产前指导孕妇定期入院接受孕检，因为出生个体一旦发生疾病可能导致先天性畸形、性征异常、智力低下、不孕、流产、生长发育障碍或异常、影响后代生育等不良后果[1-2]。外周血染色体核型分析是临床辅助诊断染色体病的重要手段，本文旨在探析外周血染色体核型分析在染色体疾病诊断中的应用价值，收集2012年7月-2017年11月于笔者所在医院进行遗传咨询并接受外周血染色体核型分析的1 000例患者进行了回顾性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2012年7月-2017年11月于笔者所在医院进行遗传咨询并接受外周血染色体核型分析的1 000例患者，其中男475例，女525例，年龄1 d～58岁，平均年龄（26.88±5.12）岁；且年龄低于40岁者951例，占总比例95.1%。纳入研究者遗传咨询就诊原因主要有夫妻有畸形儿生育史、有不良孕产史、不孕不育、先天畸形、智力低下、高龄初产妇、染色体平衡易位携带者等。所有纳入研究者均对此次研究知情，并签署同意书加入其中，且研究已获得笔者所在医院伦理委员会批准，同时排除对研究不知情者和不愿意配合检查者。

1.2 方法

1.2.1 外周血标本淋巴细胞培养 严格按医院无菌操作流程抽取静脉血3 ml，注入5 ml无菌肝素抗凝管内，轻轻颠倒混匀，在超净工作台环境下将大约0.3 ml的全血标本融入到含有外周血核型分析培养基的培养瓶内（培养基由北京易世盛达科技发展有限公司提供），培养瓶接种之后放于温度在37 ℃，且含有5%浓度二氧化碳的培养箱中，持续培养72 h[3]。

1.2.2 染色体G显带 培养终止前3 h在培养瓶中加入浓度为20 μg/ml的秋水仙素溶液50 μl，细胞悬液接着被移到10 ml容量离心管中，离心处理转速为2 000 r/min，处理10 min后去除上清液再加入6 ml浓度为0.075 mol/L的KCl低渗液，尽可能均匀，之后再放在温度为37 ℃的水浴箱中，时间约20 min，离心管取出即刻加入新鲜配制的固定液进行预固定处理，固定液按冰醋酸和甲醇以1∶3的比例配成，剂量为1.0 ml，轻轻吹打混匀，再以2 000 r/min的转速离心10 min，去除上清液后加入新鲜配制的固定液，同上，剂量为5 ml，轻柔充分吹打混匀之后，10 min 2 000 r/min离心处理，弃去上清液后，再重复固定1次，最后步骤以少量固定液对细胞进行重悬。滴管吸取少许细胞悬液，将其均匀地滴在清洁消毒后的湿润载玻片上，同样操作制片2～3张，编号后均放于鼓风干燥箱以内，持续60℃干燥过夜处理，取出载玻片使其自然冷却至室内常温，接着将其放入0.05%浓度剂量约50 ml的胰蛋白酶溶液中，消化留置大约40 s，立即在生理盐水中漂洗两次，再经吉姆萨染液处理，时间控制在5～8 min，随后在室温环境下放置干片之后进行分析[4-5]。

1.2.3 外周血染色体核型分析 在油镜下常规进行外周血染色体核型分析，每位患者计数20～30个中期分裂相核型，分析3～5个G带核型，最终画图分析3个核型并拍照；若为高疑嵌合体病例，计数分析中期分裂象扩大到100个或200个，以确定结果比例。部分患者根据病情需要还进行了银染、R带、C带、高分辨显带等其他针对性辅助检查[6]。

2 结果

2.1 一般情况

1 000例遗传咨询入院接受外周血染色体核型分析检查患者中发现染色体异常56例，异常检出率为5.6%。按遗传咨询原因将1 000例患者分为不良孕产组、不孕不育组、婴幼儿表现异常组、生产发育异常组及其他五组，对应病例数分别为300、400、200、50、50例。1 000例遗传咨询者入院接受诊断的原因及和异常染色体检出情况见表1。

2.2 五组患者染色体异常核型分布情况

56例染色体异常患者中，包括染色体数目异常39例（69.6%）、染色体结构异常17例（30.4%），不良孕产组染色体全为结构异常，此外不孕不育组、婴幼儿表现异常组和生产发育异常组大多数为染色体数目异常，五组患者检出异常类型分布特点见表2。

2.3 染色体核型分析异常及其主要临床表现情况分析

（1）不良孕产组染色体异常病例异常核型有46，XX，t（1；10）（p21；q25）、46，XY，t（1；13）（q44；q14）、46，XX，t（2；11）（p12；q22）、46，XX，t（2；12）（q33；q24.3）、46，XY，t（3；14）（p10；p10）、46，XX，t（5；12）（q33；q13）、46，XX，t（11；22）（q23；q11.2）、46，XY，inv（2）（p11.2q13）、46，XX，inv（4）（p12q21）、46，XY，inv（Y）（p11.3q12），临床主要表现有不良孕产史、复发性流产、自然流产、先兆流产、畸胎史、死胎史等。（2）不孕不育组染色体异常病例异常核型有mos 45，X/46，XX/47，XXX、45，XX，der（13；14）（q10；q10）、45，XY，der（13；14）（q10；q10）、46，X，i（X）（q10）、47，XXY，临床主要表现为原发性不孕、妻子不孕、男性无精子等。（3）婴幼儿表现异常组异常核型有mos 46，XX/47，XX，+21、46，XX，der（21；21）（q10；q10），+21、47，XX，+21、47，XY，+21、mos 46，XX/47，XX，+mar、46，XX，del（18）（q12q12）、47，XY，+mar，主要临床表现有三体综合征，智力和生长发育落后等。（4）生产發育异常组异常核型有mos 45，X/46，X，i（X）（q10）、mos 45，X/46，XY、47，XXY，主要临床表现有身材矮小、甲亢、卵巢早衰、原发性闭经、高泌乳素血症、月经失调、男性乳房发育、先天卵巢发育不全等。

3 讨论

染色体核型异常是导致流产的重要因素之一，核型异常主要又分为倒位和平衡易位，因为染色体基本没明显或重要物质丢失，异常携带者可能并无临床症状，而一旦生育就常发生多次、反复流产，根据遗传学效应解释主要是减数分裂时形成了不平衡的配子，受精卵形成之后合子往往为部分三体或染色体单体，进而导致胚胎坏死而发生流产现象[7]。夫妇中染色体平衡易位是最常见异常核型，有数据研究显示，正常人中该异常核型发生率大概在0.2%，横向比较多次流产病例中平衡易位发生概率高出常人10～20倍[8]。本次研究1 000例遗传咨询者中有不良孕产史和不孕不育症共计700例（70%），其中不良孕产组均为染色体结构异常，临床主要表现有不良孕产史、复发性流产、自然流产、先兆流产、畸胎史、死胎史等；不孕不育组大多数为染色体数目异常[9]。

染色体疾病一般涉及多系统、器官、组织，目前临床对其治疗并无有效方法，为降低染色体病发生率，产前诊断、遗传咨询是主要预防手段。染色体病表现多样，其中以综合征最为常见，染色体严重畸形者可宫内死亡或自然流产，少数畸变者存活到出生后新生儿易多发畸形，常发育异常、智力低下、生长迟缓、多器官及系统功能障碍等，给患儿家庭带来终身遗憾，有研究显示染色体病高危因素有高龄、不良物理化学环境、病毒感染等，这些特殊群体孕育应做好孕前检查，注意染色体病遗传咨询。

性别分化由男性Y染色体决定，有研究发现该染色体携带相关基因由睾丸决定因子决定，也被称之为Y染色体性别决定区（SRY）[10]，它在胚胎原始性腺中表达，性腺再分化成睾丸，睾丸功能正常表达、正常发育才能决定男性性征表型及生理功能。因此可以说染色体类型并不可完全决定最终社会男性性别，临床可表现有XX男性，呈现出睾丸小、多年不孕、无精子等表象，这也就是染色体核型异常和性征异常表现之一，而患者临床性征表现异常又分为第一特征和第二特征两种，通过外周血染色体核型分析可诊断其相关隐形染色体病[11-12]。

综上所述，外周血染色体核型分析检查可发现患者核型异常，而且可细化到数目异常或结构异常分型，是临床诊断染色体病的重要依据，应用价值高。

参考文献

[1]杜涛，陈巧灵，吕杰忠，等.1638份外周血染色体核型分析[J].中华医学遗传学杂志，2015，32（5）：739-740.

[2]郭红霞，平慧，董志玲，等.邯郸地区927例遗传咨询者外周血染色体核型分析[J].山东医药，2014，54（37）：45-47.

[3]朱蕊，曾爱群，杜晶春，等.780例遗传咨询者外周血染色体核型分析[J].海南医学，2016，27（14）：2249-2251.

[4]李春艳，李卫凯，梁齐合，等.766对不良孕育史夫妇外周血染色体核型分析[J].国际检验医学杂志，2015，36（15）：2185-2186.

[5]肖卓妮，徐望明，杨菁，等.湖北地区1725例不育男性的外周血染色体核型分析[J/OL].中华临床医师杂志：电子版，2012，6（16）：4671-4674.

[6]郭东花，任晨春，梁玥宏，等.117例9号染色体倒位患者外周血染色体核型分析[J].中国妇幼保健，2017，32（8）：1728-1730.

[7]唐葵.1521例遗传咨询者外周血染色体核型分析[J].检验医学与临床，2012，9（8）：994-995.

[8]徐文瑜，陈彦明，黄月娇，等.320例新生儿外周血染色体核型分析[J].中外健康文摘，2012，9（23）：200-201.

[9]杨艳丽，张莉，孙莉莉，等.沈阳地区340例遗传咨询者外周血染色体核型分析[J].中国妇幼保健，2013，28（29）：4860-4861.

[10]马京梅，潘虹，张慧婧，等.3376例复发性流产夫妻染色体核型分析[J].中国全科医学，2015，18（9）：1046-1049.

[11]张美华，张爱东，李娟，等.138例身材矮小儿童染色体核型分析[J].中国妇幼健康研究，2013，24（4）：485-486.

[12]李春，沙莎.1000例遗传咨询者外周血染色體核型分析[J].中国继续医学教育，2017，9（15）：70-71.

（收稿日期：2018-01-24）