PCR技术在猪病诊断和防治中的应用

王金平 张会超

摘要：最近这些年以来，我国猪的饲养量比较大，但是由于飼养水平的不同，导致猪场中疾病的发生增多，而且流行的疫病多为典型性、多种病毒混合感染的趋势发展，感染患猪在临床上表现的症状没有明显的特征性，从而导致对于疾病的确诊更加的困难。现主要通过对于PCR技术特性的简单介绍，从PCR在临床生产中对于猪常见传染性疾病的诊断和防治方面展开分析，以期对疾病发挥更好的控制作用。

关键词：PCR技术；猪病；诊断；防治

中图分类号：S858. 28

文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2018）06-0069-01

1 PCR检测技术的发展

通过多年在临床应用PCR技术对于猪病的检测经验可知，该技术不仅扩增速度快，特异性高，而且最重要的优点就是便于操作，所以方便于临床应用。PCR检测技术可以在比较短的时间内针对目的基因展开比较快速的扩增，使得微量目的基因的检测在临床生产中得以实现，靶序列两端的寡核苷酸引物是决定PCR检测技术特异性的主要因素。最近这些年PCR检测技术呈现不断的发展状态，不仅是局限于传统的PCR检测技术，而是在此基础之上继续研究从而衍生出各种新型PCR技术。

2 应用PCR技术检测单一病毒

2.1 猪2型圆环病毒

2型圆环病毒（ PCV）是目前所知的最小的动物病毒。根据相关研究可知有PCV1和PCV2两个血清型，其中PCV1属于非致病性的病毒而PCV2则是致病性的病毒。临床中PCV主要会引发断奶仔猪多系统衰竭综合征，如果引起的是急性发病，则患病猪群的病死率可能达到10%，而耐过猪在生长的后期发育迟缓非常明显，生产中通常可以采用疫苗给猪群加以免疫，还有多种抗生素类药物也能对该病发挥一定的治疗效果。

根据相关的报道可知依据基因库中2型圆环病毒ORF2的基因序列设计引物，以临床分离的该病毒基因为模板，通过筛选合适的反应条件，建立了一种能够检测圆环2型病毒的PCR方法。根据结果可知该方法的特异性非常良好，应用PCR检测的方法可以针对最低限度为含PCV- 2DNA含量为10.8 pg的样品加以检测，此结果说明PCR检测法相对比较灵敏。生产中采用此检测法该方法在实际临床中对于送检病料加以检测，均能获得比较高的准确率，所以证明PCR检测的方法符合实际生产的需要，可以在猪的防疫方面提供相对可靠的依据。

2.2 猪瘟病毒

猪瘟在猪饲养过程中具有严重的危害性，一旦在猪场中发生流行，就会给饲养者带来比较严重的经济损失。我国有关部门一直采取相应的措施以控制猪瘟的发生和蔓延，但是仅有很少的收效。所以最近这些年已经有相关专业的科研人员通对引物加以不同的设计，然后建立用反转录聚合酶链反应（ RT- PCR）技术检测猪瘟病毒的方法。通过科研人员的相关实验可知，表明采用RT - PCR检测法能够在一定程度上解决传统免疫血清学方法不能解决的问题。PCR检测法具有比较强的特异性和比较高的可靠性，在实际生产中加以应用可以在比较短的时间内对猪瘟病毒做出准确的诊断分析。

2.3 母猪繁殖障碍与呼吸综合征

繁殖与呼吸综合征目前在全世界的范围内都有发生和流行，感染的母猪在繁殖功能方面出现异常，仔猪死亡并且免疫机能出现障碍。所以在实际生产中，对于该病在比较短的时间内做出快速诊断是防治该病比较重要的因素。如果在出现疾病的时候仍然采用比较常规的检测方法，操作非常繁琐而且耗费大量的时间和精力，在诊断的时候与猪瘟、细小病毒非常容易发生混淆，所以导致结果的可信性不高。因此有相关专业的科研人员通过建立利用反式聚合酶链式反应的方法对于该病毒加以检测，在实际生产中的应用和不断的摸索，从而建立PCR方法用于该病的检测。

3 PCR在混合感染中的应用

目前PCR检测技术领域中还有一种多重PCR技术，是在同一反应体系里加入两种以上病毒的引物，此多重PCR检测方法与普通的PCR技术相比可以实现同时检测两种或三种以上病原菌的目标，且能够获得比较准确的检测结果，给出的反应比较快速，此外还具有敏感度高等优点，这些都是普通PCR检测技术所缺少的。实际的养猪生产中出现多种病毒混合感染的情况比较常见，兽医工作人员一直坚持凭经验或者是治疗性的诊断方式进行介入治疗，很容易错过疾病最佳的治疗时间，所以多重PCR技术的建立对于疾病的快速诊断是非常有必要的。但是目前的研究阶段，多重PCR技术应用于病原检测的研究还是需要进一步加以改善的。增加检测病原的数量，可以通过进一步增加反应体系中的引物对，从而将一次扩增反应的检测范围进行拓宽。除此之外，以后的研究可以对于检测疫苗株和变异株作为重点内容进行相关的流行病学调查，可以在疾病防治的方面进行基础的奠定。其次，还应该将多重PCR检测技术与其他技术互相结合，这样能够将检测的敏感性和特异性在不同程度上提高并且将检测时间相应的缩短。最后要严格区分实验室，同时加强实验室的相关管理等措施。