黄芪药材中黄芪甲苷UPLC—ELSD含量测定方法的优化

王磊，苏丽

摘 要：本文采用高校液相测定了黄芪药材中黄芪苷的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5？滋m），甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，ELSD检测器漂移管温度90℃，气体流速：3.0L·min-1，柱温：30℃。黄芪苷在20～350微克/毫升范围内呈良好的线性关系。黄芪苷的平均回收率为99.3%，RSD为0.88%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于黄芪药材中黄芪苷的含量测定。

关键词：黄芪药材；黄芪苷；含量

黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，具有增强机体免疫功能、保肝、、调节血压、抗病毒性心肌炎、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。《本草经疏》记载：“功能实表，有表邪者勿用；能助气，气实者勿用；能内塞，补不足，胸膈气闭问，肠胃有积滞者勿用；能补阳，阳盛阴虚者忌之；上焦热盛，下焦虚寒者忌之；病人多怒，肝气不和者勿服；痘疮血分热甚者禁用。”现代医学研究表明，黄芪含皂甙、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。本文采用高校液相测定了黄芪药材中黄芪苷的含量。

1 仪器与试药

电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；YL9100液相色谱仪（汕头市科毅仪器设备有限公司）；SB25-12DTS双频超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；CO-Ⅳ色谱柱温箱（恒温柱箱）（天津琛航科苑科技发展有限公司）；蒸发光散射检测器（上海通微分析技术有限公司）；MPC-K6s加热制冷型恒温水浴油浴（北京赛美思仪器设备有限公司）；美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；10升数控型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）。黄芪苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、甲醇（安徽胜达化工科技有限公司）、冰醋酸（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、乙醇（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、三乙胺（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、正丁醇（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦C18规格为（4.6mm×250mm，5？滋m）；甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，ELSD检测器漂移管温度90℃，气体流速：3.0L·min-1。理论板数按黄芪苷峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取黄芪药材粗粉，精密称取，置索氏提取器中，加甲醇80ml，冷浸12小时，回流4小时，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣用30毫升纯化水溶解，用水饱和过的正丁醇萃取三次，每次30毫升，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣用50%乙醇溶液溶解转移至25毫升容量瓶内并分次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取黄芪苷对照品约5毫克，用流动相溶解并稀释成每1ml中含100微克的溶液，作为对照溶液。

2.4 阴性溶液的制备

取实验用试剂，依上述方法测定，结果在黄芪苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 准曲线的制备

制备浓度为20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（微克）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，黄芪苷对照品在20～350微克/毫升范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取黄芪苷对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.69%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重現性试验

称取同一批的黄芪药材样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.68%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的黄芪苷对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.88%。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定黄芪药材三批样品中黄芪苷的含量。

3 讨论

分别考察甲醇-乙腈-水（20∶20∶60），乙腈-水（40∶60），甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氢钠∶甲醇（体积比为15∶85）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于黄芪药材中黄芪苷的含量测定。黄芪药材中黄芪苷的含量应为不少于0.4毫克/克。

参考文献

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