COX-2、MMP-2、VEGF在反流性食管炎癌变过程中的表达及意义

陈东来 林顺权 宋成虎 钟新友

（惠东县第二人民医院内科 广东 惠东 516351）

反流性食管炎（reflux esophagitis，RE）属于常见消化道疾病，是由于混合反流造成食管黏膜损伤引起的炎性病变。临床统计数据显示：2014—2018年我国反流性食管炎发生率年增高2.3%[1-2]，而且Barrett食管患者向EAC转变的风险是正常人群的60～120倍。本文采用免疫组化技术检测COX-2、MMP-2、VEGF在各类型正常、反流性食管炎、BE、食管癌组织中的表达，并结合临床实践，分析三者表达变化的意义，以及与癌变发生的相关性。

1.一般资料和研究方法

1.1 一般资料

收集经病理证实的中山大学孙逸仙纪念医院外科手术切除的食管癌石蜡标本12例（10%的福尔马林液固定），内镜下获得正常食管上皮15例，轻、中、重度反流性食管炎20例，Barrett食管13例。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫组化 内镜下采用Lugol液染色，钳取橘红色病变组织，甲醛中常温固定。石蜡包埋，切片，HE染色；样本漂洗、脱蜡；30mlH2O2阻断内源性过氧化物酶，微波抗原修复，非免疫血清封闭，观察各期病理变化[3]。

1.2.2 RT-PCR法 研磨管中加入1mlTrozil进行研磨，完成后倒入EP管中，在4℃环境中进行1200r/min离心，离心时间为5min，半径为10cm；取上清液，静置5min；加入200l氯仿，剧烈震动15s，常温环境中静置3min；在4℃环境中进行1200r/min离心，离心时间为5min，半径为10cm；取上层水相移入另一EP管中，加入等体积的异丙醇，常温环境中静置10min，并在此进行4℃环境下1200r/min速度的离心，离心时间为10min，可见白色沉淀[4]；除去上清，加入75%浓度的乙醇1ml进行清洗，进行4℃环境下7500转/min离心，离心时间为1min，防止于常温环境中进行干燥，放置时间为5min；用25μl DEPC处理过的离子水溶解RNA样品。用琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA降解情况，分光光度测量RNA含量，并放置于75℃冰箱中备用。

1.3 统计分析

2.结果

2.1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表达

在反流性食管炎发展过程中，的COX-2、MMP-2、VEGF随病程发展逐渐增强，在正常、RE、BE、EAC间存在显著差异（P＜0.05），具有统计学意义；COX-2、MMP-2、VEGF在BE、EAC中明显高于正常和RE组，BE和EAC相比也存在显著差异，具有统计学意义（P＜0.05），如表1所示。

表1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表达情况（±s）

表1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表达情况（±s）

注：相对于正常组，aP＜0.05；相对于RE组，bP＜0.05；相对于EAC组，cP＜0.05。

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2.2 COX-2、MMP-2、VEGF与食管癌的相关性

通过对COX-2、MMP-2、VEGF的多元Logistics分析，发现其在食管癌组织中的表达呈正相关，如表2所示。

表2 COX-2、MMP-2、VEGF 的Logistics分析

3.讨论

COX-2（环氧化酶-2）在刺激因子影响下表达量增加，促进细胞过分增殖，抑制细胞凋亡，而且加速肿瘤新生血管生成，促进肿瘤细胞浸润和转移。血管生成因子（VEGF）既能促进血管内皮细胞增殖，又能促进血管渗漏，而且诱导淋巴管形成，为肿瘤持续生长提供充足血液[5]。基质金属蛋白酶-2（MMP-2）被激活后可以促进肿瘤血管形成，并将细胞基底膜、细胞外基质IV、V型胶原和纤维连接蛋白成分水解，导致基底膜受损，肿瘤细胞浸润结缔组织基质，侵入淋巴管而发生远端转移。本研究结果显示，随病程发展COX-2、MMP-2、VEGF表达增强，说明COX-2、MMP-2、VEGF与食管癌发生、发展和转移密切相关。国内研究结果显示[6]，COX-2基因暴露于前列腺E2细胞株，能够显著提高VEGF、MMP-2表达，本研究结果与其研究相符，说明COX-2、MMP-2、VEGF不仅参与食管癌的发生，而且三者共同表达可提高食管癌的发生率，导致食管癌患者预后不良。

综上所述，COX-2、MMP-2、VEG与反流性食管炎癌变呈正相关性，三者共同表达可以促进食管癌发生、发展，促进其发生远端转移。因此， 通过检测COX-2、MMP-2、VEG三者的表达程度，可能更准确地预测食管癌的发展，成为食管癌变的预测手段。