不同色谱柱对克拉霉素胶囊含量测定结果比较

吴征（通讯作者）

（贵州省黔南州食品药品检验所 贵州 都匀 558000）

克拉霉素（Clarithromycin）为大环内酯类抗生素，在体内对部分细菌如金黄色葡萄球菌、链球菌、流感嗜血杆菌等的抗菌活性比红霉素强，在临床上得到日益广泛的应用[3]。2015版《中国药典》收载的克拉霉素及其制剂含量检测采用高效液相色谱法（HPLC）测定，系统适用性条件增加了拖尾因子的要求，理论板数无明确规定。在检验工作中，发现当使用不同品牌及型号的色谱柱时，所得结果差异较大。为此，笔者使用5款不同品牌材质的C18柱对克拉霉素胶囊进行了含量检测，筛选出适合克拉霉素胶囊含量测定的色谱柱。

1.仪器与试药

所使用的仪器型号为Agilent 1260型高效液相色谱仪，配置紫外检测器，使用试药为中国食品药品检定研究院生产的克拉霉素对照品（含量：97.2%，批号：130558-201303），分别用A、B、C、D为4个厂家生产的克拉霉素胶囊编号，乙腈为色谱纯，其他余试剂为分析纯。

2.实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱1：Agilent Zorbax SB-C18柱，150mm×4.6mm，5μm；色谱柱2：COSMOSIL 5C18-PAQ柱，150mm×4.6mm，5μm；色谱柱3：Thermo ODS-2Hypersil柱，250mm×4.6mm，5μm；色谱柱4：大连依利特Hypersil BDS C18，250mm×4.6mm，5μm；色谱柱5：大连依利特SinoChrom ODS-BP C18，250mm×4.6mm，5μm。

流动相：磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾9.11g，加水溶解并稀释至1000ml，加三乙胺2ml，用磷酸调节pH值至5.5）-乙腈(600∶400)。检测波长为210nm；流速为1.0mL.min-1；柱温：45℃[1]。

2.2 溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取克拉霉素对照品约17.5mg，置50mL容量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取供试品内容物适量（相当于克拉霉素35mg），精密称定，置100ml量瓶中，临用前加流动相适量，超声处理提取10分钟，放置至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得[1]。

3.实验结果

严格遵照拟定色谱条件，得到结果1，具体见表1、表2和表3，对照品图谱见图1。色谱柱1、3、4、5的拖尾因子均大于2.0，依据中国药典2015年版四部规定[2]，将流动相比例更改为：磷酸盐缓冲液-乙腈(550∶450)，其余色谱条件不变，再次测定得到结果2，所有色谱柱拖尾因子均不大于2.0符合药典规定，具体见表4、表5和表6。

图1

表1 第一次实验含量测定结果(%)

表2 第一次实验拖尾因子测定结果

表3 第一次实验柱效测定结果

表4 第二次实验含量测定结果(%)

表5 第二次实验拖尾因子测定结果

表6 第二次实验柱效测定结果

4.讨论

第一次实验中色谱柱2、3、4含量测定结果相差不大，色谱柱1、2峰形较好，色谱柱4柱效不高，峰形亦较差，拖尾因子偏大；第二次实验中所有数据拖尾因子均符合系统适用性要求，从表4可见：要想得到良好的峰形，即拖尾因子符合系统适用性要求，短柱柱效都达到5000以上，长柱柱效更是达10000左右，因此对色谱柱性能要求较高。但色谱柱1、2、5部分样品含量测定结果超出实验误差范围，与第一次相比差异较大，通过对比图谱分析发现，其中克拉霉素峰变大同时杂质峰变小，原因是因为流动相中有机相增加使极性变小，杂质不能有效分离从而造成差异。本次实验可以看出色谱柱2对克拉霉素能有稳定检测结果且峰形较好，值得充分重视，适用于克拉霉素的质量控制。