美洲猪瘟根除计划—措施、诊断技术及参考实验室

文│联合国粮农组织

译校│刘俞君 张淼洁 翟新验（中国动物疫病预防控制中心）

一、美洲的措施

美洲实施计划可以概括出以下措施：基于疾病的特征、养猪的宏观系统、猪瘟的存在对生态、经济、政治和文化的影响等方面，对美洲进行详细的区域化措施，并且采取动物健康措施。

近期目标：建立新的无疫区，协助那些有足够科学证据证明该国或者国内区域无疫，并且提供技术援助以获得无疫认可。

对区域、次区域和国家计划进行技术协调和管理，目标是做好补充措施，并将其可用的人力和物质资源最大化。

社区的加入和参与，重点在养殖者通过协会组织、肉类包装行业、私人兽医、生物制品生产商、大学和研究机构等发挥积极和决定性的作用。将兽医学校纳入其中，也非常有意义。

根据不同的生猪饲养模式，例如繁育场、育肥场和传统的规模养殖场，确定、选定区域根除策略。

通过书面和相关的媒介宣传目标，来推进计划的实施，以防止猪瘟在半球范围内蔓延。目的是获得涉足动物健康、畜牧业以及城市、城郊和农村相关专业人士的支持，并且获得实施半球计划的措施和策略所必需的生猪饲养信息，选择和培训参与计划的人员。与此同时，致力于支持计划的确立：国家和国际检疫系统；提高公众对于存在诸如猪瘟之类的跨界疾病所带来的卫生和经济风险的认知；流行病学监测；诊断活动和兽医生物制品必须满足国际标准，而且所参与的实验室必须达到最低生物安全标准，即满足猪瘟参考实验室开展相关实验活动所需要的条件，包括国际标准化组织或者对于良好实验室相关实践的认可；持续进行有关预防和控制跨界疾病的培训，包括猪瘟疫情防控演练；确定影响国家或者半球层面上疾病流行的风险因素；开展研究，确定田间或屠宰场取样菌株的病原性，以便检测是否存在猪瘟病毒（带菌猪）；建立国家动物健康应急系统；创建一个动物健康突发事件应急基金；通过粮农组织/世界动物卫生组织/世界卫生组织发布国际疾病报告。

1.美洲猪瘟根除计划管理。计划管理的主要目的是促进项目和计划的发展、实施和执行，这些项目和计划的短期目标是实现美洲大部分地区猪瘟无疫，这是根除半球范围内猪瘟进程的一部分。将通过建立指导委员会和国际技术咨询委员会（ITAB）实现这一目标。

（1）指导委员会。指导委员会是美洲猪瘟根除计划国际标准化的最高权威。由参与实施并提供资源的国际机构，每个区域和（或）子区域的两个代表国家组成。各个国家的代表推选出委员会主席。技术干事负责监督项目的国际标准和委员会达成的协议。根据其职责和技术能力，粮农组织将成为技术秘书处的负责机构。委员会的职能如下：

负责制定和监督国际标准化的实现，指导半球范围内各个国家建立、制定、控制和根除猪瘟的国家计划。

促进建立国家“战略联盟”，由负责动物健康的公共部门和私营部门（猪养殖者、饲料生产商、兽药生产商）组成，为国家项目提供财政支持，以及推广半球计划。

建立和支持参考实验室，为国家兽医诊断实验室提供如下参考服务：国际技术咨询委员会选择的诊断技术的定义、标准化，以及相关的培训；由国际技术咨询委员会确定和批准的标准诊断试剂的生产和销售；支持国家实验室测定病毒分离株的类型；应国家要求，对用于疫苗免疫项目的生物制剂进行质量控制。

应国家的要求，提供技术援助和培训，用于指导国家项目各个实施阶段使用不同方法和技术。

系统汇总和发布有关美洲猪瘟的流行病学信息。

通过区域或者半球论坛定期评估国家项目的进展情况（建议在安排动物健康部长会议或者世界动物卫生组织区域会议的同时安排半球论坛，以便从国际高级动物健康官员处获得有益的意见）。

应一个或多个国家的要求，为制定国家根除计划提供技术援助，并为控制/根除项目寻求财政支持提供必需的项目文件。

建立一个机制，促进和评估与生猪养殖相关的私营部门参与管理国家猪瘟项目以及为此筹措资金。

参与指导委员会会议的成本由各个成员负责。指导委员会根据其职能策划其活动项目，由组成委员会的国际组织按比例提供资金。根据委员会会议期间所做出的决定和可行性，资金可能来源于组织的固定预算或者预算外。会议议程应当考虑各个国家为了实现控制和根除猪瘟目标达成协议的可能性。除了国际标准外，可能会出现与半球计划实际应用相关的其他情况。

（2）国际技术咨询委员会。国际技术咨询委员会是指导委员会的技术顾问，由国际机构的代表组成，这些国际机构表示有兴趣在技术上和财政上支持半球计划，泛美兽医协会作为美洲的专业机构，代表各个区域的官方兽医机构，代表各个区域的生猪养殖户、代表技术秘书处和半球计划的区域协调者。

国际技术咨询委员会每两年召开一次会议（各个区域推选出官方兽医机构和猪养殖户的区域代表，按照这些代表制定的规则实施定期轮换制）。

2.国际组织在项目执行中的作用。各个国家和地区根据半球计划制定具体的计划。每个国家和地区根据半球计划的时间框架制定议程表，确定自己的工作和目标。应当明确的是，这样的计划是国家的责任，国际机构只是半球计划的协调者。

建议优先考虑靠近猪瘟无疫地区的感染区域。在有问题的区域，尤其是那些靠近边界的区域，国际机构可以应有关国家的要求提供援助。

控制和根除猪瘟计划，例如那些由中美洲农牧保健组织（OIRSA）制定的计划可能会对半球计划进行补充，保留相关国家同意接受的计划和义务。

相关国际机构将决定他们对计划的具体支持。这些机构包括：联合国粮农组织、泛美卫生组织（PAHO）、中美洲农牧保健组织、泛美口蹄疫中心（PANAFTOSA）/世界卫生组织、世界动物卫生组织（OIE）、美国农业部（USDA）和泛美兽医协会（PANVET），除此之外还有例如国际农业合作研究所和国际原子能机构（IAEA）。

一个普遍接受的观念是根据其授权和技术能力，联合国粮农组织负责技术秘书处泛美口蹄疫中心——泛美卫生组织通过协调美洲疾病监测系统支持对抗猪瘟。这个系统正在进行维新，以便帮助展开根除活动。任何额外的帮助必须预先与泛美卫生组织总部商讨。

泛美兽医协会，作为专业组织（源于其参与的兽医协会、学院和兽医社团组成）能够在以下方面支持计划：赞助国家和地区内专家小组的讨论、座谈会和研讨会；将主题融入泛美兽医代表大会之中；赞助区域和半球交流小组；支持和传播国家根除计划；促进专家小组、泛美兽医协会或者大专院校在交流中开展合作；帮助政府意识到计划的重要性。推动政府建立保障措施，以应对疫情的再次暴发；在区域综合性农畜业发展计划的框架内推广地方监测和根除猪瘟的经验；积极参与社区教育，包括参与项目的人员；提高农村协会和牲畜饲养者的敏感性，以便迅速报告疫情；支持认证和专业兽医的组织、培训；当相关规范被忽视时，促进专业组织参与兽医资格认证和暂停认证，从而避免官方兽医和专业团体之间的冲突；鼓励和推广认证的私人兽医参与实践；协调半球范围内对私人兽医的认证规范；促进和协调高级专业培训课程认证，规范专业认证的过程和标准。

二、国家层面的措施

1.研究和流行病学监测。

（1）目的：了解影响疾病表现的因素在空间和时间上的演变，评估引入和传染病原体的风险。

（2）策略：确定、记录、分析所需要的信息和各省、地区疾病情况的流行病学指标。调查、推荐标准抽样方法和生猪养殖数据阐释，从而深入地了解地区和国家的猪瘟流行病学，从控制、根除向无疾病阶段过渡的技术可行性。

（3）目标：每月向中央和地区报告每个国家猪瘟疫情暴发和分布概况；提交一份详细的年度报告，包括影响流行病学情况的活动和风险因素的分析；开展研究，以便确定是否扩大根除区和无疫区，以及各国是否宣布已经达到猪瘟无疫状态。

（4）活动：确定这些国家内每个国家和各个省份所需要的信息的种类和频率；确定和选择每个国家的省份和国际边境地区的流行病学指标；分析每个国家收到和处理的信息；编辑和分析重要的流行病学信息；建立每个国家（包括其省份在内）的月度情况报告；建立年度半球流行病学报告，包括每个国家的情况；进行流行病学研究，描绘田间分离株的致病性；继续目前全球范围的猪瘟形势报告；对建立疾病无疫区进行可行性研究；开展对根除区的研究；进行扩大根除区可行性方面的研究；对猪瘟无疫国家的申报进行可行性研究；维持永久的不同国家屠宰场的抽样系统，根据项目进度决定抽样频率；确定用来喂猪的食物废物的来源；确定用食物废物来喂猪的经营场所。

2.卫生控制。

（1）目的：控制检测到猪瘟病毒的所有情况，根据各个国家为其疾病流行区域制定的策略，采取必要的措施阻止其扩散。

（2）策略：

A 控制区。通过检疫措施控制上报的疑似猪瘟疫情，确诊需要用到流行病学以及临床、解剖病理学和实验室信息。猪瘟疫情暴发的认定标准是某个确定的地方有一例或者多例病毒学确诊病例。

根据每个国家的法律规定条款，运用其操作程序对经营场所进行官方检疫。当情况表明不再存在疾病传播的风险时，解除隔离检疫。

调查感染来源，包括牲畜市场、屠宰场和垃圾处理场。使用规定的并且有质量保证的疫苗进行一场密集的免疫活动。

目标：100%解决疫情，调查疫情来源，定期检查病毒传播风险较高的地方（市场、屠宰场、垃圾场等等）。

B 根除区。一旦暴发疑似猪瘟疫情，就采取检疫措施，当确认生猪患病或接触病原时，将在被授权的屠宰场进行仔细检查并且扑杀处理。经过处理的牲畜，包括其骨骼、血液和内脏，会被进行高温处理，温度高到足以确保根除猪瘟病毒。与此同时，调查经营场所、市场、屠宰场和垃圾堆以确定感染来源和可能的感染传播范围。在根除的最终阶段，扑杀和处理所有染病的猪。

在这个区域，禁止销售和使用猪瘟疫苗。无论基于何种目的，禁止进口来自控制区域的猪。

C 猪瘟无疫区。即使发现一例疑似猪瘟的病例，也要采取检疫手段，在确认疾病后，扑杀所有患病和接触过病原的猪。将被扑杀的猪就地掩埋。只有当疾病风险已经过去时，才能重新在该地进行养殖。如果因为环境原因无法销毁所有猪，那么在根除区使用的程序将会被执行，该区会暂时丧失其无疫状态。还要进行流行病学研究。禁止在无疫区销售和使用猪瘟疫苗。

在无疫区，只能从另一个有正式认证的无疫区进口用于繁殖的猪。禁止从任何其他无疫区进口生猪肉和猪肉产品。

在无疫区，需要建立确保生猪养殖者参与的防治系统，包括要求即时报告任何疑似疫情。建议建立应急团队，以便可以随时召集采取应对措施。

（3）活动：接收、登记和调查疾病报告；控制疾病暴发；定期检查屠宰场、市场和垃圾场；跟踪调查屠宰场、市场和垃圾场的疫病情况，以便确定病毒来源；选择并授权根除区域内的屠宰场处理患病和接触了病原的猪；对要被运送到根除区和无疫区的种猪进行认证；批准将被扑杀的猪运送到根除区的屠宰场。

3.实验室诊断。关于本文描述的一些诊断技术，很可能对于一些国家来说，发展使用所有这些技术的能力可能并不经济。这需要确定可以为各个国家提供一定的诊断服务的区域参考实验室的标准。

（1）目的。全面、准确且快速地诊断所有疑似猪瘟的病例。

（2）策略。坚持使用最有效的技术诊断疾病，并且保证疫苗的质量。

（3）目标。100%分析收到的样本，并且100%评估所使用的疫苗的质量。

（4）活动。至少可以使用以下诊断技术：用于载玻片、组织和细胞培养物的直接免疫荧光技术；间接免疫荧光技术；血清中和；酶联免疫吸附法（ELISA）；基于诊断和质量控制目的，生产足够量的组织培养系PK15；诊断收到的疑似疾病样本；分析常规屠宰场调查样本；分析所采集的血清样本以确定区域和国家是否能够宣布无疫；分析所采集的样本，对要被送往根除区和无疫区的种猪进行认证；运用国际猪瘟参考实验室推荐的技术对国内或者进口疫苗进行质量控制，以确定保护能力，免疫持续时间，在扁桃体中的病毒持续性；生产足够的兔子，用于进行疫苗接种；检测猪对疾病的易感性，以便进行疫苗效力测试；测试疫苗的残留致病性和疫苗的病毒传播性；调查病毒株，用于疫苗生产；调查疫苗病毒在扁桃体中的持续感染和接种疫苗的抗体持续时间。

4.卫生教育。

（1）目的。提高社区对疾病的认识，以增加报告的数量；将项目的活动和目标告知给社区，以便实现合作。

（2）策略。确定社区对猪瘟的认知水平；编制有关项目的信息材料并将其分发到各个流行病学区域。

（3）目标。100%的畜主都要知道在疾病疫情暴发时该采取的卫生措施；在宣布其进入控制区、根除区和无疫区后，将控制区、根除区和无疫区的特征告知养殖户，包括小规模的畜主以及所有与此相关的机构。

（4）活动。进行养殖户访问调查，以确定其对猪瘟以及应当采取的相关防控措施的了解；对参与调查过程的兽医进行合作培训；确定要分发的疾病相关信息材料的内容；促进并参加与疾病和农村社区团体有关的农业机构的讨论组和会议；与在港口、机场和边境口岸任职的警察和海关人员一起参与相关疾病的讨论组和会议。

5.生物统计学分析。

（1）目的。建立和维护一个信息系统，该信息系统能够实现持续了解疾病的演变和项目的发展，并在实现其目标和目的方面取得进展。

（2）策略。利用现有的结构及其通信系统，定期获得相关事项的信息（实现项目目标，完成项目活动；人力和物力资源的使用）；以宣布国家和区域猪瘟无疫为目的，设计和分析访问调查；设计和分析调查问卷，以确定猪畜主对于猪瘟以及相关应对措施的认知水平。

（3）目标。在半球计划开展一年的前六个月期间，建立一个信息系统。

（4）活动。按照所选择的评估指标，确定应当编制的信息；确定汇编和文件编制机制；改编现有的程序手册，以便按照半球计划的要求编辑、处理、分析和发布信息；记录、分析和定期传播半球计划产生的全部信息；编制年度报告，评估半球计划的活动和进展；设计一项调查，用来确定猪畜主的行为；设计一项调查，用来描述根除区的特征；设计一项调查，用来扩大根除区；以国家宣布猪瘟无疫为目的，制定血清学调查设计方案。

6.法律法规。

（1）目标。设计一个适用于半球计划的立法框架，便于解释和综合应用。

（2）目的。在半球计划的第一年，有一个合适的法律框架。

（3）活动。编制现有的规范；考虑到现有的疾病情况，以有适用于半球计划要求的连贯、规范的文本内容为目的，改编和补充上述规范；制定和发布该文本，供项目人员、猪畜主和参与养猪业相关的组织使用；为区域和国家宣布无疫制定解决方案。

7.培训。

（1）目的。为参与半球计划的组织人员履行其职责进行必要的培训。

（2）策略。为兽医进行猪瘟病原学、病理学、诊断和流行病学方面的培训，以及进行半球计划的各个方面、立法现状和应对疾病疫情所要采取的措施方面的培训。为在牲畜交易市场和屠宰场工作的兽医进行培训，培训课程为其与半球计划相关的职责以及半球计划的相关方面。为计划实施参与人员进行以下主题的国际培训课程：诊断、动物健康项目的管理、动物健康项目的经济评估和流行病学分析。

（3）目标。在计划的第1、4、8、12、16和19年分别对所有参与半球计划的兽医进行为期三天的培训；在项目的第一年，对在牲畜交易市场和屠宰场工作的兽医进行两项课程的培训；第一年，每个国家会有两名专业人士接受该疾病诊断、疫苗质量控制和流行病学方面的培训；第二年，每个国家会有一名专业人士接受动物健康项目管理方面的培训。

（4）活动。为官方兽医机构的兽医和在牲畜交易市场、屠宰场工作的兽医进行的课程准备培训材料；在项目的第1、4、8、12和16年举办培训课程；为在牲畜交易市场和屠宰场工作的兽医举办培训课程；利用外国的培训奖学金。

8.行政管理。

（1）目的。建立和维持各个国家正在使用的行政管理程序，使程序化活动容易进行，统筹利用所需的人力、物力和财力。

（2）策略。将项目的操作程序纳入各个国家的官方兽医服务中；根据区域或者项目活动，对每年管理基金进行分配，同时发现出现的管理问题。

（3）目标。为各个项目阶段和支持半球计划提供所需的人力、物力和财力。

（4）活动。评估参与计划的各级人员的职责；每年记录各个项目活动的年度资源需求；获得成本；通过官方程序获得设备和资源；编制设备目录，确定需求；更换需要的设备；按照需求，制定时间进度计划，并将其与系统规划相结合。

附录2 猪瘟诊断、生物技术以及建立参考实验室（附件1、3略）

从遗传学角度和抗原角度来说，猪瘟与牛病毒性腹泻和边界病关系密切，和牛病毒性腹泻及边界病的病原体一样，猪瘟的病原体是黄病毒科瘟病毒属的一种小核糖核酸病毒。正因为这三种病毒之间关系密切，所以需要这三种病毒的鉴别诊断方法。猪瘟的症状和病变各种各样，而且与猪的其他出血性疾病（非洲猪瘟、巴氏杆菌病、沙门氏菌病、丹毒等等）的相似性使得临床诊断不足以确诊疾病，要确诊该种疾病，就必须进行实验室诊断。

实验室诊断的价值和类型，由于上述原因，所有计划活动都需要猪瘟实验室诊断。值得再次强调的是瘟病毒属之间具有非常高的基因和抗原相似性，一些毒株的相似性可以达到80%。瘟病毒属一般不是致细胞病变的，导致一些被污染组织培养系有可能被用于病毒分离。

该疾病各种相关的实验室诊断技术包括：血清学诊断；病毒学诊断；分子诊断；组织病理学诊断。

1.血清学诊断。血清学诊断技术的主要应用和优势是：证明无疫；能够分析大量样本；评估哨兵动物；检查动物，进行疫苗测试。

主要的局限性是：感染后抗体的出现可能要花21到30天时间，这限制了其诊断疫情的价值；与其他瘟病毒可能有交叉反应。

建议进行与计划相关研究的技术有：免疫过氧化物酶中和试验；免疫荧光中和试验；间接和竞争酶联免疫吸附试验。

2.病毒学和分子诊断。主要的应用是：确诊新区域的该种疾病；诊断病毒携带猪；快速诊断。

推荐的技术是：组织培养细胞系PK15和/或SK6中的病毒分离；运用多克隆抗体的直接免疫萤光标定；反转录聚合酶链式反应。

根据计划，疫情的确诊需要运用两种互补的诊断技术进行阳性诊断。

3.解剖病理学诊断。应用和局限性：急性猪瘟病变没有特殊病征，类似于造成出血性病变的其他败血症疾病，例如非洲猪瘟、丹毒、沙门氏菌病等等。急性猪瘟的病变通常是扁桃体坏死、脾梗塞以及淋巴结、肾、膀胱、喉头和胃肠道及呼吸道系统黏膜出血。

只有一个解剖系统可能会因为受到继发性细菌感染的强烈影响发生慢性病变。可能会发现坏死性肠炎，伴随回盲瓣轻度溃疡和肋骨软骨关节肿大。

从组织结构上来说，大部分牲畜会表现出非脓性脑膜脑炎。在固定组织（尤其是扁桃体、淋巴结和脾脏）上，可以运用单克隆抗体和商用免疫过氧化物酶试剂盒证明病毒性抗原。

鉴别诊断。必须首先鉴别诊断非洲猪瘟，尤其是在受到过威胁的国家，然后鉴别诊断其他猪出血性疾病，例如：沙门氏菌病；丹毒；巴氏杆菌病等等。也因为瘟病毒属的关系非常密切，需要针对下列疾病进行鉴别诊断：牛病毒性腹泻（BVD）；边界病。

样本的选择和提交给实验室。对于执行计划而言，一件非常重要的事情是，不仅送交实验室的样本要正确无误，样本也要处于良好的状态。样本状态不好的话，就无法得出准确的诊断。

对于猪瘟来说，要提交的样本有：血液（加肝素）；COAGULATED BLOOD [SERUM]凝固的血（血清）；扁桃体；肠系膜神经节；脾脏；回肠。

必须运用尽可能最可靠和最快速的方法将样本送达实验室，绝对不能将其置于室温环境下。

在从牲畜身上采集到样本之后，必须准确地对样本进行标记，标记要牢固可靠（在器皿上缠一圈胶布或者贴标签），而且必须将其置于4℃的温度环境下保存。必须用单独的容器盛放各个牲畜的样本，密封保存。

如果在采集样本后不到72小时就要进行实验室检测，那么最好将样本置于4℃的温度环境下保存，而不是将其冷冻。