犬抗凝血灭鼠药中毒模型的建立及犬新鲜冰冻血浆治疗效果分析

杜志国,王建琳,黄 凯,王 森,王冬冬,高晓琦,王 艺,黄 震,庄妤冰,耿文静,马志亮,郭 颖,尹燕博

（1.青岛农业大学动物医学院 ,山东 青岛 266109;2.青岛博隆实验动物有限公司,山东 青岛 266200;3.北京中科拜克生物技术有限公司,北京 海淀 100038;4.美联众合动物医院转诊中心,北京 朝阳 100101;5.沈阳军区总医院输血科,辽宁 沈阳 110016）

抗凝血灭鼠药是犬摄入的最常见的有毒物质[1],其引起的凝血问题是小动物急救常见的症状之一[2]。此类产品的作用是通过抑制肝脏中的维生素K环氧化物还原酶的活性,影响维生素K的合成,从而导致维生素K依赖性凝血因子II,VII,IX,X合成减少,引发凝血功能障碍,抗凝血灭鼠药不能阻止已存在的凝血因子发挥作用,只有当体内的维生素K依赖性凝血因子耗竭后（凝血因子II,VII,IX,X在犬体内的半衰期分别为41、6.2、13.9 h、和16.5 h）,才导致凝血功能障碍,引起出血[3-6]。抗凝血灭鼠药对体外输入的凝血因子无破坏作用,体外输入凝血因子（冰冻血浆、新鲜冰冻血浆、新鲜全血）可迅速纠正凝血功能障碍[6]。本试验通过建立犬抗凝血灭鼠药中毒模型,利用犬新鲜冰冻血浆作为辅助治疗手段与维生素K1治疗方法相对比,观察两种治疗方式的效果,为治疗抗凝血灭鼠药中毒提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 12～15月龄健康比格犬16只,公母均有,体重9～11kg,均由青岛博隆实验动物有限公司提供。

1.2 主要仪器与试剂 TG16W医用离心机,长沙平凡仪器仪表有限公司;80-2电动离心机、HH-2型数显恒温水浴锅,上海梅香仪器有限公司;Junior Vet 5血球分析仪、SP-4430自动干式生化分析仪,兰桥康泰医学科技有限公司;犬新鲜冰冻血浆,青岛博隆实验动物有限公司;抗凝血灭鼠药,商丘市大卫化工厂;凝血酶原时间（PT）测试盒、凝血酶时间（TT）测试盒、活化部分凝血活酶时间（APTT）测试盒（白陶土）、纤维蛋白原（FIB）测试盒,南京建成生物工程研究所;

1.3 犬抗凝血灭鼠药中毒模型的建立 根据文献报道的犬中毒剂量[7-8],将抗凝血灭鼠药与犬粮拌匀,剂量为20mg/kg·bw,随机抽取12只犬进行单独投喂,余下4只为空白对照。

1.4 身体指标检测 发病时检测犬体温、血常规、血生化指标、凝血4项,治疗期间每天检测体温,每隔1 d检测血常规、凝血四项,每隔3 d检测血生化指标。其中检测血常规、血生化指标的血样利用EDTA-K2抗凝剂,检测凝血4项的血样利用柠檬酸三钠抗凝剂。

1.5 治疗分组与方案 将治疗组分为维生素K1组、血浆治疗1组、血浆治疗2组3个治疗组,将发病犬随机分配到3个组中。3组共同的治疗方案为:呋塞米注射液（2 mL/d体重,静脉注射）,连续3 d,维生素K1注射液（2mg/kg/d体重,肌肉注射）,直至治愈。3个组间治疗方案的不同点为:血浆治疗1组使用犬新鲜冰冻血浆5 mL/kg/d·bw,每天静脉滴注,进行治疗,连续2 d;血浆治疗2组使用犬新鲜冰冻血浆5 mL/kg·bw,每天静脉滴注）、进行治疗,连续4 d;维生素K1组作为对照组。

1.6 数据统计分析 将检测数据导入SPSS22.0统计软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 发病时间及临床症状 从投喂后第1天开始计数,出现症状的时间为4-11 d（中位数6.5 d,平均6.5 d）,临床症状表现为精神沉郁（6/12）,不同部位出血（9/12）,可视黏膜颜色不同程度发白（12/12）,皮下积液（5/12）,呼吸困难（3/12）,体温升高（5/12）。

2.2 发病时生理、生化指标及凝血四项 血红蛋白、红细胞、红细胞压积均出现不同程度降低（12/12）,白细胞升高（5/12）,血小板（PLT）含量降低（6/12）,总蛋白（T-Pro）含量降低（8/12）,白蛋白（ALB）含量降低（10/12）,PT 延长（12/12）,APTT 延长（12/12）,TT 延长（2/12）,FIB 含量增高（9/12）（表1）。

表1 发病时凝血4项

2.3 治疗效果及治疗过程中身体指标监测 治疗过程中均出现WBC值升高现象,预防性肌肉注射头孢类药物并不能很好的抑制炎症的发生。静脉推注喹诺酮类药物或盐酸林可霉素注射液和硫酸庆大霉素注射液联合用药效果较好,WBC值逐渐下降,并趋于正常;在治疗期间3个治疗组的体温无明显波动;HGB、RBC、HCT值均呈上升趋势,但恢复较慢,治疗8 d后达到正常值范围,但仍然偏低;WBC值于治疗第6天下降,第8天恢复正常;PLT、T-Pro、Alb值均在第4天恢复正常范围,以上指标3组间数值差异不显著。凝血4项中PT、APTT值均在治疗第2天明显降低,而后缓慢恢复为正常值范围,与维生素K1组相比,血浆治疗1组与血浆治疗2组PT值在前6天中降低范围较大,APTT值在第2天降低范围较大,基本恢复正常值范围,血浆治疗1组与血浆治疗2组间变化幅度并不明显,TT值并无明显变化,FIB含量由高变低（表2）。3组疗程分别为维生素K1组8～12 d（平均10 d）,血浆治疗1 组6 ～10 d（平均8 d）,血浆治疗2组6～10 d（平均8 d）。血浆治疗组与维生素K1组治疗天数差异显著（P＜0.05,F=0,df=10）。

表2 凝血四项变化情况

2.4 复查 分别于治疗结束后7天、14天进行复查,检测 PT、APTT。第 7天复发率为 16.7%（2/12）,剩余10只第14天复发率为0%。

3 讨论

本次试验发现抗凝血灭鼠药中毒的临床症状比较多样化,主要以不同部位出血或积液,可视黏膜颜色不同程度发白为主要特征。由维生素K拮抗作用而继发的凝血异常,PT和APTT均延长,尤其是以PT延长为主要症状[6][9-10]。其他原因引起的凝血病,如肿瘤引起的DIC,中暑,败血症,全身炎症反应综合征或肝功能衰竭,会使PT和APTT的延长程度相似,而不是抗凝血灭鼠药导致的PT延长程度大而APTT延长程度小的现象[11-12]。所以如果PT、APTT都延长,并且PT延长大于APTT延长时,应考虑抗凝血灭鼠药中毒。

抗凝血灭鼠药中毒的治疗主要围绕3个核心原则:（1）替换丢失的凝血因子以停止持续出血;（2）提供维生素K1使患者的肝脏能合成自身的凝血因子;（3）提供适当的支持治疗和休息[5]。犬新鲜冰冻血浆作为辅助治疗手段,取得了良好的疗效。止血迅速,疗程缩短,凝血因子含量恢复更快,对于皮下积液有很好的去除效果。如果犬贫血并不严重,考虑到输全血的风险,犬新鲜冰冻血浆是一个较好的治疗选择。2 d与4 d两种疗程的疗效差别并不显著,推荐2 d的疗程作为治疗手段。

何时停用维生素K1,要根据检查结果来判定,并进行复查,对复发的犬可以进行一个为期4 d的治疗,均可治愈,而后继续复查,直至痊愈。犬对抗凝血灭鼠药抵抗能力不同,治疗时间亦不尽相同,切不可盲目停药。