参蒜混合液对高脂膳食大鼠炎症因子的影响

姚 璐,杜瑞雪,2,杜 鹃,周 月,李善姬

（1.吉林医药学院公共卫生学院,吉林 吉林 132013;2.延边大学公共卫生系,吉林 延吉 133002;3.吉林省吉林市龙潭区疾病预防控制中心,吉林 吉林 132021）

肥胖已然成为世界性的健康难题,不仅如此,肥胖还是诱发糖尿病、心血管疾病和癌症的重要因素[1]。研究发现,肥胖导致脂肪细胞因缺氧而发生慢性低度炎症反应,这种炎症反应会诱发机体的肝脏、脂肪和肌肉等多个组织器官对胰岛素产生耐抵抗,并最终导致2型糖尿病的发生[3]。增加机体内抗炎因子的数量或是降低促炎因子的表达也许可以作为预防肥胖和2型糖尿病等代谢性疾病的一种有效手段[4]。最新的文献报道证实,双醋瑞因、辛伐他汀等药物通过降低炎症因子来治疗2型糖尿病[5-6]。由于化学药物具有细胞毒性,会诱发机体产生不良反应,介于这些缺陷的存在,使得化学药物用于预防2型糖尿病具有局限性。因此,研发能够预防和改善慢性低度炎症反应的保健食品对预防肥胖相关2型糖尿病就有着非常重要的意义。本试验通过建立高脂膳食肥胖大鼠动物模型,研究不同配比的黑参黑蒜混合液对高脂膳食引起的慢性

低度炎症反应具有预防作用,为预防肥胖及其相关并发症提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 60只健康成年Wistar雌鼠,体重250 g左右。由吉林医药学院动物实验中心提供。饲养于22℃ ±2℃,湿度50% ±5%。

1.2 试验饲料高脂肪饲料配方 蛋黄粉10%、猪油10%、胆固醇1%、牛胆盐0.2%、基础饲料78.8%。

1.3 动物分组 将60只雌鼠在试验环境下适应性喂养3 d后,按体重随机分为5组,即空白对照组、高脂模型组、高脂A给药组、高脂B给药组和高脂C给药组,连续喂养30 d。空白对照组给予普通饲料,其他各组给予高脂饲料。空白对照组和高脂模型组每天灌胃生理盐水,高脂给药组给予不同浓度参蒜混合液灌胃,A给药组:黑参∶黑蒜=4∶1;B给药组:黑参∶黑蒜=1∶1;C给药组:黑参∶黑蒜=1∶4。连续灌胃30 d后,大鼠禁食不禁水12 h,取腹主动脉血分离血清,采用 ELISA法测定（hs-CRP）、白细胞介素 -6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。

1.4 黑参黑蒜提取液的制备 将700 g新鲜大蒜洗净后放入发酵罐中蒸30 h,制得黑蒜。向发酵罐中加入蒸馏水煮18 h,制作成2 200 m黑蒜提取液,用旋转蒸发仪浓缩至375 mL。取五年参500 g洗净后放入发酵罐中蒸30 h,制得黑参。向发酵罐中加入蒸馏水煮18 h,得黑参液2 700 mL,用旋转蒸发仪浓缩至400 mL。分别用高压蒸汽灭菌锅消毒灭菌,冷藏备用。

1.5 试剂胆固醇、牛胆盐、蛋黄粉（郑州龙晨食品添加剂有限公司） IL-6酶联免疫试剂盒;TNF-α酶联免疫试剂盒;hs-CRP酶联免疫试剂盒,购自上海岚派生物科技有限公司;按照试剂盒检测方法测定,发酵罐（韩国）。

1.6 数据处理 数据统计分析采用Excel和SPSS20.0软件。各组平均值比较用单因素方差分析,各组之间的两两比较用最小显著差异法（LSD）检测差异显著性。显著性水准为P＜0.05。所有数据均以均值±标准差（¯x±s）表示。

2 结果

2.1 高脂膳食肥胖大鼠模型的构建 试验结果表明,与普通对照组相比,高脂膳食会引起大鼠的体重明显升高,并导致血清中hs-CRP、IL-6和TNF-α等促炎因子的表达水平明显增加,试验说明给予大鼠高脂膳食构建高脂膳食肥胖大鼠模型成功,并且高脂膳食肥胖大鼠伴随有慢性低度炎症反应。结果见表1。

2.2 参蒜混合液对高脂膳食肥胖大鼠体重和炎症因子的影响 试验结果表明,与高脂模型组相比,3个给药组对高脂膳食大鼠的体重均没有明显作用。此外,A和B给药组对高脂膳食肥胖大鼠血清中IL-6、TNF-α和hs-CRP的含量变化没有明显作用。但是,C给药组中大鼠血清中IL-6、TNF-α和hs-CRP的含量均显著降低（P＜0.05）。结果见表2。

表1 高脂膳食对大鼠体重和炎症因子的影响（n=12,¯x±s）

表2 参蒜混合液对高脂大鼠体重和炎症因子的影响（n=12,¯x±s）

3 讨论

国内外的诸多学者都认为促炎因子介导的慢性低度免疫炎症是导致2型糖尿病发生的重要原因,即2型糖尿病（T2DM）的“炎症学说”[14]。Leinonen[15]等发现,T2DM患者血清中IL-6和CRP等促炎介质比非糖尿病患者要高,T2DM患者处于慢性低度炎症反应状态。流行病学的研究也证实,胰岛素抵抗的发生伴随有慢性低度的炎症反应,并且促炎因子可以通过多条信号转导通路直接或间接的引起胰岛素抵抗[16]。研究表明,肥胖会引起脂肪细胞肥大,脂肪组织既是储存能量的器官,也是机体内分泌系统的重要组成部分,肥胖会引起脂肪组织发生巨噬细胞浸润,从而引发慢性低度的炎症反应,并引起胰岛素耐受[7]。为了研究参蒜混合液对慢性低度炎症反应的抑制作用,我们通过成功构建高脂膳食肥胖大鼠炎症反应模型,采用不同的参蒜配比,检测参蒜混合液对高脂膳食肥胖大鼠炎症反应的抑制作用。

黑参是鲜人参经反复蒸制干燥而成的炮制品,炮制过程中的加热处理能够提高人参的自由基清除能力,因此黑参相比于白参、红参具有更好的抗氧化作用[10-13]。药理作用与生晒参药理作用相似。Kim等研究发现,黑参提取物有比较多的生物活性,与传统的白参和红参相比,黑参更具抗氧化活性[18]。黑蒜是由新鲜生蒜在高温高湿的环境下,不添加任何添加剂自然发酵而成的。在保留生大蒜原有成分的基础上,黑蒜的抗氧化、抗酸化、降血脂作用较白蒜更强[7-9][19]。本试验发现,3个参蒜混合液给药组与高脂膳食模型组相比,A和B给药组抑制炎症反应的效果并不显著,而C给药组的作用效果最为显著,表明不同配比的参蒜混合液会影响其抑制炎症反应的作用强弱,暗示C给药组中的参蒜混合液配比是最适宜的配比。试验结果暗示,参蒜混合液可以通过抑制炎症反应预防肥胖引起的胰岛素耐受等并发症的发生。本试验为参蒜混合液开发成为功能性食品用以预防肥胖引起的慢性低度炎症反应所导致的胰岛素耐受等慢性疾病的发生提供了理论依据。