从侧蒿二氯甲烷部分分离纯化活性物质

童杰

摘要：蒿属植物大多数含有黄酮、生物碱、有机酸和挥发油，具有很高的药用价值，多为中医药及民间常用药材[1]。本文对蒿属植物中的侧蒿用有机溶剂提取得到浸膏，然后对二氯甲烷萃取部位进行分离、纯化，利用柱层析、高效液相等方法制备出单体化合物，最后运用1H NMR、13C NMR等波谱学方法鉴定化合物的结构

关键词：侧蒿；二氯甲烷部位；分离纯化；化学成分

1、前言

蒿属（Artemisia）植物属于菊科（Compositae）多为一、二年生或多年生草本植物，少数为灌木或半灌木，并且大多伴有浓烈的挥发性气味[2]。蒿属植物大多数含有黄酮、生物碱、有机酸和挥发油，因而具有很高的药用价值，多为中医药及民间常用药材[3]。

1.2蒿属植物的活性物质

蒿属植物的活性物质主要有：黄酮、生物碱、有机酸和挥发油。黄酮类化合物广泛存在于天然植物中，为植物体多酚类代谢物，它是药用植物的主要药理活性之一[4]；生物碱自然界中广泛存在的一类含氮碱性有机化合物，大多具有显著的生物活性，是许多药用植物的重要有效成分[6]；挥发油是植物体内的次生代谢产物，是由一系列相对分子质量较小的化合物组成，大多数具有芳香性气味，易挥发；有机酸是指广泛存在于植物的根、茎、叶特别是果实中的具有酸性的有机化合物。有机酸具有抑菌、抗菌作用，抑菌效果好，且具有绿色环保的特点，其应用前景非常广阔[10]。

本次实验研究对象为侧蒿，侧蒿，菊科，秦岭与大巴山地区特有种[14]。多生长在海拔1000-2300米地区林下、林缘、山谷，坡地及河边等[10]。通过运用有机物萃取、柱层析、薄层色谱、高效液相等方法对侧蒿提取物进行分离、提纯，直到得到单体化合物，最后运用1H NMR、13C NMR等波谱学方法鉴定化合物的结构

2、实验部分

2.1材料

甲醇、乙腈、四氢呋喃（HPLC级试剂），上海星可高纯溶剂有限公司；甲醇、二氯甲烷、无水乙醇、石油醚、丙酮、乙酸乙酯和浓硫酸（分析纯试剂），国药集团化学试剂有限公司；氘代氯仿（光谱级试剂），美国剑桥同位素实验室公司；实验室用水为Milli-Q Integral 5型纯水仪生产的超纯水；CHP20/P120 MCI树脂均为日本三菱化学公司产品；

2.2仪器

1260型分析兼半制备型高效液相色谱仪，美国安捷伦公司生产；SunFire C18 5um 4.6*250 mm分析型色谱柱，美国沃特世公司生产；SunFire C18 5um 19*250mm制备型色谱柱，美国沃特世公司生产；Millipore Integral 5纯水仪，德国默克密理博公司生产；R-210型旋转蒸发仪（配Vac V-700无油真空隔膜泵和V-850真空控制器），瑞士布琪公司生产；EL204型电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司生产；DLSB-5/25型低温冷却液循环泵，河南巩义市予华仪器。

2.3实验方法

2.3.1材料的预处理

将采摘好的侧蒿样品整株先用剪刀将其剪成3-5cm的小段，分批放入高速多功能粉碎机中粉碎，每次粉碎时间保持在10mim左右。粉碎后称重得侧蒿粉末5.70kg。

2.3.2萃取分液

用95%乙醇将侧蒿粉末进行渗漉法提取，将侧蒿浸液转移到旋蒸瓶中，水浴温度控制在40℃左右，旋干称重得到0.44kg浸膏。按溶剂极性的大小，先后用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取浸膏。萃取完全后得到的提取物质量为：石油醚：220g、二氯甲烷33.78g、乙酸乙酯61.22g、正丁醇29.60g、水相：93.17g。

2.3.2MCI柱色谱

取二氯甲烷部分，经薄层色谱分析，样品含较多杂质，且样品为深绿色，含较多色素，故采用CHP20/P120 MCI树脂进行脱色粗分离。样品约5g，取CHP20/P120 MCI树脂7.5mL进行拌样，200mL填料装柱，依次用20%、40%、60%、80%、90%、100%甲醇水溶液进行冲洗，得到20%甲醇流份0.5L（标记为A），40%甲醇流份0.5L（标记为B），60%甲醇流份0.5L（标记为C），80%甲醇流份6.3L（标记为D），90%甲醇流份8.2L（标记为E），100%甲醇流份18.6L（標记为F），旋蒸后转移至西林瓶，发现C有黄色针状晶体析出。

2.3.3凝胶柱色谱

为了进一步分离样品，采用凝胶柱色谱的方法进一步分离。凝胶柱色谱是一种按分子量大小，将物质分开的方法。中等分子后流出，分子最小的最后流出。

将流速控制在7-12s/滴，用锥形瓶接收溶剂，当样品离凝胶柱底部20cm左右后，换用西林瓶接收溶剂，每瓶接收量不超过1/3，并标号为“1、2、3……180”，溶剂挥发后，发现114-138有晶体析出，晶体为淡黄色。

3.制备单体

经MCI柱色谱、凝胶柱色谱以及高效液相色谱仪分离，C中可分离出一个较纯的单体，制备单体时采用安捷伦1260型分析兼半制备型高效液相色谱仪，制备条件为：反向柱，柱温箱温度为35℃，流速为4.7mL/min，流动相体系为乙腈和超纯水，每次进样量为100uL，乙腈浓度为5%，出峰时间tR=90min，将出峰时间流出的溶剂接收到试管里，将溶剂蒸干，发现试管中有浅黄色针状晶体，收集试管中的制备的物质，称重有15.2mg。标记为TJ-1

4.结构鉴定

将制备的TJ-1进行核磁分析，结果如下：1H-NMR （CD3OD） δ 6.23 （1H， d， J = 9.42 Hz， H-3）， 7.89 （1H， d， J = 9.42 Hz， H-4）， 6.82 （1H， s， H-8）， 7.14 （1H， s， H-5）， 3.91 （3H， s， OCH3）， 8.10 （1H， s， OH）； 13C-NMR （CD3OD） δ 163.00 （CO）， 150.00 （C-9）， 149.00 （C-7）， 146.00（C-6）， 144.91 （C-4）， 111.15 （C-3）， 110.00 （C-10）， 108.63 （C-5）， 102.57 （C-8）， 55.51 （OCH3）；以上数据与文献[11]对照，鉴定化合物为东莨菪素 （Scopoletin），属于香豆素类化合物。

单体TJ-1结构如下：

参考文献：

[1]宋敏丽.山西历山国家自然保护区蒿属药用植物资源的研究[J].农产品加工（创新版），2011（10）：45-48.

[2]Yue Y X，Shi B L，Zhang P F，et a1.Recent advance in study on biological action of Artemisia Linn plants in animal produc— tion.Chinese Journal of Animal Science，2015，51（15）：79—82.

[3]陈林，宋乃平，王磊等.基于文献计量分析的蒿属植物研究进展[J].草业学报，2017，（12）：223～235.

[4]谭仁祥.植物成分分析[M].北京科学出版社，2002：486-502.

[5]祝寅淏，王帅，李瑶，陈宗耀，范红艳.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].吉林医药学院学报，2018，39（03）：219-223.

[6]徐小龙，邹建国，刘燕燕，彭海龙，吴琴芬.药用生物碱的应用与分离纯化技术[J].食品科学，2009，30（15）：238-240.