四种母种培养基培养复壮杏鲍菇菌种效果比较

李巨燕 王秀芹 李巨臣

（1内蒙古大兴安岭林业学校，内蒙古牙克石022150；2内蒙古大兴安岭林业科学技术研究所，内蒙古牙克石022150）

杏鲍菇（Pleurotus eryngii）是层菌纲伞菌目侧耳科真菌，别名为刺芹侧耳。

目前食用菌栽培户所用的菌种购自菌种厂或者科研单位，为了保证足够的接种量和避免意外情况发生，往往购置母种量多于实际用种量，且多余菌种保存再用，而长期保存的菌种会出现退化现象。因此长期保存的菌种重新投入生产前，必须进行提纯复壮，才能保证菌种安全可靠。复壮培养基的选择是菌种复壮关键。为此笔者进行了杏鲍菇母种提纯复壮培养基比较试验，以期筛选出最适合杏鲍菇菌种复壮的培养基。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试菌株

杏鲍菇A-2，由辽宁省微生物研究院提供，经恒温冰箱保藏两年，其间未进行转管。

1.1.2 试验原材料

配制培养基所需原料马铃薯、玉米粒、新鲜杏鲍菇，均由市场购买。锯木屑为内蒙古大兴安岭林区的白桦等阔叶树种，麸皮来自牙克石市胜利面粉厂。其他如葡萄糖、磷酸二氢钾、琼脂等为分析纯。

1.2 培养基配方

①PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂18～20 g，加水1000 mL；②综合马铃薯培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾3 g，维生素B110 mg，琼脂18～20 g，加水1000 mL；③马铃薯+玉米培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，新鲜玉米粒30～40 g，琼脂18～20 g，加水1000 mL；④鲜菇培养基：新鲜杏鲍菇200 g，葡萄糖20 g，琼脂16～18 g，加水1000 mL。培养料pH与当地水质的pH一致，不做调整。

锯木屑培养基配方：风干阔叶锯木屑78%，新鲜麸皮20%，葡萄糖1%，石膏1%。料含水量125%～150%。

1.3 试验方法

1.3.1 培养基配制方法

为保证培养基的质量，PDA培养基配制同常规，其他培养基参考PDA配制方法略有变化，具体如下：

马铃薯+玉米培养基需将新鲜玉米粒与马铃薯同时煮沸20～30 min，过滤取滤液。鲜菇培养基制作时将购买的新鲜杏鲍菇切块呈黄豆粒大小，称取200 g放入容器中，加水1000 mL，加热煮沸15～30 min，过滤，取滤液，加水补足1000 mL。在煮汁中加入琼脂，小火加热，不断用玻璃棒搅拌，至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖稍煮几分钟，搅拌至溶化，防止糊底或溢出。分装试管、灭菌、摆斜面，无菌检查按常规方法。

锯木屑培养基按常规方法配置，注意加水以后要静置0.5～1 h，以保证锯木屑吃透水分。装瓶（250 mL），封口膜封口，于125℃高压蒸汽灭菌2 h，利用高压锅余热焖8 h以上，出锅备用。灭菌后的锯木屑培养基空白培养一周，观察是否有菌落产生，用以检查培养基灭菌是否彻底。

1.3.2 接种与培养

将保存两年的杏鲍菇母种试管外壁用75%酒精消毒，无菌水冲洗数次。接种时注意试管口用燃烧的酒精灯火焰封口。将母种切割成黄豆粒大小的菌块，分别移接到装有供试培养基试管中，每种培养基接种量不少于10支试管。

接种后的试管放置在室温22～25℃，空气相对湿度30%条件下无菌培养。观察菌丝生长状态，直至长满试管。

1.3.3 转接二级种并观察现蕾情况

将上述无菌培养的长满试管（一般16 d）的杏鲍菇母种分别接种在瓶装锯木屑培养基上，按照常规方法培养二级菌种。每种母种接种量不少于20瓶。观察不同母种菌丝吃料及生长情况。

菌丝满瓶后观察菌丝能否正常分化菇蕾，从而判断菌丝的活力，进而决定该菌种是否可以用于生产。正常现蕾的二级菌种即可投入生产。

2 结果与分析

2.1 供试培养基上杏鲍菇母种生长情况

培养结果见表1、图1-图3。

表1 供试培养基上杏鲍菇菌丝生长情况

图1 供试培养基接种2 d后菌种萌发情况

图2 供试培养基上培养8 d菌种生长情况

图3 供试培养基上培养13 d菌种生长情况

接种培养2 d后菌种块开始萌发，其中马铃薯+玉米培养基上菌块部位出现绒毛状菌丝最明显，鲜菇培养基其次，综合马铃薯培养基上不明显，PDA培养基上菌种未萌发（图1）。菌种萌发早，抢先占领培养基表面，可降低杂菌污染率。由图2可见，培养8 d，以玉米培养基上菌丝生长最为健壮，已生长至斜面培养基长度的1/2，鲜菇培养基上菌丝其次，PDA培养基上菌丝纤细稀疏，爬壁力弱；培养13 d（图3），菌丝都基本长满斜面，但PDA培养基、综合马铃薯培养基上菌丝长而纤细，鲜菇培养基和马铃薯+玉米培养基上菌丝生长健壮，爬壁能力强。

2.2 二级种转接培养及现蕾观察结果

不同母种培养基培养杏鲍菇母种，转接锯木屑培养基。观察结果，培养3～5 d，综合马铃薯培养基的母种转接二级种全部被污染，说明该母种培养基上培养的菌种生长势弱；PDA培养基培养的母种转接后污染率达到60%以上，且菌丝吃料速度较慢，说明菌种活力弱；马铃薯+玉米培养基及鲜菇培养基培养的母种，转接后菌丝生长基本一致，吃料速度没有明显区别，且菌丝白、浓、密、粗壮，污染率低（分别为10%和5%），分别于50 d、48 d开始现蕾，而PDA培养母种转接50 d以后才现蕾。

3 小结

试验结果表明，四种供试母种培养基对杏鲍菇母种的复壮效果以马铃薯+玉米、鲜菇（杏鲍菇）培养基为好，复壮菌种菌丝生长最为健壮。建议对杏鲍菇菌种复壮时采用鲜菇（杏鲍菇）培养基或马铃薯+玉米培养基。