力克菲隆抗炎镇痛实验研究

刘潇然，李凤新，王巍巍，孙振国，朱 峰，王焕群

非甾体抗炎药是目前广泛应用于治疗急性和慢性炎症及疼痛的药物.传统的非甾体抗炎药和选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂都主要通过抑制环氧化酶（COX）减少炎症过程产生的前列腺素发挥作用［1］.非甾体抗炎药普遍应用于牙痛、腰背疼痛、外伤或手术后疼痛以及癌症疼痛的治疗，并且研究表明，非甾体抗炎药物不存在依赖性的特点.经过多年对此类药物的研究开发出很多新药.非甾体抗炎药是目前全球应用广泛的一类消炎镇痛类药物.

力克菲隆，化学名为6-（4-氯苯基）-2，2-二甲基-7-苯基-2，3-二氢-1H-吡咯里嗪-5-乙酸，代号ML3000，是首个环氧合酶／脂氧合酶（COX／LOX）双靶点抑制剂，具有双重抗炎作用，是新一代的非甾体抗炎药［2］，与传统的抗炎药相比，力克菲隆对胃肠刺激较小，耐受力更好.

本研究通过分别采用小鼠扭体法、热板法、甩尾法研究力克菲隆的镇痛作用；采用耳肿胀法、足肿胀法以及棉球肉芽肿法研究其抗炎作用.本研究为阐明力克菲隆药理作用机制提供实验依据.

1 材料与方法

1.1 药物及试剂

受试药：力克菲隆，化学名6-（4-氯苯基）-2，2-二甲基-7-苯基-2，3-二氢-1H-吡咯里嗪-5-乙酸，由本研究院合成室提供.阳性对照药物：布洛芬缓释片，西南药业股份有限公司，生产批号101208；对乙酰氨基酚缓释片，成都恒瑞制药有限公司生产，生产批号H19990360.致痛剂，0.6%冰醋酸.致炎剂二甲苯，分析纯，长春市化学试剂厂，生产批号930617.致炎剂，自制10%鸡蛋清溶液.

1.2 仪器

GJ-8402型热板镇痛仪，宁海白石电子医药仪器厂；SW200-尾痛仪，成都泰盟科技有限公司；打孔器，JE1002电子天平，上海浦春计量仪器有限公司；PV-200足趾容积测量仪，成都泰盟科技有限公司.

2 方法

2.1 扭体法［3］

动物：昆明种小鼠，18～22g，雌雄各半.购于长春生物制品研究所.合格证号：SCXK（吉）2006-0001.取上述小鼠，随机分为5组，每组10只.阳性药组给予布洛芬缓释片100mg/kg，受试药高、中、低三个剂量组分别给予力克菲隆100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg，药 品 均 用 0.5%CMC-Na配制混悬液.连续灌胃给药3天，末次给药后1h，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1ml/10g，记录注射致痛剂20min内小鼠扭体次数.比较组间差异.

2.2 热板法［3］

取昆明雌性小鼠50只，体重18～22g，购于长春生物制品研究所.合格证号：SCXK（吉）2006-0001.随机分为5组，每组10只.将热板镇痛仪调节至55℃，加热后作为热刺激，记录小鼠自投入热板至舔后足的时间作为该鼠痛阈值.给药前测定每只小鼠痛阈2次，5s≤x≤30s为合格.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混悬液，高剂量100mg/kg、中剂量50mg/kg、低剂量25mg/kg，阳性药给予布洛芬100mg/kg，连续灌胃给药3天，对照组给予同体积溶媒20ml/kg，末次给药0.5h后开始测定每只鼠痛阈，1h，2h，3h各测一次，痛阈值超过60s按60s计.

2.3 甩尾法［3］

取大鼠50只，体重150～180g，雌雄各半，吉大白求恩医学院实验动物中心，SCXK-（吉）2008-0005.随机分为5组，每组10只.将大鼠置于固定筒内，开始测定每只鼠痛阈，痛阈少于3s或大于10s的大鼠弃去不用.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混悬液，高剂量200mg/kg、中剂量100mg/kg、低剂量50mg/kg，阳性药给予对乙酰氨基酚200mg/kg，连续灌胃给药3天，对照组给予同体积溶媒20ml/kg，末次给药1h后开始测定每只鼠痛阈，1h，2h，3h，4h各测一次，痛阈值超过12.5s按12.5s计.

2.4 小鼠耳肿胀法［3］

取雄性小鼠50只，25～30g，购于长春生物制品研究所.合格证号：SCXK（吉）2006-0001.随机分为5组，每组10只.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混悬液，高剂量100mg/kg、中剂量50mg/kg、低剂量25mg/kg，阳性药给予布洛芬100mg/kg，连续灌胃给药3天，对照组给予同体积溶媒20ml/kg，末次给药0.5h后，小鼠右耳涂二甲苯0.02ml/只，4h后脱臼处死动物，剪下两耳，用9mm打孔器在相同部位打下两个耳片，称重，以两耳重之差作为肿胀度.

2.5 大鼠足肿胀法［3］

取大鼠50只，体重200～220g，随机分为5组，每组10只.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混悬液，高剂量为100mg/kg、中剂量为50mg/kg、低剂量为25mg/kg，阳性药给予布洛芬100mg/kg，连续灌胃给药3天，对照组给予同体积溶媒10ml/kg，末次给药30min后，每鼠右后足跖部注射新鲜蛋清0.1ml，分别测量致炎前及致炎后30min，60min，120min，240min测定大鼠右足体积.

2.6 大鼠棉球肉芽肿法［3］

取Wistar大鼠 50只，200～220g.随机分为 5组，每组10只.乙醚麻醉，于右腋下植入30mg±1mg灭菌棉球，手术当日开始给药，力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混悬液，高剂量为100mg/kg、中剂量为50mg/kg、低剂量为25mg/kg，阳性药给予布洛芬100mg/kg，连续灌胃给药7天，对照组给予同体积溶媒10ml/kg，末次给药1h后处死动物，取出棉球，于70℃烘箱干燥12h，称重，减去棉球重，得净重.

3 结果

3.1 扭体法试验结果

扭体法实验结果表明，力克菲隆高、中剂量对醋酸致小鼠扭体反应有明显抑制作用，与对照组比较P＜0.01，P＜0.05.结果如表1.

表1 力克菲隆对醋酸致小鼠痛反应模型的影响（X±SD）

3.2 热板法试验结果

热板法中力克菲隆给药组痛阈时间较对照组明显延长，表明本品有较强镇痛作用.结果见表2.

3.3 甩尾法试验结果

甩尾法中阳性药痛阈时间较对照组明显延长，力克菲隆仅高剂量组较对照组有一定作用，但镇痛作用弱于对照组.结果见表3.

3.4 小鼠耳肿胀法试验结果

小鼠耳肿胀法统计结果表明，力克菲隆各剂量组与对照组比较有显著差异，P＜0.05，力克菲隆对二甲苯致小鼠耳肿胀有抑制作用.结果见表4.

3.5 大鼠足肿胀法试验结果

大鼠足肿胀统计结果显示，力克菲隆高、低剂量组与对照组比较有显著差异，P＜0.05，表明本品对蛋清致大鼠足肿胀模型有抑制作用.结果见表5.

表2 力克菲隆对小鼠热板致痛模型的影响（X±SD）单位：秒

表3 力克菲隆对大鼠尾痛反应模型的影响（X±SD）单位：秒

表4 力克菲隆对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响（X±SD）

表5 力克菲隆对蛋清所致足跖肿胀的影响（X±SD）

3.6 大鼠棉球肉芽肿法试验结果

大鼠棉球肉芽肿法统计结果显示，力克菲隆各剂量组与对照组比较有显著差异，P＜0.05，表明力克菲隆有抗炎作用.结果见表6.

表6 力克菲隆对大鼠棉球肉芽肿的影响（X±SD）

本研究通过小鼠扭体试验模型、小鼠热板致痛模型、大鼠甩尾试验模型、二甲苯致小鼠耳肿胀模型、大鼠棉球肉芽肿模型，以布洛芬为对照药，研究了力克菲隆的抗炎镇痛作用，结果表明力克菲隆有较强抗炎镇痛作用，其镇痛作用优于布洛芬.

4 讨论

关节炎是一种常见病，症状发作期多以疼痛肿胀为发病特点，患者需要用各种方式来控制和缓解疾病.因此，实验设计了急性期炎症疼痛模型，即二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠扭体反应、热板致小鼠疼痛，以观测力克菲隆对炎症疼痛的抑制作用.本实验结果表明，力克菲隆可抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，与对照组相比具有统计学意义（P＜0.05）.同时，力克菲隆能够抑制醋酸所致小鼠腹腔黏膜引起的疼痛反应，减少扭体次数，与对照组相比有显著差异（P＜0.05或P＜0.01），力克菲隆能够提高小鼠热刺激体表的痛阈，3h内作用明显.水肿是炎症过程中的早期病理变化，纤维组织增生和肉芽屏障的形成是晚期炎症的特征［5］，本实验结果表明，力克菲隆对蛋清引起小鼠足肿胀4h内作用明显（P＜0.05），且能明显抑制小鼠棉球肉芽肿（P＜0.05），表明其对炎症早期有显著的预防作用，且对炎症后期亦有显著效果，说明力克菲隆具有显著的抗炎镇痛活性，且与计量呈正相关.

由于非甾体抗炎药抗炎和镇痛作用强，通常作为骨关节炎治疗的常用药物，然而其对胃肠道的不良反应［6］以及选择性COX-2抑制剂也会增加心血管不良事件的风险［7-10］.力克菲隆作为新一代非甾体抗炎药不仅可以阻滞环氧合酶COX-1、COX-2，还可以阻滞5-脂氧合酶LOX，它可以保护患者的胃黏膜以及降低心血管不良事件的风险［11］.本实验结果表明，力克菲隆有较强的抗炎作用.由于其抗炎镇痛作用明确且安全性高，患者可长期服用，所以它具有良好的市场开发价值.