榆黄蘑菌种生产技术

潘 静 颜丹红 屠昌鹏 龚 芬

（浙江省玉环市农业农村和水利局，浙江 玉环317600）

榆黄蘑是一种药食两用菌，味道鲜美，营养丰富，具有降压、预防肿瘤及延缓衰老的功效，市场前景广阔[1]。菌种（包括母种、原种和栽培种）生产是榆黄蘑栽培的关键环节，关系到榆黄蘑的产量和质量。

1 榆黄蘑菌种分级

1.1 母种

母种是榆黄蘑孢子分离或组织分离获得的纯试管种，也叫一级菌种。母种分离培养的质量直接关系到原种和栽培种的遗传和生理特性，关系到榆黄蘑子实体的产量和品质，是制种过程中最关键的一个环节，必须经过提纯、筛选、试种、出菇、鉴定。母种大多使用以试管为容器、以琼脂为凝固剂的培养基。母种可以进行扩管。

1.2 原种

将母种在木屑、棉壳、麸皮等基质或麦粒基质上扩大繁殖，成为原种，也叫二级菌种。1支母种可移接4～6瓶（袋）原种。原种可直接用于生产，但因其数量少，生产上使用成本高，往往需要进一步扩繁。

1.3 栽培种

栽培种是指由原种扩培而成的直接用于生产的菌种，又称生产种、三级菌种。一般每瓶原种可扩接栽培种25～30瓶（袋）。

经过母种、原种、栽培种的扩大繁殖，菌丝更加粗壮，其分解基质的能力更强，子实体高产优质。

2 母种制作

2.1 母种培养基配方

一般母种培养基配方有2 种。（1）马铃薯、葡萄糖、琼脂（PDA）培养基：马铃薯（去皮）200 g，琼脂20 g，葡萄糖20 g，水1 000 mL，pH值5.5～6.0；（2）PDA综合培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾2 g，硫酸镁2 g，琼脂20 g，水1 000 mL，pH值5.5～6.0。

2.2 制作

配方1 和配方2 培养基制作方法相同，磷酸二氢钾和硫酸镁应先分别溶解后再混合。将马铃薯（不干缩、无病虫、未出芽）洗净去皮，称取200 g，切成薄片；蒸锅中加入清水1 000 mL，放入马铃薯煮沸，至薯片酥而不烂，时间约15 min；用4 层纱布过滤溶液，取其汁液，将滤液置于锅中，加入琼脂，小火加热，并用玻璃棒不断搅拌，以防汁液溢出和焦底；加入葡萄糖，用热水补足1 000 mL，最后测定并调节pH 值至所需范围。配制好的培养基趁热分装入试管（培养基不可沾到试管口），装入量为试管长度的1/5～1/4。分装完毕后，试管塞上棉塞或硅胶塞，要求松紧合适，确保既可通气又能防止杂菌侵入。棉塞应用干净普通棉花制作，脱脂棉易吸潮感染杂菌。

2.3 灭菌

每7支试管用橡皮筋捆好，管塞部分用报纸或牛皮纸包扎，然后将试管竖直放入高压灭菌锅内灭菌。灭菌时，排干锅内冷空气，压力达到103 kPa（121.3 ℃）后维持30 min。试管灭菌后温度降至60 ℃时，在桌上放1根1 cm厚木条，将试管倾斜放在桌上，斜面长度为试管总长度的2/3～3/4，培养基冷却凝固后即成斜面培养基。

2.4 接种

可在接种箱内或超净工作台上接种。严格按照无菌操作规程切下1 块母种的菌丝体，然后迅速接到斜面培养基的中央，接种动作要快而且菌丝体不可接触到其他物品。最后将试管置于25 ℃条件下恒温培养。

3 原种和栽培种制作

由于母种数量少，生活力弱，应选择菌丝健壮洁白、生长旺盛、无老化、无杂菌感染的母种试管进行原种和栽培种的扩大培养[2]。制作生产工艺流程为配料-装瓶（袋）-灭菌-接种-培养。

3.1 培养基配制

（1）木屑、棉籽壳培养基：阔叶树木屑40%，棉籽壳40%，麸皮或米糠15%，玉米粉3%，石膏1%，蔗糖1%，料水比为1∶（1.1～1.2）;（2）棉籽壳、麸皮培养基：棉籽壳77%，麸皮20%，石膏1.5%，白糖1%，石灰0.5%，料水比为1∶（1.2～1.3）;（3）木屑、麸皮培养基：木屑82%，麸皮16%，石灰1%，石膏1%，料水比为1∶（1.2～1.3）；（4）麦粒培养基：麦粒94%，麸皮5%，石膏1%，含水量50%左右。

3.2 制作

（1）配方1、配方2、配方3 制作方法：按配方称取原料，先将不溶于水的原料混拌均匀，再将蔗糖等溶于水后加入料中，边洒水边拌料，最后用拌料机搅拌2～3次即可装瓶（袋）。（2）配方4制作方法：选择无霉变、无虫蛀、籽粒饱满的陈麦，置于2%石灰水中浸泡（夏季浸泡24 h，冬季浸泡48 h），然后用清水冲洗干净，置于锅中煮至膨大变软、无白心不破皮时捞出沥干水分，稍晾后拌入麸皮等辅料，装瓶灭菌。

3.3 装瓶或装袋

原种一般以装瓶为好，栽培种可装瓶或装袋。原种可选用专用菌种瓶，要求透明度好，便于观察菌丝生长情况。装瓶时，一般先装入2/3，然后手握瓶颈，将瓶底在手掌上叩几下，让培养料自然下沉，然后继续装到瓶颈，再用捣棒压实、压平。培养料以装至瓶肩为宜，要求松紧适度，上紧下松，便于菌丝生长，一般以翻瓶倒不出料为宜。培养料装瓶或装袋后，用接种棒打一深孔（麦粒培养基不需要打孔），用于接种，最后用清水洗净瓶的外壁及瓶颈上部内壁，然后封口。

3.4 灭菌

将栽培瓶放入高压锅内，当压力稳定在147 kPa 时开始计时，木屑棉籽壳培养基维持2～3 h、麦粒培养基维持3～4 h。如果栽培种采用聚乙烯袋，则采用常压灭菌方法，100 ℃维持10～12 h。

4 接种

灭菌后的培养基经冷却后出锅，温度降至28 ℃以下时即可接种。接种必须严格按无菌操作要求进行。接种前检查菌种质量，使用菌龄适中、菌丝生长健壮、无污染的菌种。

4.1 原种接种

用已消毒的接种钩切下1块母种的菌丝体及培养基，在酒精灯无菌区快速接入原种瓶，将瓶口和棉塞过火灭菌后塞紧。一般1支母种可转接4～6瓶原种。

4.2 栽培种接种

栽培种直接用于生产，因此其培养基应尽量和栽培料相近，以便菌种迅速适应栽培料配方。栽培种较原种应适当增大接种量，以尽快封闭料面，缩短发菌时间。把处理好菌皮、老接种块的原种迅速接入栽培种中，一般1瓶原种可接种25～35瓶栽培种。接种后，用火焰灼烧瓶口，盖上棉塞，最后移入培养室培养。

5 发菌管理

培养料接种后移入培养室培养。最初几天，室温控制在24～28 ℃，以利菌丝定植，此时菌瓶应竖直放置；7 d后挑出被污染瓶（袋），未萌发的及时补种。待菌种萌发封面后菌瓶改为横卧放置，温度降至22～24 ℃，每周检查1次。室内保持干燥，要求较暗或黑暗，湿度控制在50%～60%。每天通风，保持空气新鲜；每隔7 d消毒1次，保证室内清洁，做好杀虫防鼠工作。

6 菌种质量鉴别

（1）直观法：新引进或刚分离的菌种，可通过肉眼观察其菌丝生长情况，再用鼻子闻气味，如菌丝洁白浓密，生长整齐，无霉味，则为优良菌种。（2）培养鉴定法：将菌种接在固体培养基上，置于恒温培养箱培养，观察其生长情况和抗逆性，如果菌丝萌发快、生长迅速、健壮有力，且菌丝长势均匀一致，抗逆性强，则为优良菌种。（3）镜检鉴定法：选取少量菌丝制片，镜检观察。有榆黄蘑特征、无杂菌孢子或其他菌丝体，则为优良菌种。（4）出菇试验鉴定：出菇试验可直观筛选优良菌株，为大批量生产提供参考和菌种。

在实际生产中，直观法可容易鉴别栽培种的好坏，质优的栽培种有榆黄蘑特有的清香气味，其菌丝洁白浓密，不松散，菌袋内培养料含水量适当，不干燥，不积水[3]。菌种表面出现子实体原基，不是菌种老化，而是成熟的标志。当培养基表面出现大量黄豆大小的原基时，表明菌种已成熟过度，应立即使用。