超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法测定牛奶中黄曲霉毒素M1比较

张振宇 柴 磊 李 明

（1.济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源 459000；2.焦作市畜产品质量安全监测中心，河南焦作 454001）

1 前言

黄曲霉毒素M1（AFM1）是由常见的黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的代谢产物，其物理化学性质稳定。哺乳类动物摄入被AFB1污染的饲料后，在体内羟基衍生转化成AFM1。AFM1的危害主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡。

牛奶中的黄曲霉毒素主要来源于饲料。黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物。我国规定牛奶中黄曲霉毒素 M1含量不得超过0.5 μg/kg。

2 材料与方法

2.1 材料与仪器

PBS 清洗缓冲液（Charm公司）；AFM1、AFM1-13C17标准液（Romer公司）；AFM1免疫亲和柱（Romer公司）；玻璃纤维滤纸（Whatman公司）；ROSA黄曲霉毒素M1胶体金快速定量检测条（Charm公司，检测限0.5μg/kg）。

UPLC-Xevo TQ MS型超高效液相色谱-串联质谱仪（Waters公司）；孵育器、读数仪（Charm公司）。

2.2 方法

2.2.1 免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法

（1）样品前处理

牛奶中的黄曲霉毒素M1含量测定一般按照GB 5009.24-2016《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定》第一法 同位素稀释液相色谱-串联质谱法进行测定。

（2）液相色谱条件

色谱柱：CORTECS UPLC C18 Column，（1.6 μm，2.1 mm X 100 mm）；流动相A为乙腈；流动相B为0.2%甲酸水梯度洗脱；柱温为40℃；进样量为5μl。

（3）质谱条件

电离方式：电喷雾正离子模式；多反应监测模式采集；毛细管电压2.7kV离子源温度为150℃；脱溶剂气温度为500℃；脱溶剂气流量为1000L/h。

2.2.2 胶体金快速定量法

分别准确量取300μl待测样品、阴性质控样品、阳性质控样品加入胶体金检测试纸条的加样孔中，放入已预热孵育器中孵育，孵育8 min后取出检测试纸条观察C线（质控线）和T线（检测线）显色情况。选择读数仪调为检测模式，把检测条放入读数仪，读数仪自动显示样品中黄曲霉毒素M1的含量。

3 结果与分析

3.1 两种方法的精准性

空白样品中分别添加黄曲霉毒素M1为0.5，1.0，2.0μg/kg浓度水平的标准溶液，然后分别用免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法检测，取6次平行测定结果，计算方法的精密度。

用免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法检测3个水平添加黄曲霉毒素M16次重复的相对标准偏差为3.1%，用胶体金快速定量法检测的相对标准偏差为11.3%，可见用免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法检测黄曲霉毒素M1含量的精密度更好。

3.2 牛奶样品黄曲霉毒素M1含量两个测定方法的对比试验结果

抽取20个牛奶样品，其中10个牛奶样品为阳性添加，用超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法进行黄曲霉毒素M1检测，结果表明其中10个牛奶样品呈阴性，两种方法检测黄曲霉毒素M1含量均未检出，另10个牛奶样品呈阳性，两种方法均有检出，相对偏差的计算是以超高效液相色谱-串联质谱法测定值为参考值，两种方法的最大相对偏差为10.3%，两组测定结果之间的相关系数0.99，故其相关性显著。

3.3 两种检测方法的比较分析

从测定原理来看，免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法是用提取液提取试样中的黄曲霉毒素M1，经免疫亲和柱净化，用黄曲霉毒素M1氘代内标定量，该方法准确度、灵敏度高、精密度好。胶体金快速定量法是跟据试样中黄曲霉毒素M1与胶体金微粒发生呈色反应，读数仪检测条颜色深浅算出黄曲霉毒素M1含量，该方法检测结果与超高效液相色谱-串联质谱法相关性好，精密度较低、只能简单定量。

从检测步骤来看，超高效液相色谱-串联质谱法测定黄曲霉毒素M1含量时需要对样品进行称量、提取、净化、洗脱、进样上机测定，其操作过程较为复杂，检测时间较长，检测费用高。胶体金快速定量法只需对样品简单操作，就可进行测定，操作过程简单，引起的随机误差小，测定1个样品时间只需10 min，快速简便，适用于现场快速检验，可用于奶牛养殖场、生鲜乳收购站、乳品加工车间大量样品快速筛查。

4 结论

免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法来测定牛奶中黄曲霉毒素M1的含量，并对两种方法的检测结果进行分析。免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法检测结果准确，胶体金快速定量法能对样品中的黄曲霉毒素M1进行定量，检测结果与免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法相关性好，适用于样品的快速筛查。