血液中乙醇含量测定-异丁醇内标标准曲线法

薛烽

摘 要：目的：建立用异丁醇作为内标的标准曲线定量法来测定血液中的乙醇含量，并与方法GA/T 1073-2013进行比较。方法：用顶空进样器-气相色谱联用仪，采用内标工作曲线法的定量方式分析血液中乙醇含量[1-2]。结果：用本方法测得的乙醇加标回收率为97.8～104.5%，相对标准偏差在0.5%以内，一元性回归方程式的相关系数r>0.999。结论：用该法分析血液中的乙醇含量准确度和精密度均能满足要求，内标物的适用性更广泛。

关键词：乙醇;血液;异丁醇;内标-标准曲线;气相色谱

中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2019）23-0210-02

血液中的乙醇含量测定目前现有的方法是GA/T 1073- 2013和GA/T 842-2019，采用的内标物均为叔丁醇，但是笔者在实际运用中发现：冬天温度低的时候，叔丁醇是固体状态，配制内标液的时候需要加热等候很长时间才能将固体状的叔丁醇完全转化成液体状，给称量或移取带来不便。经过查证发现，叔丁醇的熔点为25.7℃，这是导致叔丁醇在冬天气温较低时会处于固体状态或固液混合状态，因此笔者的想法时寻找熔点较低的化合物来替代作为内标，根据GA/T 1073-2013，其不但可以测试乙醇含量，还用于测试甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇和正丁醇，因此内标物的选择需要避开以上化合物，经过寻找，笔者找到了异丁醇，其熔点为-108℃，溶解性：溶于约20倍的水，与乙醇和乙醚混溶，因此笔者认为异丁醇比较适合作为内标物。

1 材料与方法

1.1 仪器

Aglient气相色谱7890B、Aglient顶空进样器7697A、Eppendorf移液器（20-200μL和100-1000μL）、顶空进样瓶（10mL，配有铝帽及密封垫）。

1.2 试剂

乙醇系列标准品（Cerilliant进口标准品）、异丁醇（国药集团沃凯>99.5%）、叔丁醇（阿拉丁>99.5%）、蒸馏水（屈臣氏）、血液样品。

1.3 试剂配制

1.3.1 内标物溶液

用移液器移取623.5μL的异丁醇（密度0.806g/mL，纯度99.5%）于一预先装有适量蒸馏水的100mL容量瓶中，再用蒸馏水定容至刻度，摇匀，得浓度为5mg/mL的正丁醇内标储备液（A溶液），再将A溶液用蒸馏水稀释成4mg/100mL（B溶液）。

1.3.2 乙醇标准品

市售，浓度为10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL。

1.4 实验条件

1.4.1 顶空进样器条件（如表1）

1.4.2 气相色谱条件（如表2）

1.5 实验方法

1.5.1 标准曲线制作

用移液器分别移取500μL的异丁醇内标物溶液（B溶液）于7个10mL顶空瓶中，再向这7个顶空瓶中分别移取100μL的10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL乙醇标准品，用硅胶垫和铝帽密封，混匀。置于顶空进样器中，按1.4条件进样分析。以待测组分（乙醇）和内标物（异丁醇）的峰面积之比作为纵坐标，以待测组分（乙醇）和内标物（异丁醇）的含量之比作为横坐标，制作内标工作曲线。

1.5.2 样品测定

用移液器分别移取100μL的全血样品和500μL的异丁醇内标物溶液（B溶液）于一个10mL顶空瓶中，用硅胶垫和铝帽密封，混匀，置于顶空进样器中，按1.4条件进样分析。据待测样品中乙醇和异丁醇的峰面积之比，即可在工作曲线上查出待测样品中乙醇的浓度，进而得出待测样品中乙醇的含量。

2 结果与讨论

2.1 方法的可行性

从图1可知，乙醇的出峰时间为1.708min，异丁醇的出峰时间为4.496min，实验条件能达到分离效果，实验方法可行。

2.2 内标工作曲线的建立

乙醇/异丁醇峰面积之比-乙醇/异丁醇含量之比对照表见表3;内标工作曲线见图2。

2.3 加標回收

向空白血液中加入适量乙醇，分别制得乙醇含量为20mg/100mL和80mg/100mL的血液样品，用此方法测其乙醇含量，结果如表4。

2.4 精密度

随机抽取一血液样品，按此方法重复分析6次，得出6个乙醇含量结果，计算相对标准偏差如表5。

3 结语

应用异丁醇作为内标测定血液中乙醇含量，加标回收率为97.8%，相对标准偏差为0.35%，满足测试要求，异丁醇代替叔丁醇作为内标的适用性更广泛，特别是当室温比较低时，异丁醇不会出现叔丁醇冻结的状态，方便了检测人员的操作。

参考文献

[1] 代娟，陈曼，赖翼，昝旺.直接进样毛细管气相色谱法测定血液中乙醇含量的研究[J].中国卫生检验杂志，2010，20（2）：283-284.

[2] 陈君，彭峰.气相色谱法直接测定血液中乙醇的含量[J].检验医学与临床，2010，7（5）：418-419.