HPLC法测定注射用布比卡因凝胶中抗氧剂1010和抗氧剂1076的含量

周建栋 许慧 方旻 谢新艺 广东省医疗器械质量监督检验所包装材料容器检验中心 （广东 广州 510663）

内容提要： 借助高效液相色谱仪对注射用布比卡因凝胶中抗氧剂1010和抗氧剂1076的含量进行测定。结果表明，新方法检测抗氧剂1010和抗氧剂1076分别在1.00～40.0μg/mL和2.04～81.6μg/mL范围内线性关系良好，相关系数都为0.9999，抗氧剂1010和抗氧剂1076在注射用布比卡因凝胶中平均加标回收率为90.4%（RSD=4.76%）和86.4%（RSD=3.95%），该方法灵敏快速，操作简便，重复性好，可用于检测包装材料中抗氧剂1010和抗氧剂1076在注射用布比卡因凝胶中的迁移情况。

随着经济的快速发展，药品包装材料与药物相容性研究越来越受到关注，国家对药品包装材料与药物相容性研究也越来越重视。丁基胶塞是药品包装中瓶装密封材料的重要组成部分，特别适于用作药品密封，为药物质量提供了更为可靠的保证[1]。但在使用过程中，仍然存在与药物的相互作用，甚至影响药物的物化性质和药理作用，主要存在药物吸附、胶塞浸出物和胶塞穿刺落屑等问题[2]。其中多酚抗氧剂1010和1076是当今国内外塑料抗氧剂的主导产品，能有效地防止聚合物材料在长期老化过程中的热氧化降解，同时也是一种高效的加工稳定剂，能改善聚合物材料的性能。不过抗氧剂的结构复杂且性质不稳定，可能会与药物相互作用，导致药物性质发生改变，另一方面，抗氧剂也有可能从包装材料中迁移到药液中危害人体[3,4]。欧洲药典对抗氧剂的含量进行了严格的限定[5]。本文借鉴欧洲药典的方法，建立一种测定注射用布比卡因凝胶中抗氧剂1010、抗氧剂1076的含量的方法。

1.材料与方法

1.1 一般材料

仪器：①高效液相色谱仪（日本岛津公司LC-20A）；②万分之一电子天平；③恒温水浴锅；④台式低速离心机；⑤旋转蒸发器（配恒温水浴锅）；⑥循环水真空泵；⑦色谱柱（Inertsil®ODS-SP，4.6mm×250mm，5μm）。

试剂：①抗氧剂1010标准品：四[β-（3，5-二叔丁基-4-羟基苯基）丙酸]季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，SIGMA-ALDRICH，批号：MKBV3769V；②抗氧剂1076标准品：β-（3，5-二叔丁基-4-羟基苯基）丙酸正十八碳醇酯，C35H62O3，CAS：2082-79-3，SIGMA-ALDRICH，批号：MKBT6389V；③甲醇、乙腈、四氢呋喃均为色谱纯；④水为超纯水。

表1. 梯度洗脱程序

1.2 方法

标准液制备。①标准储备液：准确称取抗氧剂1010标准品100.0mg和抗氧剂1076标准品204.0mg于10mL容量瓶中，用混合液（乙腈：四氢呋喃=1：1）溶解稀释定容至刻度，摇匀。从中准确移取1.00mL于10mL容量瓶，用混合液（乙腈：四氢呋喃=1：1）稀释定容至刻度，摇匀，即得标准储备液。②系列标准溶液：用混合液（乙腈：四氢呋喃=1：1）将标准储备液逐级稀释至抗氧剂1010浓度为1.00、2.00、4.00、10.0、20.0、40.0μg/mL和抗氧剂1076浓度为2.04、4.08、8.16、20.4、40.8、81.6μg/mL的系列标准溶液。

色谱条件。色谱柱：Inertsil®ODS-SP，4.6mm×250mm，5μm；流动相：四氢呋喃：乙腈：水（初始比例：30：50：20），梯度洗脱（程序见表1）；流速：1.5mL/min；检测波长：280nm；柱温：40°C；进样量：20μL。

样品前处理。准确称量0.50g注射用布比卡因凝胶于离心管，于70°C水浴锅中加热为液体状，加入4.0mL甲醇，充分震荡萃取，于冰水浴中冷却2min，置于离心机4000r/min离心3min，取上清液于烧瓶，重复萃取一次，合并萃取液于旋转蒸发器45°C水浴负压旋转蒸干，用5.0mL混合液（乙腈：四氢呋喃=1：1）溶解样品，用0.45μm滤膜过滤后为待测样品。

2.结果与讨论

2.1 专属性试验

分别取标准溶液、待测样品进样20μL，进行HPLC测定，记录色谱图，由图可见抗氧剂1010的保留时间为13.4min，抗氧剂1076的保留时间为18.0min，空白无干扰。

2.2 注射用布比卡因凝胶中抗氧剂精密度试验

重复性：平行制备6份注射用布比卡因凝胶加标低浓度样品（参照注射用布比卡因凝胶回收率试验制备），供试液经0.45µm滤膜过滤后进样20μL，进行HPLC测定。

中间精密度：在不同天由不同分析人员平行制备6份注射用布比卡因凝胶加标低浓度样品（参照注射用布比卡因凝胶回收率试验制备），供试液经0.45µm滤膜过滤后进样20μL，进行HPLC测定。

图1. 标准溶液色谱图(已扣除空白背景)

表2. 注射用布比卡因凝胶中抗氧剂精密度试验结果

2.3 线性试验

分别取系列标准溶液进样20μL，进行HPLC测定，每个浓度测定2次，抗氧剂1010的线性方程为：C=2.5387×10-4A+2.6240×10-2，相关系数R2=0.9999，表明抗氧剂1010在1.00～40.0μg/mL范围内线性良好；抗氧剂1076的线性方程为：C=4.2303×10-4A–1.1029×10-1，相关系数R2=0.9999，表明抗氧剂1076在2.04～81.6μg/mL范围内线性良好。

2.4 检出限与定量限

取标准溶液用混合液（乙腈：四氢呋喃=1：1）稀释测定，记录色谱图，当信噪比S/N为3时为仪器检出限，抗氧剂1010和抗氧剂1076的仪器检出限分别为0.200μg/mL和0.408μg/mL。当信噪比S/N为10时为仪器定量限，抗氧剂1010和抗氧剂1076的仪器定量限分别为0.600μg/mL和1.63μg/mL。

2.5 注射用布比卡因凝胶回收率试验

准确称量0.50g注射用布比卡因凝胶于离心管，共制备9份，分别加入标准溶液（抗氧剂1010：100μg/mL和抗氧剂1076：204μg/mL）50μL、100μL、200μL，每种浓度3份，照1.2.3样品前处理方法制备注射用布比卡因凝胶加标低、中、高浓度样品，抗氧剂1010三个加标水平回收率为84.2%～95.8%（平均90.4%，RSD=4.76%），抗氧剂1076为83.3%～94.3%（平均86.4%，RSD=3.95%），介于80%～120%，满足准确度要求。

2.6 样品测定

利用本方法对某企业生产的注射用布比卡因凝胶（0个月样品、加速试验3个月样品和长期试验3个月样品）进行测定。样品中均未检出抗氧剂1010和抗氧剂1076。

3.结论

方法学验证试验表明，采用HPLC法测定注射用布比卡因凝胶中抗氧剂1010和抗氧剂1076的含量，方法操作较为简便，重复性好，准确可靠，能够比较好地监控包装材料中抗氧剂1010和抗氧剂1076在注射用布比卡因凝胶中的迁移情况。为注射用布比卡因凝胶中抗氧剂的检测提供了技术支持。?