西安地区健康儿童血清缺血修饰清蛋白参考区间的建立

史剑飞，卢北玲，李 俏，毛 瑞，曹三成，宁远征

（1.西安市儿童医院检验科，西安 710003；2.西安市中医医院检验科，西安 710021）

血清缺血修饰清蛋白（ischemia modified albumin，IMA）是正常人清蛋白发生氧化应激自由基损伤后形成的产物。清蛋白在缺血缺氧或酸中毒等病理条件下氨基酸N-末端被修饰，导致其与重金属离子（Cu2+，Ni2+和Co2+等）结合的能力下降，根据此原理检测IMA的生成[1]。研究发现IMA在心肌梗死[2]，苯丙酮尿症[3]，儿童哮喘[4]等疾病进展中表达显著升高。IMA已经被广泛应用于临床各种疾病的诊断评估与病情监测，目前国内外暂无统一的儿童IMA参考区间，多参考试剂说明书且均为成人参考区间，因此建立西安地区儿童的参考区间尤为重要[5]。本实验室依据现有的检测系统，结合统计学分析初步建立西安地区0～12岁健康儿童IMA的参考区间，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2019年7月1日～8月15日在西安市儿童医院儿童保健科健康体检儿童260例，其中按性别分为男性组140例，女性组120例；按年龄分为≤1岁组41例、1～3岁组56例和≥3岁组163例。收集上述健康儿童的血清进行检测。所有入选儿童无黄疸、心肌缺血性疾病、手术外伤以及用药史等，肝功能、肾功能、心肌酶和血脂检查均正常且血清标本无溶血、乳糜和黄疸。

1.2 试剂与仪器 上海科华生物工程股份有限公司的IMA检测试剂以及配套校准品和质控品，美国贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪，采用清蛋白-钴结合法，根据IMA标准操作程序检测IMA水平。

1.3 方法

1.3.1 检测仪器性能验证：根据CLSI-EP9-A2文件，对本实验室AU5800分析系统的批内精密度、批间精密度、线性范围和可报告范围等进行验证以满足临床检测需求。

1.3.2 建立参考区间：①标本采集与检测：根据试剂说明书要求，收集健康体检儿童血清3ml上机检测；②离群值剔除：采用Dixon法，将数据从小到大排列，可疑离群值与其相邻值之差为D，R为所有数据最大值与最小值之差，若D/R≥1/3，则作为离群值剔除，以此类推；③初步分组：根据健康体检儿童的性别和年龄进行分组和统计分析；④参考区间验证：选取在西安市儿童医院儿童保健科进行健康体检的男性和女性各20例，对本实验室建立的血清IMA参考区间进行验证，若男性和女性儿童的血清IMA浓度值落在参考区间之外不超过2例，说明建立的参考区间适用。

1.4 统计学分析 采用GraphPad Prism5.0对所有数据进行统计学分析。选择D检验法（D'Agostino-Pearson法）判断数据是否为正态分布，P＞0.1数据呈正态分布，若数据呈正态分布，采用95%参考值范围±1.96s计算参考区间；若数据呈偏态分布，则采用单侧95%分位数法（P95）计算参考区间。不同性别组间的比较采用Mann-Whitney U检验，不同年龄组间的比较采用Kruskal-Wallis H检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测系统性能验证 检测系统的批内精密度、批间精密度、线性范围和可报告范围等各项指标均符合试剂厂家性能参数要求。

2.2 离群值判断和剔除 260例数据中最大值为79 U/ml，最小值为46 U/ml，则全矩R为33 U/ml，D为14 U/ml，D/R＞1/3，79 U/ml数据被剔除不可用。以此类推，共259例数据被纳入。

2.3 血清IMA水平的数据分布 IMA总体数据判断：P=0.002＜0.10，呈偏态分布；健康男性儿童数据判断：P=0.002＜0.10，呈偏态分布；女性数据判断：P=0.112＞0.10，呈正态分布。

2.4 血清IMA在不同性别间的数据比较 男性和女性儿童组间IMA结果表达（70.47±2.64U/ml vs 69.61±3.14U/ml），差异有统计学意义（U=6 954, P=0.021＜0.05）。

2.5 血清IMA在不同年龄组间的数据比较 ≤1岁组（n=41，69.71±3.27U/ml）、1～3岁 组（n=56，70.66±2.77U/ml）和≥3岁组（n=162，69.97±2.87U/ml）间血清IMA结果分别比较，差异均无统计学意义（H=1.813，P=0.404）。

2.6 IMA参考区间的确立 以单侧95%分位数法计算男性儿童血清IMA的参考区间：P95=74 U/ml；以95%参考值范围±1.96s计算女性儿童血清IMA的参考区间：63.46～75.76U/ml。清蛋白-钴结合检测法检测西安地区健康儿童血清IMA的参考区间：男性0～74.00 U/ml，女性0～75.76 U/ml。

2.7 参考区间的验证 选取西安地区健康体检的男性和女性儿童各20例，其中19例男性儿童和20例女性儿童IMA数值位于参考区间内，说明本实验室建立的参考区间适用于西安地区儿童。

3 讨论

IMA在机体缺血发生的数分钟内急剧上升，在2～4 h内达到峰值，并在6～12 h内恢复到基线水平[6-7]。IMA是一种快速、简单、可靠、低成本且敏感的氧化应激生物标记物，常用于监测机体不同环境条件下氧化应激的程度[8]。主要优点是在机体缺血的早期阶段，血清IMA在组织发生坏死之前就已经显著升高。

目前国际上越来越多的研究发现IMA在儿童多种疾病的进展过程中发挥着重要的作用。KESHAVARZI等[3]发现与健康对照组相比，50例2～16岁苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU）患儿血清中IMA和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.001），且IMA升高与MDA升高呈显著正相关，提示IMA可作为一个评价PKU氧化应激损伤的生物标记物。DOGRU等[4]通过随访26例平均年龄6岁左右的哮喘儿童，评估哮喘急性发作期和无症状期儿童的IMA水平，发现哮喘急性发作期和无症状哮喘稳定期患儿IMA水平均显著升高，且严重哮喘急性发作的患儿IMA表达水平显著高于轻/中度哮喘患者（P＜0.01），IMA水平与哮喘急性发作的严重程度呈正相关，可反映机体氧化应激损伤的严重程度。OZDEMIR等[9]研究先兆子痫（pre-eclampsia，PE）妊娠母亲和其早产儿的血清IMA水平，发现PE组所有早产儿脐带血中IMA显著增加，对于评估早产儿发生氧化应激损伤的诊断及评估有着重要的价值。OZGUNAY等[10]研究小儿腹腔镜手术中应用不同腹内压（intraabdominal pressure，IAP）后患儿血清IMA水平的变化，发现12 mmHg IAP加剧IMA的水平升高，对于评估小儿外科手术中不同程度IAP水平对儿童机体氧化应激损伤程度提供了很好的参考。马利军等[11]发现缺血性脑血管病患者中IMA水平显著升高，通过联合脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）以及经颅多普勒超声（TCD）检测，可对缺血性脑疾病的高危人群进行早期预测、诊断和干预，这为今后研究儿童缺血性脑疾病的进展提供了切入点和参考依据。

IMA已经被广泛应用于临床儿童各种疾病的病情评估以及预后监测中，其潜在的价值正逐渐被发现。与试剂盒给定的参考区间（0～78 U/ml）相比，本实验建立的西安地区健康儿童IMA参考区间（男性0～74.00 U/ml，女性0～75.76 U/ml）均低于其水平，适用于本地区儿童，更好服务于本地区儿童临床疾病氧化应激损伤的诊断及评估。由于新生儿标本的数据获取有限，本实验未将新生儿纳入本次研究。