滇丹参中丹酚酸B提取及纯化工艺研究

2019-02-28 01:40姜玉玉
科学与财富 2019年2期
关键词:提取工艺

姜玉玉

摘 要:目的:以滇丹参为研究对象,探索提取与纯化其丹酚酸B成分的最佳工艺。方法:将丹酚酸B成分在滇丹参的具体含量当做评价指标,通过展开正交试验来确定纯化与提取工作的最优条件。结果:通过正交试验,可以明确,如果需要保障丹酚酸B物质的含量,应当将8倍量的水设置为提取条件,煎煮两次,每次花费1h,选用的絮凝沉降剂为ZTC11+1,药液的基本浓度应当为1g/5mL,絮凝剂的实际用量为B:A=4:2,搅拌速度应当控制在100r/min。结论:在对丹酚酸B这一重要成分进行提取以及后续纯化处理工作时,应当先完成精制水提掖的工作,使用絮凝澄清的方法,可以减少杂质的含量。

关键词:滇丹参;丹酚酸B;提取工艺;纯化工艺

技术人员对鼠尾草的根茎以及根展开干燥处理工作之后,可以获取滇丹参,其味道微苦,性属微寒,该中药药材具有散瘀、活血以及调经等常用功效,同时还能发挥出止痛镇静的作用,在治疗患者出现的子宫出血、风湿痹痛以及月经不调等症状时可使用滇丹参药材,该药材中的丹酚酸B挥主要作用,其丹酚酸B成分具有相对较强的活性,直接关系滇丹参的药效,检测该药材的质量与药用价值时,也应当重点关注丹酚酸B,确定纯化与提取工艺技术的使用情况。

1 材料与方法

1.1 一般材料

仪器:Waters e2695型高效液相色谱仪;FB124型电子分析天平;SK250HP型超声提取器。

试药:丹酚酸B对照品;滇丹参;ZTC1+1天然澄清剂;乙腈、甲醇为色谱纯;水为去离子水;其它试剂均为分析纯。

1.2 方法

制备对照品溶液时,需要采用精密称取的方法来参考技术应用标准,称取适量的对照品,添加75%的甲醇,制备出所需的溶液,做好色谱条件的控制工作,设置流动相、流速与检测波长与柱温等参数,在提纯过程中应当始终做好参数控制工作,而后需要继续考察相应的线性关系,完成测定样品含量的工作。

精密称取丹酚酸B对照品适量,加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液,即得。色谱条件:Agilent-C18色谱柱(Φ4.6 mm×250 mm,5 μm);甲醇-乙腈-甲酸-水体积比(26∶9∶1∶64)为流动相;柱温:35 ℃;检测波长:286 nm;流速:0.8 mL/min;理论塔板数按丹酚酸B计不低于2000。

分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液4、6、8、10、12、14μL,在上述色谱条件下依次进样测定。以峰面积积分值为纵坐标,对照品的进样量为横坐标进行线性回归,得到回归方程为Y=895054x-68669,相关系数r=0.9999。结果表明丹酚酸B进样量在0.768~2.688 μg范围内与峰面积呈现良好线性关系。

设计方案:以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,以丹酚酸B含量为评价指标,每个因素选取3个水平,采用正交表L9(34)安排試验,

称取药材9份,每份20 g,按照正交实验表进行试验,滤液浓缩并定容到500 mL,用微孔滤膜(0.45 μm)过滤,精密吸取溶液10 μL,注入液相色谱仪,测定。

ZTC1+1澄清剂溶液的配制:A组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂A组分1 g,先用少量蒸馏水搅成糊状,然后加蒸馏水至100mL,溶胀24 h,搅匀,双层纱布滤过,即得1 %A 组分黏胶液; B组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂B组分1 g,用少量1 %醋酸溶液溶解并搅成糊状,然后加1 %醋酸至100 mL,溶胀24 h,搅匀,双层纱布滤过,即得1 %B 组分黏胶液。经过预实验,发现丹酚酸B在60 ℃时絮凝效果较好,故以60 ℃为絮凝温度,采用正交试验对絮凝澄清工艺的主要工艺参数进行优化。

2 结果

提取溶剂的选择:分别称取40 g(准确到0.01 g)药材4份,分别以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇为溶剂,加入8倍量溶剂提取1.5 h,过滤,滤渣再用6倍量溶剂提取1 h,合并滤液,浓缩并定容到500 mL,用微孔滤膜(0.45 μm)过滤,精密吸取10 μL溶液,注入液相色谱仪,测定丹酚酸B的含量,结果分别为2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高,但以水为溶剂时,与30%乙醇提取率相差不大,因考虑实际生产的需要,故以水为提取溶剂。

根据直观分析结果表明,紫丹参的最佳水提工艺为8倍量水,提取3次,每次1 h,即A2B1C3 。由于提取3次和2次的结果相差不大,为了节约成本,将工艺定为8倍量水,提取2次,每次1 h,即A2B1C2。

直观分析可知,影响絮凝澄清的因素顺序为:药液浓缩比>絮凝剂组分比>搅拌速度,最佳工艺组合为A1B1C2。方差分析显示,药液浓度对精制工艺具有显著性影响。

验证试验:平行取相同量的药液3份,每份50 mL。按上述确定的最佳工艺条件进行验证。同时测得丹酚酸B含量分别为35.62、35.85、35.77 mg/g,验证结果与正交试验相符。

3 讨论

相关人员对滇丹参展开药理方面的研究工作时,对其具有的主要药理作用进行了充分地认识,发现其可以对人体的冠状动脉系统产生影响,使其血流量明显增加,避免使患者形成血栓的问题,同时还能对血小板的聚集起到抑制作用,将原有的血粘度减低,将自由基消除,使血管内皮的功能被改善,血管在损伤之后,也不会出现过于活跃的血液增生活动,该药材可以帮助使用者预防冠心病,患者接受血管成形术之后,可使用该药材来防治血管再狭窄的问题。

滇丹参具有的多重药理功效都非常重要,其背部含有的丹参酮成分具有突出的脂溶性,同时其内部还含有酚酸类成分,这些成分具有不同程度的水溶性特点,本文研究的丹酚酸B的含量相对比较高,主要有1分子咖啡酸与3分子丹酚素两种重要成分缩合而成,具有良好的活性,可以发挥出抗氧化以及清除自由基的作用,评测滇丹参的质量时,也可以将丹酚酸B这一成分的具体含量当做评测指标,选用常规的提取工艺技术,以高效的絮凝澄清型纯化方法来处理该药材,尽可能多地提取丹酚酸B成分。

提取丹酚酸B这一成分时,应当注意到其在水提掖中存在的不稳定的问题,如果提取工作消耗的时间过长,或者实际温度过高,丹酚酸B这一重要成分的含量会因受到影响而降低,因此在提取与纯化的活动中,都应当关注丹酚酸B存有的降解问题。

完成纯化工艺研究之后确定,控制药液浓缩比时,应当将其设定在1:5(g/mL),丹酚酸B成分的保留率可以保持在最高水平,如果药液相对比较稀,丹酚酸B有效成分的含量也会随之降低。当A组分增加之后,絮凝剂组分比也会随之增加,丹酚酸B物质的含量因此而降低,如果组分比可以控制为4/2,提取的效果可达到最佳。

本次选用的絮凝澄清剂在被使用时可将其良好的选择性呈现出来,药物中的蛋白质、较直等可与该澄清剂选择性地共沉,同时与其他类型的絮凝剂相比,其不仅使用相对简便,同时还具有安全无毒的功效,不会给药材中的其他有效成分造成影响,在水提纯工艺技术中,其使用效果优于普通的乙醇,可以帮助缩短药材加工的周期,控制提纯成分,经由该种澄清剂制备出的干膏类药品具有良好的吸湿性。

因此可知在处理滇丹参药材时,需要控制精制水提液的工作,陈家勇絮凝澄清的方法相对关键,采用絮凝澄清的的技术手段之后,絮凝剂的使用量被缩小,试验造成的污染也比较少,在纯化与提取的环节中也不会出现过多地损失丹酚酸B成分的问题,因此可在制药过程中推广该技术手段。

参考文献

[1]徐桃枝,晏永新,何爱英,廖春玲.(丹参总酚酸纯化工艺研究[J].江西化工,2018(2).

[2]石功德,周静,李敏,虞立,金伟锋,李晓红.基于r语言的益气活血方药中丹酚酸b提取工艺研究[J].中国中医急症,2017(10),1700-1702.

[3]曾文雪.交联聚维酮与丹参中丹酚酸b的配伍研究[J].江西中医药,2017,48(11),63-66.

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