捧兴通脉颗粒对高脂乳剂致高脂血症大鼠的影响

陈昱晓， 韦立群， 张宇薇， 许立拔， 蒋伟哲， 付书婕

（广西医科大学药学院，广西南宁 530021）

随着人们生活水平的提高，肥胖已成为全球广泛存在的健康问题，它常伴有高脂血症，是动脉粥样硬化、脑卒中、冠心病、心肌梗死、猝死等疾病的重要诱因。肝脏负责脂质和脂蛋白代谢，是机体营养代谢的重要器官，脂质摄入过量时会导致肝损伤，继而引发脂质代谢紊乱[1］。

捧兴通脉颗粒是广西壮要方医院的医疗机构制剂，已获医疗机构制剂注册批件 （桂药制字M20170005），由玉郎伞、姜黄、广山楂、决明子等广西特色壮药材组成，具有护肝降脂的作用，主要用于高血脂症、脂肪肝等疾病的治疗，临床疗效显著，已列入科技部-中央引导地方科技发展专项资金项目、广西创新驱动发展专项-科技重大专项。研究表明，玉郎伞多糖、总黄酮、皂苷等成分具有护肝降脂的作用[2-6］，而姜黄素、山楂总黄酮、决明子总蒽醌等具有治疗脂肪肝的作用[7-9］。本实验采用高脂乳剂建立大鼠高脂血症模型，观察捧兴通脉颗粒降血脂和改善肝功能的作用，为其临床应用和深入研究提供理论和实验依据。

1 材料

1.1 动物 雄性Wistar大鼠，SPF级，体质量180～200 g，由广西医科大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK（桂）2009-0002，饲养于广西医科大学药学院标准实验室，自由饮水摄食。

1.2 试药 捧兴通脉颗粒 （6 g／袋）购自广西壮要方医院，批号20130301；血脂康胶囊购自北京北大维信生物科技公司，批号2013072。胆固醇购自广州威佳科技有限公司，批号20130826；丙硫氧嘧啶购自上海朝晖药业有限公司，批号1401F11；精制猪油为自制；胆固醇 （TC）、甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白胆固醇 （HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇 （LDLC）、载脂蛋白A1（ApoA1）、ApoB、谷丙转氨酶（ALT）谷草转氨酶 （AST）试剂盒购自上海执诚生物科技有限公司，批号 NOVL017、NOVL011、AUGK008、NOVL009、 DECL008、 OCTL012、 NOVL002、 NOVL012。

1.3 仪器 7100型全自动血生化分析仪 （日本日立公司）；Micro17R型高速低温离心机、FORMA991型-80℃超低温冰箱、Multiskan G0型全波长酶标仪 （美国赛默飞世尔科技公司）；EL602型电子天平 （0.01 g，瑞士梅特勒-托利多公司）；UW620H型电子天平 （0.001 g，日本岛津制作所）。

2 方法

2.1 药液配制 取颗粒3袋 （18 g），加纯净水至60 mL，充分混匀，即得高剂量药液 （300 mg／mL），同法倍比取颗粒，配制低、中剂量药液 （75、150 mg／mL）。

2.2 分组及给药 大鼠适应性饲养7天后取80只，随机选取其中12只作为空白组，按10 mL／kg剂量灌胃给予等体积纯净水，其余大鼠按相同剂量灌胃给予高脂乳剂 （配方参考余学钊等[10］报道，即20%猪油+6%胆固醇+0.2%丙硫氧嘧啶+10%吐温-80+63.8%水，机械混合，冷冻保存，使用前水浴融溶），每天1次。21 d后，大鼠眼眶后静脉丛采血，测定TC水平。

选取TC水平在2.8～6.0 mmol／L之间的模型大鼠60只，随机分为模型组、血脂康组 （0.2 g／kg）及捧兴通脉颗粒低、中、高剂量组 （0.8、1.5、3.0 g／kg），每组 12只。每天早上除空白组大鼠按10 mL／kg剂量灌胃给予纯净水外，其余大鼠按相同剂量灌胃给予高脂乳剂；每天下午除空白组、模型组大鼠按相同剂量灌胃给予纯净水外，其余大鼠按相同剂量灌胃给予相应药液，每天上、下午各灌胃1次，每周称定大鼠体质量并调整给药量，连续6周。

2.3 血清生化指标检测 给药3、6周，大鼠眼眶后静脉丛采血，通过全自动血生化分析仪进行检测。

2.3.1 血脂 测定TCHO、TG、HDLC、LDLC水平。

2.3.2 血脂综合指数和动脉硬化指数 根据血脂水平，计算血脂综合指数 （LCI， TC×TG×LDLC／HDLC）、 动脉粥样硬化指数 [AI， （TC-HDLC） ／HDLC］[11-12］。

2.3.3 血清载脂蛋白 测定载脂蛋白A1（ApoA1）、载脂蛋白 B （ApoB） 水平，并计算两者比值 （ApoA1／ApoB）[13］。

2.3.4 血清肝功能指标测定ALT、AST水平。

2.4 肝脏组织病理学检查 末次采血结束后处死大鼠，取出部分肝组织，10%中性福尔马林固定，苏木素-伊红（HE）染色，光镜下检查肝组织病理变化。

2.5 统计学分析 通过SPSS17.0软件进行处理，数据用±s）表示，符合正态分布和方差齐性者，采用One-Way ANOVA分析，差异有统计学意义则组间采用LSD-t进行两两比较分析；不符合正态分布或方差齐性者，采用Kruskal-Wallis H分析，差异有统计学意义则组间采用Mann-Whitney U进行两两比较分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 体质量 表1显示，与空白组比较，模型组大鼠体质量显著降低 （P＜0.01）；与模型组比较，捧兴通脉颗粒组大鼠体质量无明显变化 （P＞0.05）。

表1 捧兴通脉颗粒对大鼠体质量的影响 （g，n＝12）

表1 捧兴通脉颗粒对大鼠体质量的影响 （g，n＝12）

注：与模型组比较，▲▲P＜0.01

组别 剂量／（g·kg-1） 给药前 给药后3周 给药后6周空白组 — 345.2±25.4▲▲ 381.8±26.9▲▲ 407.2±32.8▲▲模型组 — 300.4±12.7 298.2±17.9 280.0±19.6血脂康组 0.2 301.9±15.2 298.1±18.6 280.4±25.3捧兴通脉颗粒组 0.8 305.5±12.3 300.6±20.6 279.6±28.8捧兴通脉颗粒组 1.5 303.4±15.4 301.0±17.1 292.7±30.1捧兴通脉颗粒组 3.0 295.0±8.2 286.8±12.2 272.0±23.2

3.2 血脂指标 表2～3显示，与空白组比较，模型组给药后第3、6周大鼠血清TC、TG、LDLC水平显著升高（P＜0.01）， HDLC水平显著降低 （P＜0.01）； 与模型组比较，捧兴通脉颗粒组给药后第3周TC、TG、LDLC水平显著降低 （除低剂量组TC水平外） （P＜0.05，P＜0.01），同时高剂量组HDLC水平显著升高 （P＜0.05），给药后第6周四者水平均有明显变化 （P＜0.05，P＜0.01）。

表2 捧兴通脉颗粒对大鼠血脂指标的影响 （第3周） （mmol／L，， n＝12）

表2 捧兴通脉颗粒对大鼠血脂指标的影响 （第3周） （mmol／L，， n＝12）

注：与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

组别 剂量／（g·kg-1） TC TG HDLC LDLC空白组 — 1.63±0.28▲▲ 0.46±0.16▲▲ 2.93±0.53▲▲ 0.46±0.15▲▲模型组 — 5.66±0.85 0.76±0.24 1.96±0.66 3.97±0.93血脂康组 0.2 4.54±0.99▲ 0.63±0.19▲ 2.55±0.50▲ 2.68±0.79▲▲捧兴通脉颗粒组 0.8 4.55±1.35 0.56±0.19▲ 2.19±0.38 3.28±0.56▲捧兴通脉颗粒组 1.5 3.63±1.38▲▲ 0.43±0.10▲▲ 2.27±0.49 2.91±0.58▲▲捧兴通脉颗粒组 3.0 4.28±1.47▲ 0.57±0.25▲ 2.45±0.54▲ 3.03±0.44▲▲

表3 捧兴通脉颗粒对大鼠血脂指标的影响 （第6周） （mmol／L，x±s， n＝12）

3.3 血脂综合指数和动脉硬化指数 表4～5显示，与空

白组比较，模型组给药后第3、6周大鼠血清LCI、AI显著升高 （P＜0.01）；与模型组比较，捧兴通脉颗粒组给药后第3、 6周两者显著降低 （P＜0.05， P＜0.01）。

表4 捧兴通脉颗粒对大鼠血脂综合指数和动脉硬化指数的影响 （第3周）s， n＝12）

表4 捧兴通脉颗粒对大鼠血脂综合指数和动脉硬化指数的影响 （第3周）s， n＝12）

注：与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

组别 剂量／（g·kg-1） LCI AI空白组 — 0.12±0.05▲▲ -0.44±0.11▲▲模型组 — 10.12±6.35 2.18±1.11血脂康组 0.2 3.57±3.42▲▲ 0.84±0.57▲▲捧兴通脉颗粒组 0.8 4.13±2.71▲▲ 1.16±0.80▲捧兴通脉颗粒组 1.5 1.94±0.74▲▲ 0.64±0.66▲▲捧兴通脉颗粒组 3.0 3.57±2.64▲▲ 0.83±0.69▲▲

表5 捧兴通脉颗粒对大鼠血脂综合指数和动脉硬化指数的影响 （第6周）， n＝12）

表5 捧兴通脉颗粒对大鼠血脂综合指数和动脉硬化指数的影响 （第6周）， n＝12）

注：与模型组比较，▲▲P＜0.01

组别 剂量／（g·kg-1） LCI AI空白组 — 0.19±0.08▲▲ -0.09±0.50▲▲模型组 — 13.82±11.22 2.05±1.01血脂康组 0.2 0.83±0.48▲▲ 0.36±0.52▲▲捧兴通脉颗粒组 0.8 1.90±1.12▲▲ 0.59±0.79▲▲捧兴通脉颗粒组 1.5 1.72±1.14▲▲ 0.57±0.53▲▲捧兴通脉颗粒组 3.0 1.07±0.95▲▲ 0.43±0.88▲▲

3.4 血清载脂蛋白 表6～7显示，与空白组比较，模型组给药后第3周大鼠血清ApoA1水平无明显变化 （P＞0.05）， ApoB 水平显著升高 （P＜0.01）， ApoA1／ApoB 显著降低 （P＜0.01），而给药后第6周三者均有明显变化 （P＜0.05，P＜0.01）；与模型组比较，捧兴通脉颗粒组给药后第3周三者无明显变化 （P＞0.05），给药后第6周均有明显变化 （除中剂量组ApoA1水平外） （P＜0.05，P＜0.01）。

表6 捧兴通脉颗粒对大鼠血清载脂蛋白的影响 （第3周）（mg／dL， s， n＝12）

表6 捧兴通脉颗粒对大鼠血清载脂蛋白的影响 （第3周）（mg／dL， s， n＝12）

注：与模型组比较，▲▲P＜0.01

组别 剂量／ApoA1 ApoB ApoA1／（g·kg-1） ApoB空白组 — 0.07±0.04 0.04±0.03▲▲ 3.64±4.08▲▲模型组 — 0.05±0.03 0.12±0.03 0.52±0.40血脂康组 0.2 0.09±0.04 0.08±0.02▲▲ 1.38±0.97捧兴通脉颗粒组 0.8 0.08±0.04 0.10±0.03 0.88±0.52捧兴通脉颗粒组 1.5 0.07±0.04 0.11±0.04 0.85±0.66捧兴通脉颗粒组 3.0 0.09±0.05 0.10±0.03 1.06±0.65

表7 捧兴通脉颗粒对大鼠载脂蛋白指标的影响 （第6周）（mg／dL， s， n＝12）

表7 捧兴通脉颗粒对大鼠载脂蛋白指标的影响 （第6周）（mg／dL， s， n＝12）

注：与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

组别 剂量／ApoA1 ApoB ApoA1／（g·kg-1） ApoB空白组 — 0.15±0.04▲▲ 0.04±0.02▲▲ 6.52±4.82▲▲模型组 — 0.04±0.02 0.14±0.03 0.34±0.19血脂康组 0.2 0.08±0.05▲ 0.10±0.03▲▲ 0.92±0.59▲▲捧兴通脉颗粒组 0.8 0.07±0.03▲ 0.08±0.04▲▲ 0.95±0.77▲▲捧兴通脉颗粒组 1.5 0.09±0.04 0.08±0.02▲▲ 1.17±0.61▲▲捧兴通脉颗粒组 3.0 0.08±0.04▲ 0.09±0.03▲▲ 1.14±1.00▲▲

3.5 血清肝功能指标 表8显示，与空白组比较，模型组给药后第3、6周大鼠血清ALT、AST水平显著升高 （P＜0.01）；与模型组比较，捧兴通脉颗粒组给药后第3周两者水平显著降低 （除中剂量组ALT水平外） （P＜0.05，P＜0.01）， 给药后第 6周亦然 （P＜0.05， P＜0.01）。

表8 捧兴通脉颗粒对大鼠肝功能指标的影响 （U／L， n＝12）

表8 捧兴通脉颗粒对大鼠肝功能指标的影响 （U／L， n＝12）

注：与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

组别 剂量／（g·kg-1）第6周ALT AST ALT AST第3周空白组 — 53.2±23.9▲▲ 111.9±24.0▲▲ 63.8±20.4▲▲ 114.9±13.7▲▲模型组 — 112.0±16.7 151.1±26.3 128.3±18.3 179.7±52.1血脂康组 0.2 98.7±11.5 131.2±12.6 106.9±22.6▲▲ 128.2±17.9▲捧兴通脉颗粒组 0.8 95.2±18.8▲ 123.0±23.3▲ 110.8±16.8▲ 136.3±28.0▲捧兴通脉颗粒组 1.5 98.8±13.7 121.4±12.6▲▲ 100.8±21.7▲ 124.9±16.2▲捧兴通脉颗粒组 3.0 93.2±15.9▲ 122.8±12.3▲▲ 103.9±27.1▲▲ 121.5±12.7▲▲

3.6 肝脏结构改变 图1显示，空白组大鼠肝体表面光滑，颜色暗红，无颜色、质地、体积异常，光镜下细胞大而结构完整，核圆居中，呈放射状分布，中央静脉区未见异常；模型组大鼠肝体呈粉黄色，包膜粗糙无光泽，肿胀而富有油腻感，光镜下肝细胞大小不一，排列不规则，肿胀核不居中，空泡增多，肝细胞脂肪样变性增多，部分细胞变性坏死；血脂康组、捧兴通脉颗粒组大鼠肝体颜色明显改善，颜色暗红，表面光滑，肿胀、坏死明显减轻，光镜下肝细胞排列有序，核圆居中，细胞结构轮廓清晰，未见空泡、肿胀和坏死，以血脂康组、捧兴通脉颗粒高剂量组肝细胞形态改善最为明显。

图1 各组大鼠肝组织病理学变化 （HE，×400）

4 讨论

高脂乳剂建立高脂血症大鼠模型时，具有省时省力、模型稳定等特点，可避免饲喂高脂饲料时大鼠食量不均、厌食症等问题[14］。另外，配方中加入丙硫氧嘧啶可增加胆固醇合成，诱发高脂血症，同时具有一定肝细胞毒性，可导致肝小叶损伤坏死，影响脂质、胆固醇、脂蛋白代谢[15］；加入猪油和胆固醇可增加脂质、胆固醇摄入量，快速稳定地建模。本实验发现，模型组大鼠血清TC、TG、LDLC、ApoB水平及LCI、AI显著升高，HDLC、ApoA1水平及ApoA1／ApoB水平显著降低，ALT、AST水平显著升高，肝组织细胞出现显著脂肪变性，表明建模成功。

结果表明，捧兴通脉颗粒治疗3、6周后，大鼠血清TC、TG、LDLC水平及LCI、AI降低，HDLC水平升高，以6周效果最佳，表明它具有良好的调节血脂作用。ApoA1和HDLC是抗高脂血症的积极因素，而ApoB是一种含糖的血浆载脂蛋白，主要负责运输胆固醇，使胆固醇沉积于动脉血管壁，促进动脉粥样硬化的形成[15］，捧兴通脉颗粒可升高血清 ApoA1水平，降低 ApoB水平，提高 ApoA1／ApoB，表明它可通过激活载脂蛋白功能，加速TC、TG、LDLC排泄，降低高脂血症对机体的损伤。同时，捧兴通脉颗粒可有效降低大鼠血清AST、ALT水平，明显改善肝组织细胞形态，减少肝细胞脂肪变性和肝小叶的结构变异，表明它对丙硫氧嘧啶、脂质、胆固醇造成的肝损伤具有一定的保护作用。

根据 《保健食品检验与评价技术规范》[16］结果判定标准，在血清TC、TG、HDLC 3项指标中TC、TG呈阳性即可判定样品具有辅助降血脂功能，而捧兴通脉颗粒对三者的作用均呈阳性，可认为它具有良好的调节血脂作用。

综上所述，捧兴通脉颗粒可明显降低血脂水平，改善肝功能及肝组织病理损伤，其机制可能与激活载脂蛋白功能及护肝作用有关。虽然高脂乳剂可建立高脂血症模型，但并不能建立肥胖模型，可能与肝损伤影响营养物质吸收和代谢有关，具体机制有待进一步研究，同时捧兴通脉颗粒是否对肥胖模型有效也尚需深入探索。