肉苁蓉微型饮片切制工艺优化

李祥溦， 李 喆， 任晓航， 魏晓峰， 刘博男， 史 辑，，∗

（1.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600；2.国家中医药管理局炮制原理解析重点实验室，辽宁大连 116600；3.辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁大连 116600）

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa（Schenk）Wight的干燥带鳞叶的肉质茎。具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效[1］。其主要活性成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、寡糖类等[2-4］。现代药理学研究表明肉苁蓉具有延缓衰老[5］、抗疲劳[6］等作用。临床上主要用于肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力等症，为常用的补肾壮阳药[7-8］。

中药饮片是经过炮制能直接用于中医临床和中成药生产的处方药，是国家基本药物，是中医临床处方药。目前临床上肉苁蓉饮片大多以直径4～5 cm，厚度0.5～1 cm的大厚片为主[4］，这种传统的饮片不仅在抓药时难以把控质量，而且在煎煮时也不利于有效成分的煎出，不利于中药饮片的规范使用[9］。随着现代生活节奏加快，采用传统秤称手抓的调剂方式，速度慢，精准度不够，煎出率低，劳动强度大，影响了饮片在临床的使用。2015年贾天柱提出了微型饮片的概念[10］。所谓微型饮片是指直径在0.5～1.0 cm左右的丁块状饮片，具有流动性好、煎出率高的特点。在保证药材原有的药效与性状的前提下，对其进行更加精细的切制，使饮片更小更均匀，更有利调剂人员的称定，有效成分的煎出[11］。与之相匹配的是，饮片调剂需要实现自动化和智能化[12］。因此微型饮片切制工艺研究的目的就是提高调剂人员工作效率，便于患者取药，让中药调剂接近西药调剂，让有限的饮片煎出更多的成分。

本实验采用正交试验的方法，以饮片截面直径、厚度、软化时间、干燥温度为影响因素，以休止角、浸出物、毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷等化学成分的含有量为评价指标，对肉苁蓉微型饮片的切制工艺进行优化，同时建立不同产地肉苁蓉微型饮片的指纹图谱，为其质量标准的建立及控制提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 E2695-2998型高效液相色谱仪 （美国Waters公司）；KQ-250DB型数控超声波清洗器 （超声功率250 W，频率40 kHz，昆山市超声仪有限公司）；AE240型电子分析天平 （十万分之一，瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 材料 肉苁蓉购自内蒙古王爷地苁蓉有限公司 （直径约3 cm，长约15 cm）和内蒙古阿拉善药材市场购买的荒漠肉苁蓉药材10批。经过辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticolaY.C.Ma干燥带鳞叶的肉质茎；松果菊苷对照品 （批号MUST-13080801，含有量≥98%）、毛蕊花糖苷对照品 （批号MUST-13122711，含有量≥98%）、异类叶升麻苷对照品 （批号 MUST-15081001M，含有量≥99.77%），均由成都曼斯特生物技术有限公司提供。乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 有效成分测定

2.1.2 样品溶液制备 取同一批次肉苁蓉药材9份，选择饮片截面直径 （A）、饮片厚度 （B）、软化时间 （C）、干燥温度 （D）为考察因素，净制后按照正交试验表中的润制时间软化，制备成表中所述的各规格微型饮片，再以不同的烘干温度烘干，即得。见表1。

2.1.3 供试品溶液制备 精密称定各肉苁蓉微型饮片10 g，置于200 mL圆底烧瓶中，依次加入100、80、80 mL水加热回流3次，每次1 h。合并提取液，置于500 mL量瓶中，定容，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，备用。

2.1.4 色谱条件 Ecosil C18色谱柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相甲醇 （A） -0.1%甲酸水溶液 （B），梯度洗脱 （0～45 min， 30% ～45%A； 45～50 min， 45% ～30%A；50～60 min，30%A）；体积流量1 mL／min；柱温25℃；检测波长 330 nm； 进样量 10 μL[13］。 见图 1。

表1 正交试验设计

图1 各成分HPLC色谱图

2.1.5 线性关系考察 取混合对照品溶液1、2、5、10、20 μL，在 “2.1.4”项条件下测定，以各成分质量浓度为横坐标 （X），峰面积为纵坐标 （Y）进行回归，结果见表2。

表2 各成分线性关系

2.1.6 精密度试验 吸取同一浓度混合对照品，在“2.1.4”项条件下测定6次，测得毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷峰面积的RSD依次为1.5%、1.7%、1.8%，表明该仪器精密度良好。

2.1.7 重复性试验 取同一批次、同一方法处理的肉苁蓉微型饮片6份，每份精密称取10 g，按 “2.1.3”项下方法制备供试品溶液，在 “2.1.4”项条件下测定，测得毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷峰面积RSD分别为1.7%、1.5%、1.4%，表明该方法重复性良好。

1) 一个问题可以首先被粗粒度地划分为若干子问题，CUDA使用块(Block)单元处理子问题，每个块都由一些CUDA线程组成，线程是CUDA中最小的处理单元。

2.1.8 稳定性试验 精密吸取同一份肉苁蓉微型饮片的样品溶液，在 “2.1.4”项条件下，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样，测得毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷的峰面积RSD分别为1.6%、1.7%、1.5%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.1.9 加样回收率试验 精密称定含各成分，经同一方法处理的肉苁蓉微型饮片6份，每份10 g，按比例加入对照品溶液，按 “2.1.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1.4”项条件下测定，测得毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷的含有量，并计算平均加样回收率分别为99.7%（RSD 1.5%）、 102.1%（RSD 1.7%）、 97.3% （RSD 1.5%）。

2.2 出膏率测定 取切制的肉苁蓉饮片各10 g，置于200 mL圆底烧瓶中，分别加入100、80、80 mL水加热回流3次，每次1 h。将每次回流提取液过滤后合并，减压浓缩至适量，将浓缩液转移至干燥至恒定质量的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃下干燥3 h，置于干燥器中冷却30 min，迅速精密称定质量，计算出膏率。公式为C＝M／m×100% （C为出膏率，M为药材干质量，m为干燥浸出物质量）。

2.3 休止角测定 采用倾斜法进行测定。于矩形盒内装满饮片，松实程度适中，将盒子逐渐倾斜至饮片开始倾出为止，其倾斜的角度即为休止角。设倾斜角的高为H，底边为L， 计算休止角θ， 公式为tanθ＝H／L。

2.4 最佳切制工艺优选 采用正交设计L9（34）优选肉苁蓉微型饮片的最佳切制工艺，以毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷为评价指标，选择饮片截面直径 （A）、饮片厚度 （B）、软化时间 （C）、干燥温度 （D）为考察因素，见表3。以综合加权评分法对实验数据进行处理分析。见表4～5。再根据综合水平计算公式进行评分，公式为综合评分＝40X／Xmax+40Y／Ymax+20Zmin／Z （X 为肉苁蓉微型饮片中毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷总量，Y为肉苁蓉微型饮片的出膏率，Z为肉苁蓉微型饮片的休止角。）

表3 因素水平

表4 正交试验设计与结果

表5 方差分析

在肉苁蓉微型饮片切制工艺中，饮片横截面直径（A）、饮片的厚度 （B）均具有显著影响，而软化时间（C）、干燥温度 （D）均无显著影响。根据生产需要药材不宜过硬、干燥时间不宜过长且能耗低，因此，最优工艺确定为饮片截面直径3～4 mm，饮片厚度1～2 mm，润制时间2 h，干燥温度70℃。

2.5 验证试验 分别按照最佳切制工艺切制肉苁蓉微型饮片3份，每份10 g，依次加入100、80、80 mL水加热回流3次，每次1 h。合并提取液，置于500 mL量瓶中，定容，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，在 “2.1.4”项条件下，测定毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷含有量，结果见表6，测得总含有量的平均值为1.18%，表明该切制工艺条件具有可操作性、重复性好，适用于肉苁蓉饮片有效成分的提取。

表6 验证试验结果

2.6 传统切制工艺 取传统大厚片工艺切制的肉苁蓉饮片3份，每份10 g，按 “2.5”项下方法提取，测定毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷含有量，结果见表7，测得总含有量的平均值为0.67%，结果表明，与传统切制相比，微型饮片的切制工艺显著提高了肉苁蓉饮片中有效成分的提取效率。

表7 传统切制工艺提取结果

3 指纹图谱建立[4］

选取在内蒙古阿拉善药材市场购买的荒漠肉苁蓉药材10批，按 “2.1.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1.4”项下条件下进样，得到液相色谱图，导入 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2004 A版，进行校正和匹配，即得肉苁蓉微型饮片的指纹图谱及相似度。结果见图2， 表 8。

图2 10批样品HPLC指纹图谱

表8 10批样品相似度

3.1 对照品溶液制备 同 “2.1.1”项下方法。

3.2 供试品溶液制备 同 “2.1.3”项下方法。

3.3 色谱条件 同 “2.1.4”项下方法。

3.4 方法学考察

3.4.1 精密度试验 精密吸取同一产地巴戟天供试品溶液，在 “2.1.4”项条件下连续测定6次，测得各色谱峰保留时间、峰面积RSD值均小于2%，表明该仪器精密度良好。

3.4.2 稳定性试验 精密吸取同一产地巴戟天供试品溶液，在 “2.1.4” 项条件下于 0、 2、 4、 6、 8、 10、 12、24 h分别进样，测得各色谱峰保留时间、峰面积RSD值均小于2%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

3.4.3 重复性试验 取同一产地巴戟天饮片，平行制备6份供试品溶液，在 “2.1.4”项条件下进样，测得各色谱峰保留时间、峰面积RSD值均小于2%，表明该方法重复性良好。

3.5 结果分析 通过对10批次肉苁蓉药材的指纹图谱鉴定，共分离得37个色谱峰，其中16个为共有指纹色谱峰，与对照品比对确定了其中3个指标性成分，分别为毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷。将原始微型饮片的色谱图作为参照图谱，与其他10个不同产地的肉苁蓉微型饮片色谱图对比，相似度均到达90%以上，符合指纹图谱的要求，表明该工艺适用于大多数批次肉苁蓉药材。

4 讨论

本实验所使用的肉苁蓉药材均按照药典方法进行了含有量测定，其毛蕊花糖苷、松果菊苷的含有量均符合2015年版 《中国药典》的相关规定 （毛蕊花糖苷、松果菊苷的总量不得少于0.3%）。

传统中药饮片一般用水煎煮[15］，本实验所得的微型饮片的提取工艺也均使用水为提取溶剂，加热回流的方式进行提取。可最大程度上保证与临床用药煎煮习惯相吻合，提高临床用药的针对性。

将微型饮片与传统大厚片的提取比较分析，表明微型饮片在出膏率、有效成分的煎出率方面明显要优于传统的大厚片，这可能是因为饮片体积减小，同质量饮片与提取溶剂的接触面积增大，有效成分提取更完全，体现了微型饮片的合理性与可行性。同时，休止角概念的引入，证明微型饮片的流动性较好，有利于研制和使用相应的调剂设备[16］，提高调剂室的调剂速度，为患者和医护人员节省更多时间。

本实验采用含有量测定与特征性图谱相结合的方法全面整体评价工艺的合理性，不仅能在化学成分含有量方面直观的体现出微型饮片切制工艺的优点及合理性，也能体现其普遍适用性。

中药饮片的炮制具有悠久的历史，其中尤以切制历史最为悠久。中药材经过切制才能被称为饮片[16］，但是长久以来中药饮片的发展却远远滞后于临床需要。现代中药的种植、采收、加工越来越规范，对于中药饮片的要求也越来越高。为了使中药饮片达到规格化一，流动可调的要求，微型饮片应运而生，将传统饮片的规格化大为小，达到可随意分配与调剂的程度[17］，这区别于原药材和粉末药材，除了具有较好的流动性外，还不失去药材原有的性状，煎煮时更不会糊锅，调配也更加方便快捷。微型饮片具有广阔的应用前景，也是中药饮片的发展趋势。