C反应蛋白基因单核苷酸多态性与家族遗传性抑郁症发病的关系研究

王士良 钟华 陆梅娟 宋国华 章晓梅 林敏 杨胜良 钱敏才

C反应蛋白（CRP）是一种广泛存在于脊椎动物体内的保守蛋白，其表达水平与炎症反应有关[1]。在非炎症情况下，人体内正常的血清CRP水平极低，很难检测出；但是在炎症最初的24～48h内，肝脏会大量产生CRP并分泌至血液循环中，使血清CRP水平提高2 000倍。近期研究表明，在慢性炎症条件下，人体内CRP水平会轻微增高，并维持在3～10mg/L[2]。研究人员已发现慢性炎症可能参与了抑郁症的发生过程，目前关于慢性炎症与抑郁症关系的假说主要有2个[3]：一是慢性炎症所导致的神经病理变化可能诱导了抑郁症的发生，而血清CRP水平上调与抑郁症发病并无直接因果关系；二是慢性炎症所导致的CRP水平上调，通过不明机制，最终导致了抑郁症的发生。尽管目前学术界投入了大量精力去试图精确描述抑郁症与CRP水平的关系以及相关机制，但由于抑郁症患者个体差异过大，仍无法得出统一结论。有研究发现，CRP基因单核苷酸多态性（SNPs）变异率和家族遗传性抑郁症（familial inheritance depression，fDEP）的发病率都大约为40%[4]。此外，在对同卵双胞胎的研究中发现CRP会影响抑郁症发病的基因通路[5]。并有研究发现特定的CRP SNPs可能会影响血清CRP水平[6]。笔者通过研究fDEP患者的CRP SNPs来进一步探讨CRP与抑郁症发病的关系。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2015年7月至2016年7月我院精神科确诊为抑郁症的男性患者60例作为fDEP组，年龄（45.09 ±8.12）岁；BMI（25.31± 5.01）kg/m2。纳入标准：（1）符合国际疾病分类（ICD-10）中抑郁症的诊断标准；（2）汉密尔顿抑郁量表（HAMD-17）评分＞17分；（3）一级亲属中至少有1名家族成员有抑郁症病史。排除标准：（1）患有慢性肝病、肾病、动脉粥样硬化、癌症、神经系统疾病、精神分裂症及其它慢性炎症性疾病。（2）长期使用胰岛素、糖皮质激素或者减肥药。另选取同期我院健康体检男性60例作为健康对照组，年龄（47.85±7.23）岁；BMI（26.64±4.22）kg/m2。两组间年龄、BMI等一般资料比较均无统计学差异（均P＞0.05）。所有纳入者均签署知情同意书，并经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 实验试剂及仪器 CRP单抗包被的聚苯乙烯珠子（日本Woko公司）；DNA分离提纯试剂盒（美国QIAGEN 公司，Cat No./ID：69504）；高通量分析仪器（美国罗氏公司，LightCycler 480）；化学分析仪（美国Abbott公司，Architect c16000）。

1.2.2 标本采集 两组受试者禁食8h，且在无大量运动12h以及无酒精摄入24h后抽取肘静脉血40ml，分置2根试管。第1管20ml血样用于检测相关血清生化指标。第2管20ml冷冻后进行DNA分离提纯。

1.2.3 血清生化指标水平检测 采用化学分析仪检测两组受试者各项血清生化指标，检测CRP时将CRP单抗包被在聚苯乙烯珠子上，使得CRP抗原富集并增强检测灵敏度[7]（可以检测0.175～1 100mg/ml的CRP）。检测结果以对数转化形式进行标准化。

1.2.4 DNA提取和基因多态性检测 按照试剂盒的说明书，分离并提取冷冻血样标本中的DNA。CRP基因定位于1号染色体上（1q21-23），包含2段外显子。通过使用Tagger algorithm和HapMap genotype（中国）的数据库进行分析预测，本研究选定了5个中国汉族人群常见的CRP SNPs多态性位点，包括rs3093059、rs1417938、rs1800947、rs1130864和rs1205位点，见图1。所有受试者的标本均采用高通量分析仪器进行SNPs的基因型检测，并采用相关软件进行不同基因型的计数统计（LightCycler 480 software release 1.5.1.62 SP1）。

图1 CRP蛋白的基因区域结构图和5个SNP位点的位置

1.3 统计学处理 采用SPSS v15.0统计软件。正态分布的计量资料以表示，组间比较采用t检验以及Welch校准。CRP基因多态性分布采用χ2检验并进行Bonferroni校准。不同CRP SNPs组间的血清CRP水平比较采用单因素方差分析以及Tukey后检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组各项生化指标的比较 fDEP组血清CRP水平明显高于对照组（P＜0.05），其它指标均无统计学差异（均P＞0.05），见表 1。

表1 两组间各项生化指标的比较

2.2 两组CRP SNPs的比较 rs1417938位点的A等位基因以及rs1205的C等位基因，其出现频率在fDEP组中较对照组明显增高。此外，rs1800947的GG/CC比例也在fDEP组中明显增高。另外2个常见的SNPs分布在两组中并无统计学差异。见表2。

2.3 不同CRP基因型受检者血清CRP水平的比较rs1205的低频等位基因型CC（fDEP组20例，健康对照组4例）和rs1417938的低频等位基因型AA（fDEP组26例，对照组2例），均可以显著上调血清CRP的表达水平（均P＜0.01）。此外，rs1800947位点的低频等位基因型CC（fDEP组4例，健康对照组16例）显著下调了血清CRP水平。详见表3。

3 讨论

本研究检测了fDEP患者和健康对照的人口统计学指标以及多种生理生化和炎症指标，结果发现只有血清CRP水平发生了明显变化，即血清CRP水平在fDEP患者中显著增高。此外，笔者还发现了3个CRP SNPs位点的亚型分布与fDEP发病有关，且并未受到受试者年龄以及生理状况的影响。

表2 两组CRP SNPs的比较[例（%）]

表3 不同CRP基因型受检者血清CRP水平的比较

目前很多关于CRP和抑郁症的研究结论仍有争论。Luciano等[8]通过两组排除年龄和性别的同期群分析研究中发现，抑郁症伴随的情绪症状与CRP SNPs分布在老年人中呈正相关；rs1800947的不同等位基因表型与抑郁症有中等程度的关联性。Almeida等[9]在3 700多例70岁以上男性中展开的研究发现，rs1205的等位基因表型与抑郁症发病相关。此外，还有一组研究表明CRP基因的特定单倍体多态性与血清CRP水平和抑郁症发病呈正相关[10]。这些结果均提示，特定的CRP SNPs可能与抑郁症发病相关。

考虑到患者高度的个体差异性可能导致了既有研究结论的不一致，目前学术界的共识停留在特定的CRP SNPs可以调节血清CRP水平[11-14]。比如，rs1205的CC等位基因被发现可以上调血清CRP水平[15]。在本研究中，笔者同样发现rs1205的CC等位基因以及rs1417938的AA等位基因可以显著上调血清CRP水平，这个结果与既有研究相一致。同时笔者还发现rs1800947的CC等位基因表现出了明显下调CRP水平的趋势。尽管详细的机制仍然不明确，笔者推测这种调节可能与基因的表观遗传学条件相关，也就是说，上述几个SNPs位点有可能发生在CRP基因的表达调节区域。

基于上述结论，并考虑到抑郁症和CRP SNPs均有40%的可遗传性，本研究探讨了可遗传性CRP SNPs是否可能通过上调血清CRP水平从而影响了抑郁症的发病。本研究结果发现，rs1417938的A等位基因亚型，rs1205的C等位基因亚型以及rs1800947的G等位基因亚型均与fDEP的发病有相关性。这一结果表明特定的CRP SNPs分布可能导致fDEP发病。考虑到在多数可遗传的疾病中，遗传因素要比散发性的环境致病因素占据更大的比重，本研究结果高度提示CRP SNPs可能会导致fDEP的发病。

当然，本研究的缺陷在于未能找出阐明CRP SNPs能够调节血清CRP水平的机制直接证据，这就导致只能依靠现有文献来推断rs1417938和rs1205的低频等位基因确实可以上调血清CRP水平，从而很难排除CRP SNPs可能通过其它原因导致抑郁症发病，并继而诱导CRP水平增高的可能。但是，本研究发现特定的可遗传CRP SNPs的分布频率在fDEP患者中显著高于健康对照组，而且这些CRP SNPs都伴随了血清CRP水平增加。这个结果高度提示CRP SNPs与抑郁症的发病有相关性。此外，本研究结果同样发现fDEP患者血清CRP水平明显高于健康对照组，这个结果提示血清CRP水平升高也可能与抑郁症发病相关。考虑到最新的研究提示[16]，血清CRP水平上升，可以通过特定基因通路导致抑郁症的发病，笔者推测特定的CRP SNPs很有可能导致了血清CRP水平增高并因而诱导了抑郁症发病。总之，血清CRP水平增高很可能是fDEP的一个发病机制，并为抑郁症的发病和诊断提供了新的思路。