白喉杆菌培养基质控标准研究

朱立娜 任苗 田磊 薄晓菲 周峻凯

北京生物制品研究所有限责任公司 北京 100176

1 资料与方法

白喉杆菌培养基，氨氮含量是制备的关键质量标准，也是进行白喉杆菌培养过程中所涉及的主要氮源。本研究则以此为主要内容，探究其培养基制备过程中的质量控制标准，做出具体分析工作如下。

1.1 研究材料

磷酸氢二钠来自北京益利精细化学品有限公司，无水氯化钙和乳酸的选择则为国药集团化学股份有限公司所生产的，其中所应用的酵母浸液，胰酶牛肉消化液和麦芽糖稀等选择北京生物制品研究所培养基室所提供，酵母浸出粉英国进口。而白喉的絮状反应抗毒素标准品，由中国食品药品检定研究院所提供[1]。

1.2 研究方法

白喉杆菌培养基制备：称取酸氢二钠适量，保证称取剂量准确性，将其酵母浸液和胰酶牛肉消化液进行混匀，并将15%氯化钙溶液和乳酸进行应用，并将含量为20%的氢氧化钠溶液进行调碱，实现对PH 值进行调节，将其调节到8．3 左右，加热煮沸，加入酵母进出粉，然后将其制作成白喉杆菌培养基。

培养基氨氮含量对白喉杆菌产毒的影响效果：在实际的操作过程中，分别制备氨氮含量≥1．8g/L 和＜1．8g/L 的白喉杆菌培养基，分别制备6 批，并将其应用在白喉杆菌大罐中进行培养，并将《中华人民共和国药典》进行借鉴，主要选择2015 年版，将其中的三部，类毒素絮状单位，实现测定工作，主要是测定2 种配方培养基所培养收获的白喉毒素絮状单位，将其培养基的最适氨氮含量进行确定。

培养基氨氮含量和白喉杆菌产毒之间的相关性：根据最适培养基配方所确定的配比方案，制备10 批白喉杆菌培养基，根据公司的吸附白喉疫苗生产工艺，对白喉杆菌进行大罐培养，并注意对所收获的白喉毒素絮状单位进行监测，对其系数进行计算，并注意对培养基氨氮含量和白喉杆菌的产毒相关关系进行分析[2]。

麦芽糖溶液配制：江米煮熟，并将麦芽搅碎，然后放置其中，进行搅匀处理，放置在温度为55 摄氏度的环境条件下，实现糖化处理5 小时，然后在其中加入氯化钙溶液和磷酸氢二钠，在给予其过滤处理后，将其配制成麦芽糖稀。并将质量检测的操作细则进行应用，根据碱性酒石铜滴定法相关内容，实现对麦芽糖稀浓度的检测配制。

麦芽糖稀浓度和白喉杆菌产毒间的相关性分析：配制10 批浓度为15%-20%的麦芽糖溶液，在此基础上，在白喉杆菌进行培养的过程中，加入大罐，完成大罐酸碱平衡，有效控制。更能够保证，麦芽糖稀所提供的碳源和能量稳定性。注意对所收获的白喉素絮状单位进行检测和计算。和白喉杆菌产毒间的相关关系分析[3]。

2 结果

在以氨氮质量浓度范围为准的基础上，对培养基进行大罐培养制备，其所收获的白喉毒素，得出其所对应的平均絮状单位为，氨氮含量≥1．8g/L． 291．83 Lf/ml 其中的白喉毒素絮状单位均符合规定要求，其所对应的下罐率达到100%。其统计学下，白喉杆菌培养基的氨氮含量会对白喉杆菌产毒造成的影响，均存在统计学意义（P ＜0．05）。氨氮含量＜1．8g/L 平均氨氮浓度1．675 平均白喉絮状单位169．17Lf/ml。氨氮含量≥1．8g/L 平均氨氮浓度2 平均白喉絮状单位291．83Lf/ml P ＜0．05

3 讨论

白喉杆菌培养基，从目前发展情况来看，白喉疫苗生产工艺中所对应的氨基酸，通常来自于胰酶牛肉消化液和酵母浸液中。在将其进行培养时，通常需要对初始培养基的氨氮进行监控，从而保证自由氨基酸被保持在一个相对稳定的范围内。氨氮含量是进行白喉杆菌培养基制备的关键质量标准，也是进行白喉杆菌培养过程中所涉及的主要氮源。因此，需要加强制备中的注意事项，本研究结果显示：在以氨氮质量浓度范围为准的基础上，对培养基进行大罐培养制备，其所收获的白喉毒素基本不变，得出其所对应的平均絮状单位为291．83Lf/ml，其中的白喉毒素絮状单位均符合规定要求，其所对应的下罐率达到100%。其统计学下，白喉杆菌培养基的氨氮含量会对白喉杆菌产毒造成的影响，均存在统计学意义（P ＜0．05）。

综上所述，就白喉杆菌培养基来说，将其对应的氨氮控制在1．8-2．0g/L 时，收获较高，将麦芽糖的溶液浓度进行有效控制，使其被维持在15%-20%，能够有效控制大罐酸碱度平衡，更有效的控制氮源。