艳山姜薄层色谱鉴别方法的建立

唐艺 陈舒忆 杨再清

【摘 要】目的：建立艳山姜的薄层色谱鉴别方法。方法：样品加入石油醚（60～90℃）5ml，振荡30min，离心，取上清液作为供试品溶液，另取艳山姜对照药材同法操作，作为对照品溶液。取供试品和对照品溶液各5μl点于硅胶板上，以石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。结果：所得的薄层色谱图谱有7个斑点，斑点清晰且分离效果和显色效果佳。结论：该鉴别方法操作简单，试剂少、时间短，定性特征明显、结果易于判定，可作为艳山姜的薄层鉴别方法。

【关键词】艳山姜;薄层色谱鉴别;对照药材

中图分类号： R284.1 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2019）06-0111-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.06.041

【Abstract】Objective：To establish a thin layer chromatography identification method of Alpinia zerumbet.Methods Petroleum ether（60-90℃）were added in samples with 5ml，stired for 30 minutes，and centrifuged，the upper liquid was taken as the test solution.Alpinia zerumbet was used as the control medicinal materials，and operated in the same way as the reference solution.The test and reference solutions were spreaded on the silica gel plate at 5μl，with etroleum ether（60-90℃）：ethyl acetate（9：1）as mobile phase，and 5% sulfuric acid solution as color developing reagent.Heated at 105℃ until the spots color were clear.Results The TLC chromatogram had 7 well-separated clear spots，the separation and color development effect were good.Conclusion The identification method had the advantages of simple operation，less reagents，short-time operation，obvious qualitative characteristics and easy judgment，and it can be used as a thin layer identification method for Alpinia zerumbet.

【Key words】Alpinia zerumbet;TLC;reference crude herb

艳山姜系姜科山姜属植物艳山姜Alpinia zerumbet（Pert）Burtt et.Smith的干燥成熟果實，生于海拔400～650m的林中荫处[1]，别名玉桃、草扣、大良姜、大草蔻、土砂仁[2]，是贵州省少数民族地区的传统习用药物，广泛分布于我国东南部至西南部各地。最早记载于《广州常见经济植物》，收录于2003版《贵州省中药、民族药质量标准》中。性味辛、涩，温;归心、胃、大肠经;具有温中燥湿，行气止痛，截疟的功效;用于心腹冷痛，胸腹胀满，消化不良，呕吐腹泻，疟疾等病症。挥发油是艳山姜的主要化学成分，具有显著的药理活性[3-6]，同时艳山姜药材质量标准未曾收载过薄层鉴别的检测方法，通过对艳山姜的研究，提取出艳山姜的挥发油成分，建立一种简便易行，专属性好的TLC色谱鉴别方法。

1 材料和仪器

1.1 材料：艳山姜原植物采集于贵州贞丰，经贵州中医药大学魏升华教授鉴定为姜科植物艳山姜Alpinia zerumbet（Pert）Burtt et.Smith，其干燥成熟果实作为对照药材（见图1）。

1.2 仪器设备：TLC PLATE HEATER Ⅲ薄层板加热器（瑞士CAMAG）;BSA224S万分之一电子天平（德国Sartorius）;KQ-500DE数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;HY-4A往复式调速多用振荡器（群安实验仪器有限公司）;硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂，批号：20180902）。

1.3 试剂试药：石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、香草醛、浓硫酸等（国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法和结果

2.1 对照药材溶液的制备：取艳山姜对照药材粉末（过3号筛）1g，加入石油醚（60～90℃）5ml，振荡30min，离心，取上清液作为对照药材溶液;

2.2 供试品溶液的制备：取5批艳山姜药材粉末（过3号筛）各1g，加入石油醚（60～90℃）5ml，振荡30min，离心，取上清液作为供试品溶液;

2.3 点样：用点样毛细管吸取对照药材溶液和供试品溶液各5μl，分别点于同一块硅胶G薄层板上;

2.4 展开：以石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）为展开剂，吸取10ml展开剂于展开缸中，放入硅胶G薄层板预饱和15min后展开，当溶剂前沿距硅胶G薄层板顶端1cm处，取出，晾干;

2.5 显色：喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。

2.6 结果：从下到上有7個清晰的斑点。见图2。

3 讨论

3.1 对照的选择

艳山姜的挥发油中含有β-蒎烯、α-蒎烯、β-水芹烯、莰烯、龙脑、樟脑、冰片等成分[5]。通过研究α-蒎烯、龙脑和冰片等对照品的薄层色谱，展开后均未得到理想的斑点，其中α-蒎烯对照品易分解，难购买，龙脑和冰片对照品在艳山姜中含量低，斑点不明显，展开时间长，故选择经过鉴定的艳山姜作为对照药材，展开后具有斑点多，易分离，信息量大等特点。

3.2 供试品溶液的制备

挥发油可按照中国药典2015版四部通则2204挥发油测定法[7]进行提取，但此方法提取时间长达6小时，操作复杂，不能满足薄层色谱鉴别快速和简便的特点。通过多次的试验研究，采用石油醚（60～90℃）能有效的提取挥发油等非极性化合物，溶剂只需5ml就能较好的提取出艳山姜的挥发油成分，可直接使用上清液进行点样，避免再次浓缩溶解，简化了提取过程;同时考察了超声提取和振荡提取两种方式，无显著差异，因超声仪产生较大的噪声，故选用振荡提取的方式。

3.3 展开剂的确定

根据挥发油的化学性质，考察了石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）和环己烷：丙酮（9：1）两组展开剂，结果显示前一组展开剂展开的斑点清晰度、分离度、Rf值等参数较后一组好，故确定石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）为展开剂。

4 结论

综上所述，制定的艳山姜薄层色谱鉴别方法操作简便快速、斑点信息完整、专属性较好，能够准确的鉴别艳山姜药材，建议纳入艳山姜药材的质量标准中。

【参考文献】

[1]贵州植物志编辑委员会.贵州植物志[M].四川：四川民族出版社，1989：702.

[2]国家中医药管理局中华本草编委会，中华本草（第8册）[M].上海：上海科学技术出版社，2004（24）：607-608.

[3]张彦燕等.艳山姜化学成分及药理作用研究进展[J]. 中药药理和临床，2010，26（5）：179-181.

[4]徐旖旎等.基于NOS信号的艳山姜挥发油对ox-LDL诱导HAECs损伤的保护作用[J].中国实验方剂学杂志，2017， 23（15）：143-147.

[5]张彦燕等.正交试验法研究艳山姜挥发油保护脂多糖诱导HUVEC损伤的活性组分[J].中国实验方剂学杂志，2014. 20（20）：9-12.

[6]陶玲等.艳山姜果实挥发油对离体家兔胸主动脉条收缩性能的影响[J].中国医院药学杂志，2010，30（23）：1966～1969.

[7]国家药典委员会，中华人民共和国药典2015年版.四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：203.